药物分析实验2012

1药物分析实验上海工程技术大学制药工程系2目录实验一葡萄糖酸钙片的分析2实验二葡萄糖的一般杂质检查5实验三阿司匹林肠溶片的分析11实验四过氧化苯甲酰凝胶的分析15实验五盐酸小蘗碱片的分析17实验六紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚片的含量24实验七维生素AD滴剂中维生素A的鉴别与含量测定26实验八牛黄解毒片的鉴别303实验一葡萄糖酸钙片的分析【目的要求】1.掌握葡萄糖酸钙片鉴别实验的原理；2.掌握滴定法测定葡萄糖酸钙片含量的原理与操作。【基本原理】药物COO-CHOHHOHHOHHOHCH2OHCa2+2,H2O本品含葡萄糖酸钙（C12H22CaO14·H2O）应为标示量的95.0%-105.0%性状：本品为白色片。1原理(1)鉴别：①与苯肼反应本品在酸性条件下与苯肼反应生成黄色的结晶。②本品与三氯化铁③本品在无色火焰中燃烧，火焰即显砖红色。(2)含量测定钙紫红素先与钙离子络合生成紫红色络合物，随着EDTA络合剂的加入，由于EDTA与钙离子的配位能力强于钙指示剂与钙离子的配位能力，而使钙紫红素先与钙离子络合生成紫红色络合物中的钙离子被EDTA夺取，将指示剂游离出来，溶液即显示游离指示剂的颜色，从而指示滴定的终点。4【实验操作】（一）鉴别：1．与三氯化铁反应取本品一片，研细，加温热的水10mL，振摇，过滤，吸取5mL溶液，加FeCl3溶液一滴，应显深黄色。2．燃烧显色取铂丝，用盐酸浸湿后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显砖红色。3．与苯肼反应取本品约0.5g,置试管中，加水5mL,微热溶解后，加冰醋酸0.7mL与新蒸的苯肼1mL，置水浴上加热30分钟，放冷，用玻璃棒擦试管的内壁，渐生成黄色的结晶。（二）含量测定：取本品5片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于葡萄糖酸钙1g），加水50毫升，微热使葡萄糖酸钙溶解，放冷至室温，移植至100mL容量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取滤液25mL，加水75mL，加氢氧化钠溶液15mL与钙紫红素0.1g，用EDTA溶液滴定至溶液自紫色转变为纯蓝色。每1mLEDTA溶液（0.05mol/L）相当于22.42mg的葡萄糖酸钙。标示量,(%)=[VEDTA×22.42×100×W1/(1000×W2×25×0.5×5)]×100%W1:5片药品的重量(g)W2:称重溶解的药品重量VEDTA滴定消耗的EDTA溶液的体积。5实验二葡萄糖的一般杂质检查一.目的要求1．了解葡萄糖的全检过程；2．掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐及炽灼残渣等一般杂质检查原理、操作方法及杂质限量计算；3．掌握旋光法216定葡萄糖注射液含量的基本原理、操作方法及结果计算；4．正确使用纳氏比色管、检砷器、高温炉及旋光仪，熟悉旋光仪的构造、以及保养。二.基本原理葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性。一定条件下的旋光度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度具有初步鉴别及估测纯度的意义。葡萄糖分子中具有醛基，还原碱性酒石酸铜生成红色氧化亚铜沉淀。本品除了检查氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属，砷盐等一般杂质外，还需检查溶液的澄清度与颜色（目的是检查水不溶性物质或有色杂质）、乙酸溶液的澄清度（目的是检查醇不溶性杂质，如蛋白质等）、亚硫酸盐与可溶性淀粉（因为制备时使用的醇可能带有亚硫酸盐，而可溶性淀粉为引入的中间体）。旋光度与溶液的浓度（c）和偏振光透过溶液的厚度（l）成正比。当偏振光通过厚1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液，使用光线波长为钠光D线（589.3nm），稳定温度为t记时，测得的旋光度称为该物质的比旋度，以[]αλt。葡萄糖的比旋度[]αλt为﹢52.75°。所以，测定葡萄糖溶液的旋光度可以求得其含量。三.实验操作6[一]性状本品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末；无臭，味甜。取本品约10.81g精密称定，置100ml量瓶中，加水适量与氨试液0.2ml，溶解后水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，在25℃时测定比旋度，应为﹢52.5°至﹢53.0°。[二]鉴别取本品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即产生氧化亚铜红色沉淀。[三]检查1．酸度取本品2g，加新沸过的冷水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢化钠滴定浓（0.02mol/l）0.20ml，应显粉红色。2．溶液的澄清度与颜色取本品5g，置25ml纳氏比色管中，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml，溶液应澄清无色；如显浑浊，与Ⅰ号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴溶液10ml，比色用重铬酸钾溶液30ml与比色用硫酸铜溶液20ml,加水稀释成100ml）0.4ml加水稀释至10ml比较，不得更深。3．乙醇溶液的澄清度取本品1g，加90%乙醇30ml，置水浴上加热回流约10min，溶液应澄清。4．亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品1g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。5．干燥失重取本品置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，将供试品平铺于瓶底，厚度不超过5㎜，加盖，精密称定。将称量瓶放入洁净的培养皿中，瓶盖半开或置瓶旁，放入105℃干燥箱中干燥。取出后迅速盖好瓶盖，置干燥器内放冷至室温，迅速精密称重（放置时间与称重顺序与空称量瓶一致）。再于105℃干燥箱中干7燥至恒重，即得。减失重量不得过9.5%。6．蛋白质取本品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液（1→5）3ml，不得发生沉淀。7．氯化物取本品0.6g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成约25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使调pH试纸显中性），再加稀硝酸10ml（溶液如不澄清，应滤过），加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化纳溶液（10μg/ml的Cl）6ml,置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比浊，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.01%）。8．