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试卷编号NO：高等函授教育《植物组织培养》试题学号：姓名：题号一二三四五总分分数一名词解释：（10*2分=20分）1、植物细胞组织培养2、细胞全能性3、脱分化4、外植体5、试管苗驯化6、间接不定芽发生7、双极性8、微体嫁接9、人工种子10、体细胞无性系变异二填空：（30*1分=30分）1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是和。2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。3、培养用具的常用灭菌方法有、、。4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。6、植物离体授粉技术通常包括、、三个方面。7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培养继代时间可以长些，继代一次。8、外植体器官发生的三种途径包括、、。9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、、。11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用来衡量细胞培养效果。13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。三计算题（1*10分=10分）某培养基的配方是MS＋BA2.0mg/L＋NAA0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0mg/ml，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分）1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？2、简述外植体消毒的一般步骤。3、胚培养在科学研究及生产实践中有哪些应用？4、结合花粉培养，简述看护培养法。5、如何减轻植物组织培养中试管苗玻璃化现象？五论述题（1*15=15分）试述植物组织培养中影响器官分化的因素有哪些？在实验研究中应该如何考虑这些因素以达到较好的器官分化效果？植物组织培养参考答案一名词解释1、植物细胞组织培养：指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整的植株。2、细胞全能性：指一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。3、脱分化：在细胞组织培养中，一个成熟细胞或分化细胞转变成为分生状态的过程，即形成愈伤组织的过程。4、外植体：在植物细胞组织培养中，由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。5、试管苗驯化：植物组织培养中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表几乎没有保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到“自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程。6、间接不定芽发生：指外植体先脱分化产生愈伤组织，再分化形成芽器官。7、双极性：指在细胞发育的初期其内含物的分布具不均匀性，形成胚性细胞后具有发育成芽端和根端的潜在能力。8、微体嫁接：指将0.1~0.2mm的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。9、人工种子：指通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外面还被有特定物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。10、体细胞无性系变异：在植物组织和细胞培养中，培养细胞及再生植株往往会出现各种变异，称为体细胞无性系变异。二、填空1、植物脱毒离体快繁2、不定器官形成（器官形成）体细胞胚胎发生3、干热灭菌高压蒸汽灭菌灼烧灭菌4、高温高压灭菌过滤灭菌5、愈伤组织器官的分化6、胚珠试管受精离体子房授粉雌蕊离体授粉7、1周2-4周8、腋芽萌发不定芽发生体细胞胚胎发生9、单倍体二倍体胚乳培养10、指示植物法抗血清鉴定法电子显微镜鉴定法酶联免疫测定法11、2,4-D器官分化12、植板效率13、秋水仙素三、计算题大量元素母液：400ml/20=20ml微量元素母液：400ml/500=0.8ml铁盐母液：400ml/100=4ml有机母液：400ml/50=8mlBA母液：0.4L*2.0mg/L/1.0mg/ml=0.8mlNAA母液：0.4L*0.5mg/L/0.1mg/ml=2ml蔗糖：400g*2.5%=10g琼脂粉：400g*0.7%=2.8g四、简答题1、造成组织培养过程中污染的原因很多，如工作环境及仪器的因素、培养基及器皿灭菌不彻底、外植体带菌、操作时不遵守操作规程等。