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无菌制剂培养基模拟灌装试验指南 （征求意见稿） 国家食品药品监督管理总局 食品药品审核查验中心 二〇一六年七月 目录1.目的.......................................................12.范围.......................................................13.定义.......................................................14.原则.......................................................15.无菌生产工艺及模拟范围......................................26.模拟试验方案的设计及实施过程要求.............................36.1.培养基模拟灌装试验的前提条件....................................36.2.基于无菌风险的模拟试验方案的设计................................36.3.培养基的选择与评价..............................................46.4.培养基的配制....................................................66.5.培养基的除菌与灭菌..............................................66.6.灌装量..........................................................86.7.灌装数量及模拟持续时间..........................................86.8.最差条件的选择.................................................106.9.干预...........................................................116.10.容器规格与容器闭封组合.........................................146.11.培养前的容器检查...............................................146.12.培养条件.......................................................146.13.培养后的检查...................................................156.14.计数与数额平衡.................................................156.15.惰性气体.......................................................166.16.环境及监控.....................................................166.17.人员因素.......................................................196.18.不同剂型应考虑的特殊因素.......................................196.19.方案的实施.....................................................237.可接受标准与结果判断.......................................248.污染调查及纠正措施.........................................259.试验周期及再验证...........................................2610.术语......................................................27—4——1—无菌制剂培养基模拟灌装试验指南 （征求意见稿20160725）1.目的为指导和规范无菌药品生产的培养基模拟灌装试验，充分评价药品生产企业的无菌操作水平，确保所生产无菌药品的安全、有效、质量稳定，依据《药品生产质量管理规范》及附录，制定本指南。2.范围本指南根据无菌生产工艺的特点阐述了非昀终灭菌的无菌产品培养基模拟灌装试验的基本要求及流程，适用于采用无菌生产工艺生产无菌制剂。3.定义本指南所指的培养基模拟灌装试验，是指采用无菌的培养基或适当的介质，模拟药品生产中无菌操作的全过程（不仅仅是灌装过程），以评价该无菌工艺无菌保证水平的一系列活动。4.原则在对无菌生产工艺充分认知和生产经验累积的基础上，非昀终灭菌产品企业应结合工艺、设备、人员和环境等要素定期开展培养基模拟灌装试验，以确认无菌生产过程的可靠性。开展培养—2—基模拟灌装试验应遵循以下原则：4.1以现行GMP法规要求为准则，评价无菌生产过程的法规符合性，不符合规范要求的无菌工艺过程，不能通过模拟试验来证实其无菌控制措施的合理性。4.2对无菌生产过程实施风险评估，识别生产过程风险点以并评估现有控制措施的有效性，评估结果将在试验方案设计时给予考虑。4.3应结合无菌生产过程所涉及到的工艺、设备、人员以及操作时限等因素有针对性开展模拟试验，尽可能模拟实际无菌生产全过程，并应特别关注“开放”操作、人工干预等高风险过程。4.4如同一生产线生产多个包装规格的产品，应评价模拟试验方案对各产品无菌工艺过程的适用性。应对有显著差异的无菌工艺过程逐一开展模拟试验。.5.