硫酸盐取本品2g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使遇pH试纸显中性；溶液如不澄清，应滤过）加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液（100μgSO4/ml）2ml,置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml,摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml,用水稀释至50ml,充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比浊，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.01%）。9．铁盐取本品2g，置50ml纳氏比色管中，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5min，放冷，加水稀释使成45ml,加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml,摇匀，如显色，与标准铁溶液（10μgFe/ml）2ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。10．重金属取50ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅液（Pb8μg/ml）一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml,用水稀释至25ml：若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代8乙酰胺试液各2ml,摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（重金属不得过5ppm）。四.注意事项限度检查应遵循平行操作原则，即供试管与对照管的实验条件应尽可能一致，包括实验用具的选择、试剂与事业的量取方法及加入顺序、反应时间的长短等。1.比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀。比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面或自上而下观察；比浊方法是将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。所用比色管刻度高低差异不应超过2ml,使用过的比色管应及时清洗，注意不能用毛刷刷洗，可用硫酸洗液浸泡。一般情况下可取1份供试品进行检查，对供试品和对照管各复检2份，方可判定。五.思考题1．葡萄糖的检查项目中哪些属于一般杂质？哪些属于特殊杂质？试述它们的来源及检查意义。2．亚硝酸盐和可溶性淀粉超标会出现什么现象？3．氯化物、重金属及砷盐检查中的操作注意事项有哪些？比浊检查时为什么应将反应液稀释后再加沉淀剂？9实验三阿司匹林肠溶片的分析【目的要求】1.熟悉片剂分析的项目与方法；2.掌握阿司匹林鉴别实验的原理及与药物结构的关系；3.掌握两步滴定法测定阿司匹林片含量的原理与操作，及容量分析法测定片剂含量的计算方法。【基本原理】药物COOOHCOCH3C9H8O4性状：本品为肠溶包衣片，除去包衣后显白色。本品含阿司匹林（C9H8O4）应为标示量的95.0%-105.0%1原理（1）鉴别：①三氯化铁反应水杨酸及其盐在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液反应，生成紫堇色配位化合物。阿司匹林加热水解生成水杨酸，可用三氯化铁反应鉴别。②水解反应阿司匹林与碳酸钠试液加热，酯键水解，得水杨酸钠和醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，生成水杨酸沉淀，并发生醋酸得臭气，因此可用水解反应鉴别。(2)检查①阿司匹林游离水杨酸得检查a.杂质来源游离水杨酸为阿司匹林生产中未反应的原料或贮存过程中的水解产物10b.检查方法阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作用，而水杨酸则磕与之反应生成生成紫堇色此种方法称为对照法，极为灵敏，可检测出1ug的游离水杨酸。(3)含量测定阿司匹林分子结构中含有酯键，易水解成水杨酸和醋酸，片剂中为防止酯键水解加入少量酒石酸或枸橼酸做稳定剂，因此在片剂中有酸性杂质，含量测定时为消除酸性杂质干扰，采用两步滴定法。第一步中和，消除酸性杂质（酸性附加剂和降解产物）的干扰酒石酸枸橼酸水杨酸醋酸COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O第二步水解后剩余滴定COOHOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O【实验操作】（一）鉴别与三氯化铁反应取本品的细分适量（相当于阿司匹林0.1g）,加水10mL，煮沸，放冷，加三氯化＋NaOH钠盐＋H2O11铁试液一滴，即显紫堇色。（二）检查：游离水杨酸取本品3片，研细，用乙醇30mL分次研磨，并移入100mL容量瓶中，充分振摇，用水稀释致刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液10mL，致50mL纳氏比色管中，用水稀释致50mL，立即加新制的稀硫酸铁銨溶液（取1mol/L盐酸溶液1mL,加硫酸铁銨指示液2mL后再加水适量使成100mL）3mL，摇匀，三十秒内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5mL，加乙醇3mL，0.05％酒石酸溶液1mL，用水稀释致50mL,再加上述新制的稀硫酸铁銨溶液3mL,摇匀）比较，不得更深（1.5%）（三）含量测定：取本品10片，研细，用中性乙醇70mL分数次研磨，并移入100mL容量瓶中，充分振摇，再用水适量洗涤研钵数次，洗液合并于100mL容量瓶中，再用水稀释致刻度，摇匀，过滤，精密量取滤液30mL（相当于阿司匹林0.3g），致锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）10mL,振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）致溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40mL，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷致室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白实验校正，每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mgC9H8O4阿司匹林标示量，％＝（四）注意事项：1．掌握片剂的取样方法，并正确计算取样量范围。CH2SO4×2×（V硫酸空白－V硫酸供试）×18.02×0.1×0.1×1000×10×100%10030122．中和操作要快，避免阿司匹林在碱中水解。3．加碱、加热水解阿司匹林应不时振摇，保证水解完全；然后迅速放冷·，尽量避免碱液在受热时吸收二氧化碳。13实验四过氧化苯甲酰凝胶的分析【目的要求】3.熟悉凝胶剂分析的方法；4.掌握阿过氧化苯