果蝇的采集、饲养与性状观察

实验八果蝇的采集、饲养与性状观察【实验目的】了解果蝇的生活史，学会果蝇的采集饲养和管理方法。区别果蝇的雌雄及某些性状，为做果蝇的遗传实验练好基本功。【实验原理】是双翅目昆虫，具有生活史短，繁殖率高、饲养简便等特点，是研究遗传学的经典好材料。果蝇的生活史：卵→幼虫→蛹→成虫，最适温度20－25℃。从卵到成虫约10天，在25℃时成虫约活15天。连续30℃以上的温度能使果蝇不孕或死亡。卵：果蝇卵约长0.5毫米，外围是一层由细胞组成的六角形小格的包膜的卵壳，在背面的前端伸出一对触丝，使卵生产在柔软的食物不致下沉。幼虫期：幼虫从卵中孵化出来要经过两次脱皮，所以幼虫包括三个阶段（令）。蛹化：当幼虫准备准备化蛹时，它们从培养基中爬出来附在较干燥的表面，果蝇在末令幼虫的皮中化蛹，起初白、软，后渐色深、硬，最后发育成一个有成虫体型与器官的人体，这些转变完成以后，成体就从蛹壳的前端强挤出来。【实验材料及用具】1、果蝇（若干品种）：残翅；18＃野生型（5组）；22＃白眼（6－8组）；6＃短翅白眼；e＃黑檀体。2、用具：放大镜、培养瓶（可用纱布包裹的棉花球塞与牛奶瓶或大、中型指管做成）、三角瓶、软木塞、火柴、大头针、酒精灯、三角架、石棉网、烧杯、电子天平、玻璃棒，白纸、废洋铁罐头盒、标签纸、胶水、乙醚、红糖或白糖、琼脂、玉米粉（或面粉）、95％（或70～75％）酒精酵母菌液（用量极少，勿须另行培养，可向附近酒厂索取）。【实验方法】（一）果蝇的观察：①果蝇的生活史果蝇是完全变态发育的昆虫。它的生活史包括卵、幼虫、蛹及成虫四个发育时期。果蝇生活周期及各个发育阶段的时间长短与温度关系十分密切。超过30℃，能使果蝇不育和死亡。温度降低，会使果蝇生活周期延长，生活力降低。一般在20℃～25℃下培养最为合适。在适宜的温度下，大约经过10～14天即可繁殖一代。②雌雄果蝇的鉴别将麻醉的果蝇置于载波片，在显微镜下（4倍或10倍）鉴别雌雄果蝇。1)体型：雌果蝇体型较大，雄的较小。2)腹部末端：雌果蝇腹部椭圆末端稍尖，雄果蝇末端钝圆。3)腹部背面：雌果蝇有明显5条黑色条纹，雄果蝇的有3条，前2条细，后1条宽，延至腹面，肉眼可见腹部末端有一明显黑点。4)腹部腹面：雌果蝇有较明显的6个腹片，雄果蝇有4个腹片。5)性梳：雄果蝇第一节足底侧最上部附足前端表面有黑色鬃毛－性梳。③原种培养1)先检查，看果蝇有没有混杂。2)每瓶接种3-4对，空瓶在上面，果蝇能往上爬入瓶中，然后再数雌雄数目。3)贴上标签，注明品名，日期，培养人。（二）果蝇的采集与饲养：①果蝇的采集果蝇主要以酵母为食，腐烂的水果，是酵母的天然培养基，所以在葡萄架下，花坛里，樱桃树上，甚至水果店里，只要有烂水果的地方，都能采集到大批果蝇。采集时，将诱饵（烂水果）放在已用过的洋铁罐头盒里。再插入一块硬纸片以防果蝇被食物黏住而淹死，然后将此罐置于选好的采集地点，隔一天再去收集果蝇。收集时，先将一个有活叶门的硬纸盖，盖在罐头盒上，然后用右手拿住广口瓶，并将瓶口对准活叶门，堵好盖，一手轻轻地打开活叶门，这时罐内的果蝇由于趋光性而陆续飞入广口瓶。再将广口瓶内的果蝇换入饲养瓶（换瓶操作技术可参看下节），塞好瓶口，带回实验室做进一步分类鉴别。收集果蝇的装置如图9。②果蝇的饲养管理（甲）培养基制作取1.5克琼脂，放在50毫升水中煮沸，直到琼脂完全溶解为止。加入13.5克红糖或白糖，边调和边加热，再把10克玉米粉（或面粉）与25毫升水混合调匀后，倒入正在加热的琼脂糖溶液。