血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定

2014级12班1组201450557陆丽霞血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定实验原理：以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，在血清丙氨酸氨基转移酶的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性的大小,丙氨酸能与2，4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸二硝基苯腙。丙酮酸二硝基苯腙在碱性溶液中呈现棕色，可用比色测定。实验步骤：1.标准曲线绘制：⑴取6支试管并编号，按表4-16操作；表4-16标准曲线的绘制试剂对照123452mmol/L丙酮酸标准液00.050.100.150.200.25底物溶液0.500.450.400.350.300.25PBS缓冲液0.10.10.10.10.10.1混匀，37摄氏度水浴5分钟，然后各管加入2,4—二硝基苯肼2,4——二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH5.05.05.05.05.05.0相当于ALT活力单位0285797150200A52000.0590.1070.1670.2080.249⑵将所得6支试管混匀，10min后以对照组调零，用520nm波长比色并读取吸光度；⑶以吸光度为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标，绘制标准曲线2．酶活性测定：⑴取2支试管，编号，按表4-17操作：表2ALT活力测定试剂对照测定血清——0.1PBS缓冲液0.1——底物溶液0.50.5混匀，37摄氏度水浴30分钟，然后各管加入2,4——二硝基苯肼2,4—二硝基苯肼0.50.5混匀，37摄氏度水浴20分钟，然后各管加入0.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH5.05.0A52000.122⑵用520nm波长比色，以对照管调零，读取测定管吸光度；实验结果:由标准曲线方程y=0.0014x，当A520=0.122，即y=0.122，故x=87那么测得ALT酶活力单位为87讨论：y=0.0014xR²=0.930900.050.10.150.20.250.3050100150200250吸光度ALT酶活力单位A520线性(A520)1．查资料得参考正常值为40单位以下，实验测得ALT酶活力单位为87，机体可能发生了肝病变。2．查资料得，急性肝炎和中毒性肝细胞坏死时血清ALT显著增高；慢性肝炎、肝癌、肝硬化及心肌梗死时血清ALT中度增高；阻塞性黄疸和胆道炎症时血清ALT中度增高。血清总胆固醇测定实验原理：血清中的胆固醇酯在酶的作用下水解为胆固醇，胆固醇在其氧化酶的作用下产生过氧化氢，它可以在过氧化氢酶作用下与苯酚及4-氨基安替比林作用下生成红色化合物醌亚胺。在500nm波长处的吸光度即可计算出血清总胆固醇含量。实验步骤：1.取3支试管，编号，按表4-10操作：表4-10胆固醇溶液的配置试剂标准管测定管空管血清——0.02——胆固醇标准液0.02————酶工作液1.51.51.5A5000.2020.1890.0002.混匀后，置于37摄氏度水浴15min3.在500nm波长下比色，以空白管调零，测定各管吸光度实验计算：总胆固醇（mmol/L）=A测定/A标准×5.18故总胆固醇（mmol/L）=0.202/0.189×5.18=5.536（mmol/L）实验结果：所测得的血清总胆固醇的含量为5.536mmol/L讨论：1．血清总胆固醇的参考正常值为：2.59～6.47mmol／L，实验所测值在正常范围2．高胆固醇血症常见于动脉粥样硬化症，、家族性高胆固醇血症、糖尿病肾病综合征、甲状腺功能减退、阻塞性黄疸、肥胖病等3．低胆固醇常见于严重贫血、甲状腺功能亢进、营养不良等尿酮体的定性检测实验原理：酮体中的乙酰乙酸及丙酮在碱性条件下与亚硝基铁氰化钠作用产生紫红色化合物实验步骤：1.取“酮体测试粉末”少许置于滤纸上2.滴加一滴尿液于测试粉末上3.稍待一到两分钟，观察结果实验结果：未出现紫红色（—）讨论：1．正常人每天排出酮体少于100mg，且主要是丙酮，故应为（—）。实验结果未出现紫红色，说明该机体尿酮体处于正常值，相关器官未发生病变2．尿酮体阳性主要见于糖尿病酮症酸中毒、急性风湿热、结核病、败血症、急性胃肠炎伴严重脱水、麻醉后、中毒性休克等