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1教材内容一、ÄKTApure层析仪简明操作规程......................................................................................................3二、仪器常见维护保养..............................................................................................................................51.每日维护............................................................................................................52.每周维护............................................................................................................53.每月维护............................................................................................................6三、ÄKTApure手动命令介绍...................................................................................................................71.开机...................................................................................................................92.实验前的准备...................................................................................................103.手动命令控制层析实验.....................................................................................144.校正.................................................................................................................305.清洗与关机......................................................................................................32四、脱盐演示实验....................................................................................................................................351.实验准备...........................................................................................................362.准备收集器........................................................................................................403.手动运行实验....................................................................................................404.编辑方法自动运行脱盐实验...............................................................................435.结果分析与讨论.................................................................................................456.清洗与关机........................................................................................................45五、方法编辑.............................................................................................................................................4821.凝胶过滤方法编辑............................................................................................502.离子交换方法编辑............................................................................................583.层析柱CIP方法编辑........................................................................................634.ColumnPreparation方法编辑..........................................................................65六、Evaluation..........................................................................................................................................671.打开结果..........................................................................................................682.显示效果更改...................................................................................................693.曲线积分..........................................................................................................704.查看数据点......................................................................................................725.结果对比..........................................................................................................736.结果导出..........................................................................................................753一、ÄKTApure层析仪简明操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。待仪器自检完毕（主机控制面板白灯常亮）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤（样品也可高速离心后取上清使用）。缓冲液需在使用前用低频超声脱气15min。3、清洗及管道准备首先将A1管道入口放入平衡缓冲液（bindingbuffer）中，将B1管道入口放入洗脱缓冲液（elutionbuffer）中，在systemcontrol窗口点击工具栏内的manual，选择executemanualinstructions→pump→pumpAwash和pumpBwash，选中A1和B1入口，点击execute。泵洗完成后自动停止。4、安装层析柱在manualinstructions里选择pump→systemflow，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarms→alarmprecolumnpressure，设置highalarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。待InjectionValve的1号位管道流出溶液后，将管路接入柱子的上端，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道，连上紫外流动池。5、开始纯化：1）选择检测波长，Monitors→Wavelength→UV1,UV2,UV3(可以只打开一个波长)等待柱子平衡好了（观察UV、COND、pH的数值和变化趋势）就可以准备上样。此时将紫外调零，选择Monitors→autozeroUV，exectue。42）用样品环上样：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入,上样后不要取下注射器。在manualinstructions里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。3）用泵上样：将A2入口放入样品中，manualinstructions里选择flowpath→Ainlet→A2,insert,flowpath→injectmark,insert,execute待样品上完后，在manualinstructions里选择flowpath→Ainlet→A1,使用平衡缓冲液继续清洗柱子。2),3)任选一种方式4）洗脱：上样后用平衡缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manualinstructions里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）。5）设定收集：选择Fractioncollection→Fractionation,选择收集管tubetype，输入每管收集体积，exectue。结束固定体积收集选择Fractioncollection→Stopfractionation，exectue。6、清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入口放入纯水中，启动pumpwash功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作让乙醇充满整个管路。给系统一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端接头，在滴水的状态下将堵头拧上。再拆柱子上端接头，拧上上端堵头。整个过程防止气泡进入层析柱。7、关闭电源：从软件任一窗口File命令栏中点击退出。关闭ÄKTA主机电源，关闭电脑电源。通用电气医疗集团生命科学部5二、仪器常见维护保养1.每日维护1）系统（System）•清洁擦拭外表，防止试剂或结晶的盐腐蚀设备•使用完毕，须用水将系统冲洗干净，之后再用20%乙醇清洗系并保存所有的流路2）pH计（pHelectro