检验科生化项目操作规程—E

1武汉都市妇产医院检验科管理文件生化项目操作规程目录序号文件名称文件编号备注一迈瑞BS20071血清总蛋白测定WH-DSFCYYJYK-E012血清白蛋白测定WH-DSFCYYJYK-E023血清总胆红素测定WH-DSFCYYJYK-E034血清结合胆红素测定WH-DSFCYYJYK-E045血清总胆汁酸测定WH-DSFCYYJYK-E056血清丙氨酸氨基转移酶测定WH-DSFCYYJYK-E067血清天门冬氨酸氨基转移酶测定WH-DSFCYYJYK-E078血清碱性磷酸酶测定WH-DSFCYYJYK-E089血清-谷氨酰转移酶测定WH-DSFCYYJYK-E0910葡萄糖测定WH-DSFCYYJYK-E1011尿素测定WH-DSFCYYJYK-E1112肌酐测定WH-DSFCYYJYK-E1213尿酸测定WH-DSFCYYJYK-E1314血清总胆固醇测定WH-DSFCYYJYK-E1415血清甘油三酯测定WH-DSFCYYJYK-E151617都市妇产检验科生化操作规程文件编号：WH-DSFC-JYK-E编制人:孙红霞受控状态:在控发布日期：2018-01-01审核人：版本号:第1版发布部门：检验科批准人：修订号:第次修改2一血清总蛋白测定1检验申请单独检验项目申请：血清总蛋白测定(缩写TP)；组合项目申请：肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中或采用含分离胶的真空采2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如急诊标本，加上急查标识。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15℃～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2℃～8℃）稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2℃～8℃冰箱内保存7d。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。3方法原理双缩脲法。碱性溶液中的铜离子和蛋白质或多肽分子中的肽键反应，生成紫红色络合物，络合物在波长546nm处的吸光度和蛋白质的浓度成正比。4试剂及其他用品4.1试剂：双缩脲法测定总蛋白试剂盒，由迈瑞生物科技有限公司出品。4.2试剂盒保存：保存于2-8℃，避光保存可稳定18个月。开盖后放于仪器的试剂仓冰箱中至少稳定28天。4.3试剂盒准备：液态试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分R：氢氧化钠200mmol/L，酒石酸钾钠32mmol/L硫酸铜12mmol/L，碘化钾30mmol/L，5校准品与校准模式5.1校准品：由迈瑞提供的多项目校准液5.2校准类型和校准点数目：线性模式，2个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间7天，批内校准时间90天。但在：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后；均须进行一次校准。5.4校准液重建方法：用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用迈瑞公司提供的定值质控血清，6.2质控液重建方法：用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。36.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测7适用仪器适用迈瑞BS系列全自动生化分析仪。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数化学原理：双缩脲法；测定原理:比色法；在碱性条件下，蛋白质与铜离子生成紫蓝色复合物，显色强度和蛋白质浓度成正比；单位：g/L；校准模式：线性；校准周期：14天；校准点：2个；波长:546nm，样本量：4.0μl；试剂：R200μl；10结果计算总蛋白浓度（g/L）＝(A标本/A标准)×校准液蛋白浓度(g/L)A＝A546nm－A660nm；仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：2～120g/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：血清/血浆：重复性：变异系数≤3.0%，批间差：相对偏差≤4.5%。分析灵敏度：浓度为70g/L时吸光度≥0.09A试剂空白吸光度：试剂以水为空白在37±1℃，546nm波长条件下，吸光度0.3＜A。12.2线性范围：2～120g/L。12.3方法的有限性及干扰因素：甘油三酯达11.3mmol/L时影响小于2%，血红蛋白达5g/L时影响小于9%，胆红素达547umol/L时影响小于10%。13参考范围及医学决定水平参考范围：66～87g/L。14临床意义14.1血浆总蛋白包括血浆中所有的蛋白质，其中主要有白蛋白和球蛋白两大类。血浆蛋白主要的生理功能是维持血浆胶体渗透压和pH值、运送多种物质的载体、参与凝血和抗凝血、免疫作用和营养作用等。414.2TP－ALB＝球蛋白（含量），并可由此得出A/G比值。14.3血清TP增高（1）多数反映高免疫球蛋白血症。①各种单克隆性免疫球蛋白病，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、冷沉淀球蛋白血症等。②自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿病、类风湿性关节炎。（2）多种原因引起的明显脱水使血浆浓缩，致TP相对增高。这种情况A/G比值变化不大，为假性蛋白增多血症。14.4血清TP降低：多反映白蛋白合成减少或蛋白质丢失。（1）肝脏合成减少：各种慢性肝病，吸收不良综合症，蛋白质营养缺乏等。（2）蛋白质尤其是白蛋白丢失：肾病综合症、急性肾炎和慢性肾炎从肾脏丢失；严重烧伤从创面丢失；溃疡性结肠炎等胃肠疾病从胃肠道丢失；大量失血和浆膜腔渗液也可使蛋白丢失。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与白蛋白、血清蛋白电泳、丙氨酸氨基转移酶等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定（此项不作规定）17有关引用程序与文件17.1．迈瑞BC-200型自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操作程序。17.3检验结果审核程序。17.4标本送检和接收程序。18参考文献；1,Weichselbaum,T.E.Amer.J.Clin.Path.16,40-48(1946)2,Josepshon,B,Gyllensward,C,Scand.J.Clin.Lab.Invest9,29(1957)19任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本操作规程作出改动，但必须先报专业主管和主任批准。20.本操作规程涉及的记录和表单20.1试剂进购记录表20.2质控记录5武汉都市妇产医院检验科管理文件项目WH–DSFCYY-JYK-E2：2018-E02生效日期：2018101二血清白蛋白测定第1页共4页1检验申请单独检验项目申请：血清白蛋白测定(缩写ALB)；组合项目申请：肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子肝素试管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定5天，普通冰箱中（2～8℃）稳定一20天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。3方法原理溴甲酚绿法。在pH4.2的溶液中，有非离子型表面活性剂存在时，可与白蛋白形成蓝绿色复物，颜色的深度在波长578nm处的吸光度与白蛋白的浓度成正比。4试剂及其他用品4.1试剂：溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由迈瑞生物科技有限公司出品。4.2试剂盒保存：保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定28天。开盖后避免污染。变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态单试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：溴甲酚绿0.26mmol/L，柠檬酸盐缓冲液30mmol／L表面活性剂1.5g／L5校准品与校准模式5.1校准品：由迈瑞公司提供的多项目校准液,白蛋白浓度值可溯源至国际标准参考物质（ERM-DA470k）5.2校准类型和校准点数目：线性模式，2个校准点。65.3校准周期：校准间隔时间1天。但在：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后；均须进行一次校准。5.4校准液重建方法：用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由迈瑞公司提供的定值质控血清，产品号为6.2质控液重建方法：用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7适用仪器适用迈瑞BS系列全自动生化分析仪。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。10结果计算计算公式：白蛋白浓度（g/L）＝（A标本－A空白）/（A标准－A空白）×校准液白蛋白浓度（g/L）注：根据双波长测定，A＝A340nm－A700nm仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的