无菌生产工艺及模拟范围无菌产品的无菌生产工艺通常为：经除菌过滤或其他方法获取无菌药液或无菌粉末，在无菌条件下进行液体灌装或粉末灌装，密封。冻干制剂在液体灌装的基础上增加了冷冻干燥工艺。培养基模拟灌装试验应从第一步无菌操作开始，直至无菌产品完全密封结束。。如果在产品制备阶段已经采用了无菌生产的工艺，此部分工艺也应作为模拟验证的一部分。—3—6.模拟试验方案的设计及实施过程要求6.1.培养基模拟灌装试验的前提条件在培养基模拟灌装试验之前应确认与无菌工艺相关的支持性系统和灭菌系统的验证已完成，并达到了可接受的标准。6.1.1.工艺设备、公用系统和辅助设施按照预期要求完成了设计、安装和运行确认；6.1.2.生产设备、公共系统、辅助设施灭菌方法完成了相应的验证，物品及厂房、设施所使用消毒剂及消毒方式完成了相关的验证。6.1.3.药液及与产品接触的气体、设备组件、容器、器具灭菌工艺完成了相应的验证。6.1.4.无菌关键区域的气流及环境监测达到了设计要求。6.1.5.根据无菌生产工艺要求建立了相关操作规程文件。6.1.6.参与模拟灌装试验的人员接受了GMP、无菌操作、微生物知识以及实施模拟试验的培训。6.1.7.进入洁净区的全部人员通过了更衣程序的确认，并采用文件形式，可视化标识管理或其他方式，确认了每位参与者可进入的的区域和其所允许的无菌操作项目。6.1.8.容器密封性验证已经完成。6.2.基于无菌风险的模拟试验方案的设计模拟试验方案设计应结合无菌生产工艺，尽量与实际无菌操—4—作过程保持一致，以求试验结果真实反映生产过程的无菌保证水平。6.2.1.无菌生产工艺的风险评估无菌生产工艺的设计基于对产品特性、工艺技术和无菌控制措施的认知和经验的累积，设计模拟试验方案前应对无菌生产过程开展系统性风险评估，以充分识别无菌生产过程中潜在风险点。6.2.2.模拟试验方案设计时，应重点考察和评估无菌操作的高风险过程。无菌生产工艺的暴露操作是影响昀终产品无菌特性的重要环节，如设备（或管道）的无菌连接、无菌容器的转运和更换、灌装等关键操作，都是引入微生物污染的重点环节及风险点，模拟试验方案设计应考察以上过程无菌防护措施的有效性。6.2.3.证实无菌操作人员满足无菌生产要求，是实施模拟试验的目的之一，有人员参与的无菌操作，应考察评估来源于人员的污染途径。进行模拟试验方案设计时，应结合工艺过程中的“开放”环节，重点考察有人员参与的关键操作，评价人员素质和防护措施的可靠性。6.3.培养基的选择与评价6.3.1.培养基的选择—5—6.3.1.1.应根据被模拟产品的特点、灌装过程、培养基灭菌方式等方面决定使用何种培养基。。6.3.1.2.胰酪胨大豆肉汤培养基（TSB）是一种广谱性培养基，特别对无菌工艺环境中源自人体的细菌、芽孢和真菌有良好的促生长效果,广泛应用于微生物实验室，环境监测、无菌检测及微生物计数或控制菌检测，是模拟灌装试验常用的培养基。6.3.1.3.如果产品灌装后充入惰性气体、产品是储存在无氧条件，无菌操作在严格的厌氧环境中进行时（即生产全过程氧气浓度低于0.1%），应考虑采用厌氧培养基如硫乙醇酸盐液体培养基（FTM）。在有氧气存在的无菌工艺的环境监控中反复发现厌氧微生物或在产品无菌检查中发现厌氧菌时，需评估增加厌氧培养基。6.3.1.4.包含动物来源成分的培养基，须提供无BSE（可传染性海绵脑病）/TSE（疯牛病）证明，亦可选用植物来源的培养基。6.3.2.促生长能力试验6.3.2.1.模拟灌装培养基产品完成培养后应按照现行中国药典方法进行促生产能力试验，以证明本次验证所用培养基的营养性。6.3.2.2.培养基促生长能力试验使用的菌种，如：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草—6—芽孢杆菌（CMCC63501）、金黄色葡萄球菌（CMCC26003）、铜绿假单胞菌（CMCC10104）、生孢梭菌（CMCC64941），在试验中除标准菌株之外应考虑加入环境和无菌检查中发现的微生物。6.3.2.3.促生长试验应能证明所选培养基能够支持低量微生物的复壮和生长，接种量应控制在10CFU-100CFU/灌装单位。6.3.2.4.通过5天的促生长试验，应证明培养基能够支持微生物的生长。6.4.培养基的配制6.4.1.模拟灌装的培养基应在控制区域进行准备，准备过程中，应注意培养基粉尘在环境中的扩散及残留造成的环境污染。应按照培养基生产商提供的配方配制培养基。应考虑降低非无菌培养基中细菌和霉菌生长的风险，以避免微生物生长导致培养基过滤性能降低。配制后的培养基应尽快灭菌或除菌过滤，进入无菌储罐或容器储存备用。6.4.2.培养基在模拟灌装前应恢复至室温，即用型无菌液体培养基储存条件和使用条件应遵循生产商要求。6.5.培养基的除菌与灭菌—7—6.5.1.除菌过滤6.5.1.1.如采用除菌过滤的方式准备培养基将方便同生产工艺衔接，但过滤器堵塞的情况时有发生，支原体污染的风险也难避免，所以应对以上情况进行风险评估并采取合理应对。6.5.1.2.由于培养基的特性与药液有差异，培养基除菌过滤的滤器型号可与产品使用的过滤器不同。培养基可能因含有颗粒或生物负载较大，导致除菌过滤器的堵塞，这种情况下可增加预过滤以避免堵塞。值得注意的是除菌过滤的可靠性是通过专门的除菌过滤挑战实验验证的，无法通过培养基模拟灌装试验的结果证实。6.5.2.湿热灭菌6.5.2.1.可采用在线灭菌或灭菌釜湿热灭菌，但不同于微生物实验室使用的小瓶培养基灭菌，培养基实验所用的大体积培养基可能会产生受热不均匀或灭菌不充分现象。6.5.2.2.灭菌过程应遵循生产商推荐的灭菌时间和温度的建议，以确保灭菌后的培养基的促生长能力。过度灭菌可能使培养基碳化以及降低其促生长性能。为避免过度加热可采用湿热灭菌与除菌过滤联合使用的方式，但都应进行促生长性能检查。6.5.3.辐照灭菌—8—6.5.3.1.辐照灭菌可避免支原体污染风险，常与除菌过滤联合使用。6.5.3.2.如直接使用辐照后的无菌培养基粉