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克氏双糖铁（KIA）复合实验克氏双糖铁（KIA）复合实验双糖铁培养基的原理•【原理】：该培养基用酚红作指示剂，而产酸在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气，则斜面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层由于是在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化挥发而保持黄色。如细菌分解蛋白产生硫化氢，则与硫化亚铁作用生成黑色的硫化铁，使培养基变黑。双糖铁培养基的成分•下层：蛋白胨1g；氯化钠0.5g；葡萄糖0.2g；琼脂0.3-0.5g；水100ml•将上述物质混匀调PH7.6后加1.2%酚红0.4ml•上层：蛋白胨1g：氯化钠0.5g：乳糖1g；硫代硫酸钠0.03g；硫酸亚铁0.02g；琼脂1g；水100ml双糖铁培养基的配置1.将下层配好，分装中号试管（1ml），塞好包扎，高压灭菌半小时，使凝固后备用。2.制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解pH8.1，再加入酚红分瓶，（每瓶300ml，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30min或112℃消毒15min）。3.取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1.5ml，边斜放置使成斜面，凝固后备用。双糖铁培养基的用途•用途：初步鉴别肠道致病菌用，可以观察葡萄糖、乳糖的发酵，并可观察有无H2S产生及细菌有无动力。双糖铁培养基上各菌的生长特点含有乳糖和葡萄糖：产酸产气含有硫酸亚铁：如细菌分解含硫氨基酸生成硫化氢，可形成黑色沉淀酚红指示剂：酸黄碱红1)大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验），使斜面及底层均呈黄色并有气泡。2)沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖，不发酵乳糖，分解葡萄糖产的酸使培养基pH下降，酚红指示剂变黄，但是培养基中的葡萄糖仅有0.1%，在斜面的酸性物质被氧化成挥发性酸，且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作用，使斜面变红，而底层则为黄色。双糖铁培养基上各菌的生长现象•大肠杆菌黄色有气泡•伤寒杆菌上红下黄中间有黑色沉淀•痢疾杆菌上红下黄thankyou!