DNA的提取方法

DNA的提取方法马丽SSP\KIRSBTTCA提取样本DNA保证DNA一级结构的完整性。保证DNA的纯度，排除其它分子的污染。提取方法基本原则样本类型全血、口腔拭子、血片、DNA、粘膜自动——磁珠法手工——柱提法、盐析法原理磁珠吸附法：用裂解液使细胞裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离释放，磁球可以特异地吸附DNA，通过洗涤，去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质，再用洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA，去除磁珠，得到纯度和浓度均很高的DNA。磁珠法自动提取机提注意事项加血样时两人复核吸样本时不能吸太快加血的枪头要用手拧掉，不可打掉，避免枪被污染机器提取时，必须先将搅拌套装上，再运行机器最后吸取DNA过程中一次只打开一个离心管，尽量防止加样过程中造成交叉污染和液体外溅造成的污染样品编号要一一对应盐析法：用红细胞裂解液裂解细胞，离心弃上清，再用核裂解液裂解细胞，再加去蛋白除去蛋白质，然后利用无水乙醇把DNA析出来，同时将盐离子等杂质去除，最后洗涤DNA，风干、挥发干净后用AE/水溶解手工提取手提（盐析法）注意事项离心时，管口统一朝外震荡要充分，红裂要充分弃上清，EP管开口向下放吸水纸上时，不可放同一位置，避免污染将上清转移到异丙醇中时，吸取上清时注意不要吸到沉淀转管时编号一一对应最后一步溶解DNA要充分离心柱法：用蛋白酶K和BufferAL迅速裂解白细胞和灭活细胞内核酸酶，然后利用无水乙醇把DNA析出来，通过离心力的作用使DNA吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,将蛋白质、盐离子等杂质去除，最后用低盐的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。DNA的检测方法紫外分光光度计检测——纯度：选择正确的稀释倍数，确保OD值在30-50之间OD260/OD2801.7说明有蛋白污染OD260/OD280=1.7-1.9说明纯度很好OD260/OD2801.9说明有部分降解或有RNA污染——得率：Yield=OD260×稀释倍数×50ng/ul电泳检测取3ulDNA样品在0.8-1.0%的琼脂糖凝胶上电泳，检测DNA分子的浓度及质量。谢谢！