另外，称取0.2克苯甲酸，溶解于少量95％的乙醇以后，也倒入该溶液，不断搅拌煮沸2～3分钟，做成糊状，趁热分别注入消过毒的干燥培养瓶中（勿使瓶口及瓶壁沾污）。倒入培养基的厚度约2厘米，在培养基中插入一张消过毒的干燥硬纸片，以扩大果蝇的活动场所。待培养基冷却后，用酒精棉花擦去瓶壁上的水珠。因为瓶里有了积水，移入的果蝇容易淹死或粘住。然后滴入酵母菌液数滴，摇动瓶子，使其散开。最后在瓶口塞上用纱布包棉花做成的、消过毒的棉塞。注意棉塞不可太紧，否则空气不易流通。饲养果蝇的用具，一般都必须经过消毒，若无高压消毒器，可放在蒸锅中消毒。（乙）果蝇的检查和培养对果蝇进行检查时，可用乙醚麻醉。方法是取一个与培养瓶口径大小相一致的干燥三角瓶（或牛奶瓶），配上一个合适的软木塞，软木塞的瓶口一端，用大头针牢牢固定上少许棉花，做为麻醉瓶。操作时，先把麻醉瓶的瓶塞打开，取盛有待检果蝇的培养瓶一只，把瓶口倒转朝下，瓶底向强光源，因为果蝇有趋光性，所以大多数都集中于瓶底，此时迅速打开培养瓶塞，将瓶口对准麻醉瓶口，轻轻敲击培养瓶，使果蝇震落入麻醉瓶后，在麻醉瓶塞的棉花上滴几滴乙醚，立即把麻醉瓶盖好。由于果蝇对乙醚特别敏感，过半分钟后便被麻醉。然后把它倒在白纸（或白瓷板）上，用放大镜仔细检查其性别、眼睛及身体的颜色，翅的长短残缺。如果在性状上有差异，则应该把它们分别放入到几个培养瓶中进行培养（注意！麻醉的果蝇放入培养瓶时，应将培养瓶横卧放置，待果蝇清醒过来后，再将瓶直立起来，这样可避免果蝇粘在培养基上。培养瓶应该编上号数，注明名称，培养日期，并且登记在记录本上）。麻醉果蝇时，麻醉的时间不宜过长，否则会致死。如果麻醉的目的只是作观察，不需要保留，麻醉致死也无妨。如果需要留作种蝇，只宜轻度麻醉。假若果蝇身体与翅呈45°角翘起，说明已经致死。死果蝇应扔入煤油瓶或酒精瓶收集处理。作保留原种用的果蝇培养瓶中，亲本的数量一般每瓶5～10对（要注意千万不能混杂有别种果蝇），每一原种至少要保留两套。培养温度可控制在10～15℃。若作为扩大繁殖，温度也可以稍微升高几度。培养时要避免日光直射。每2～4周更换一次培养基。在换瓶后的三天以内，注意检查食物是否已经发霉，如果发现有少量霉点时，应立刻调换培养基。在调换下来的，已污染的培养瓶中，滴入些酵母菌液，使食料较快的发酵，或用烧红的铁丝，在发霉的部分烫过，或将发霉的部分用消过毒的铲子刮去后，可用作一般扩大繁殖用的培养瓶，若发霉太严重，则应当弃之不用。（三）果蝇的饲养方法：饲养果蝇的培养基配方，研究的很多，下面仅举几例可供选择，也可以因地制宜，就地取材，创造更合适的配方。配方一：配方二：配方三：配方四：补充配方：糖6.2克，加琼脂0.62克，在加水38毫升，煮沸溶解。B：玉米粉8.25克，加水38毫升，加热搅拌均匀后，再加0.7克酵母粉。A和B混合加热成糊状后，加0.5毫升丙酸，即可分装到培养瓶中。丙酸的作用是抑制霉菌污染。为了防止霉菌生长，在配制培养基时，可加入少量霉菌抑制剂（如苯甲酸），也可以在使用前向瓶中注入一薄层70～75％酒精，等一会倒出酒精，把瓶倒置，等到酒精完全蒸发后，再加棉塞。使用时接种几滴酵母菌液。1、配制时先将琼脂放入烧杯中。2、用水将玉米粉调成糊状，加入烧杯中煮沸，最后加糖煮沸数分钟即可，滴入乙酸即可。3、待培养基稍凉，每个广口瓶倒入10-30mL的培养基，冷却后加入少量酵母粉。4、果蝇的麻醉：将所需麻醉的果蝇引入一新瓶中，以乙醚作为麻醉剂（三滴左右），在其棉塞上滴上数滴乙醚，制成麻醉瓶。瓶内果蝇全部跌落不动时，即可进行观察。