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1课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(时间：30分钟满分：50分)考查知识点及角度难度及题号基础中档稍难选择培养基的制备18微生物的分离3、46微生物的计数2、57一、选择题(每小题4分，共20分)1．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做()。A．鉴别培养基B．加富培养基C．选择培养基D．基础培养基解析选择培养基可选择目标微生物，同时抑制或杀死其他微生物。答案C2．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是()。A．平板上的一个菌落就是一个细菌B．菌落中的细菌数是固定的C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同解析用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落数可能与活菌的实际数不相同。答案C3．本课题以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是()。①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌A．①③B．②④C．①②D．③④解析从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌落数＝(C/V)×M”进行推测，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌2落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积/mL，M代表稀释倍数。答案A4．下列关于土壤取样的叙述，错误的是()。A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3～8cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤解析土壤取样过程中，为防止杂菌污染，取样用的小铁铲和信封在使用前必须灭菌。答案C5．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()。A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案D二、非选择题(共30分)6．(10分)微生物与人类关系密切，虽然有些微生物能使动植物患病，但多数微生物对人类是有益的，请回答下列有关问题。(1)下表为两种微生物的培养基配方。A培养基KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gB培养基纤维素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容到1000mL。①如果要进行土壤中分解尿素的细菌的分离，则需要选择上述哪种培养基？______，该培养基能分离尿素分解菌的原因是_____________________。3②在该培养基中可加入______指示剂，根据指示剂的颜色可鉴定该种细菌能够分解尿素。③从功能上来看，上述两种培养基均属于______培养基。(2)把牛肉膏蛋白胨固体培养基倒入平板，等培养基冷凝后，应将平板______放置，这样做的目的是可防止______造成污染。(3)微生物接种的方法很多，平板划线法操作结束时，为什么仍需要灼烧接种环？_____________________________________________________________。(4)微生物培养过程中还有什么方法或步骤要防止其他微生物污染？解析在进行土壤中分解尿素的细菌的分离时，培养基中尿素是唯一的氮源，只有能分解尿素的微生物才能生长繁殖，这种培养基属于选择培养基。接种时及接种操作结束后，仍需要灼烧接种环以杀死接种环上残留的细菌，避免污染环境和感染操作者。答案①A培养基培养基中尿素为唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能生长繁殖②酚红③选择(2)倒过来皿盖上的水珠落入培养基(3)杀死接种环上残留菌种，避免污染环境和感染操作者(4)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作。7．(10分)急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题。(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为__________________。如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是______。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？______。为什么？______________________________________________________________。(3)如分别取0.1mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为______。(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？____________________________________________________________。解析纯化大肠杆菌的方法——稀释涂布平板法和平板划线法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。答案(1)稀释涂布平板法D(2)需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)4(3)5.6×108(4)通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌8．(10分)富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一，主要是指利用不同微生物间生命活动的特点不同，仅适应该条件的微生物生长旺盛，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物等综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答下面的问题。(1)本实验所需要的培养基为______________，碳源为______________。(2)实验原理是___________________________________________________(3)①→③重复培养的目的是______________________________________。(4)⑤的菌落中大部分是降解________________的微生物。(5)⑥为________组，⑦为________组，设置⑥的目的是________________________________________________________________________________________________________________________。(6)⑤→⑥采用____________法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是__________________________________________________________________________________________。解析本题考查了微生物培养的相关知识。先用含有对羟基苯甲酸为唯一碳源的液体培养基，经过富集培养之后，将其涂布到平板培养基中，然后将单菌落接种到液体培养基中，才能得到纯度较高的微生物。答案(1)选择培养基对羟基苯甲酸(2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物(3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例(4)对羟基苯甲酸(5)对照实验说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物5(6)单菌落挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，同时，打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物