造成污染的病原主要分为细菌和真菌两大类。真菌性污染主要指霉菌引起的污染。一般接种后3～8d即可发。真菌性污染一般多由接种室内的空气不清洁、超净工作台的过滤效果不理想、操作不慎等原因引起。此类污染可通过完善操作、控制培养环境、严格操作程序来克服。细菌性污染除外植体带菌或培养基灭菌不彻底外，主要是操作人员的不慎造成。除要求操作人员严格按照无菌操作程序操作外，外植体带菌引起的污染与外植体的种类、取材季节、部位、预处理方法及消毒方法密切相关。因此，取材以春夏生长旺季、当年生的嫩梢为佳，应尽量选择晴天中午进行，或取离体枝梢在洁净空气条件下抽芽，然后从新生组织中取材接种。外植体的彻底消毒是控制污染的前提，应根据不同材料选择合适的消毒剂和消毒方法，有些特殊材料还须进行预处理，以达到最佳消毒效果。对于材料内部带菌的组织有时还需在培养基中加入适量抗生素。2、外植体取材→自来水冲洗→70％酒精表面消毒20～60s→无菌水冲洗→消毒剂（0.1％升汞或2～3％次氯酸钠）消毒处理8～10min或25～35min→无菌水充分洗净→备用。3、（1）用于胚的挽救远缘杂交是植物育种工作的重要途径之一，单远缘杂交难以成功的一个主要原因就是杂交后的合子胚发育不良，常常表现中途败育。通过人工胚培养可使之成苗，用于育种。（2）打破种子休眠胚培养可使休眠的种子提高萌发成苗、缩短育种周期或加速良种繁育。（3）克服珠心胚的干扰利用幼胚离体培养技术可以排除多胚性植物珠心胚对合子胚的干扰，获得杂种胚，大大提高杂交育种的效率。（4）诱导胚状体及胚性愈伤组织利用植物的幼胚或其他胚胎组织，在离体培养条下可以产生大量次生胚状体，从而用于快速繁殖。（5）种子生活力的快速测定木本植物经层积和未层积处理的种胚离体培养条件的萌发速率一致。4、Sharp等（1972）建立一种看护培养法，从培养的番茄形成了细胞无性繁殖系。做法是：将滤纸片放置在完整花药的上面，将花粉放置在滤纸片上。5、在组织培养过程中，经常会发现不定芽丛或者试管苗畸形生长，茎叶呈半透明水渍状，叶片失绿、皱缩，并沿纵向卷曲，脆弱易碎，叶表面完全无蜡质，称之为“玻璃化现象”。这种“玻璃苗”细胞丧失持水能力，细胞内水分大量外渗，增加了植株水分的散失和蒸腾，是组织培养中一种生理失调或生理病变，它极易引起植株死亡，很难移植成活，已成为茎尖脱毒、工厂化育苗等方面的严重障碍。为了更好解决“玻璃化现象”，可以：（1）适当提高培养基中的琼脂、蔗糖或其他渗透剂的浓度，降低培养基的衬质势。（2）可在培养基中加入适量生长延缓剂，例如ABA、PP333，并降低培养基中含氮量和细胞分裂素、赤霉素浓度。（3）增加培养容器的透气性，并避免容器底部受下层日光灯的加热，使容器底部适当降温造成容器内的湿度有自上而下的梯度。（4）控制培养室内温度，可对培养材料适当进行低温处理。（5）增加自然光照。五、论述题首先，通过调节培养基中生长素和激动素或激动素之间的平衡关系，可以在一定程度上影响不定芽的分化。培养基中存在的腺嘌呤或激动素能够促进不定芽的分化和发育，但是培养基中的其他化合物，特别是IAA和NAA可以改变这种促进作用，因为生长素能够抑制不定芽的形成。当与激动素或腺嘌呤结合使用时，生长素可以抵消他们促进不定芽形成的作用，若IAA的相对浓度较高则有利于细胞的增殖和根的分化；若腺嘌呤或激动素的相对浓度较高，则有利于不定芽的分化；当这两种激素之间的比例适中时，则或产生无结构的愈伤组织。赤霉素对于不定芽的分化具有抑制作用，但是如果不定芽已经形成，赤霉素则会促进它们进一步伸长。不同组织在不定芽分化过程中对生长素和细胞分裂素的要求是不同的，所要求的水平取决于这两类物质的内生水平。其次，培养方式和培养条件也会影响不定芽的分化。一些植物的培养材料在固体培养基上只能以一种完全无结构的状态生长，但在成分相同的液体培养基中却能分化不定芽丛。此外，光周期、光质和光强对器官的分化也有影响。一般培养物适合的光强为1000～1500lx，光周期为12～16h，金紫外和蓝紫光能够促进芽的发生，而红光对生根具有显著作用。例如红光和远红外光交替照射对杜鹃花器官发生有良好效果。根据培养材料种类的不同，不同的培养方式和培养条件对不定芽分化的影响有所不同。最后，培养材料的基因型、供体植株和外植体的生理状态、外植体的细胞发育状态、培养物的历史及内生激素水平也会影响器官的分化，在进行组织培养时应该进行具体分析和研究。