血红蛋白的提取和分离流程图

血红蛋白的提取和分离流程图：红细胞的洗涤目的：去除杂蛋白操作：取血样加抗凝剂低速短时离心用吸管去上层透明的血浆加五倍体积的生理盐水搅拌、低速短时离心重复洗涤三次以上目的：防止血液凝固作用：避免白细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果保持红细胞的形态结果：上清液没有黄色，表明红细胞已洗涤干净血红蛋白的释放操作：加等体积的蒸馏水加甲苯置于搅拌器上搅拌10分钟目的：使红细胞吸水涨破，血红蛋白释放出来溶解细胞中的脂溶性物质原理：渗透作用分离血红蛋白操作：将搅拌液转移到离心管，高速长时离心离心后试管中溶液分为4层将离心管中液体用滤纸过滤滤液置于分液漏斗中静止分层目的：使血红蛋白与大部分杂质分离，便于后续纯化第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）除去脂溶性沉淀层分离出红色透明液体即血红蛋白样品处理纯化通通过过凝凝胶胶色色谱谱法法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去纯度鉴定经SDS—聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳进行纯度鉴定如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。透析原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子留在袋内。目的：去除血红蛋白溶液中的小分子杂质粗分离