邻二氮菲分光光度法测定铁

邻二氮菲分光光度法测定铁实验九紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。紫外光：200-400nm可见光：400-780nm，可被人们的眼睛所感觉特点：带光谱分子光谱应用：定性分析-最大吸收波长定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）定性分析原理吸收曲线：以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图4定量分析原理：朗伯—比耳定律吸光度A：表征物质对光吸收程度的量。A=lgIi/It=-lgT=bc当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。A--吸光度--摩尔吸光系数C--被测物浓度Ii--入射光强T--透过率b--液层厚度（光程长度）It--透射光强工作曲线的绘制与样品浓度的测量：配制一组含有不同浓度被测元素的标准溶液，按浓度由低到高的顺序测定吸光度值。绘制吸光度对浓度的校准曲线。在与标准系列测定完全相同的条件下测定试样的吸光度，从校准曲线上用内插法求出被测元素的含量。C(μg/mL)2.004.006.008.00待测元素的浓度0.1000.2000.3000.4000.5000.600待测元素的吸收值0工作曲线标准工作曲线法仪器组成部件各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。光源检测器信号显示记录装置吸收池单色器钨灯或卤钨灯——可见光源350~1000nm氢灯或氘灯——紫外光源200~360nm1）光源：2）吸收池：玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区石英——不吸收紫外光，适用于紫外和可见光3）单色器：光源辐射的复合光分解为单色光棱镜分光-721光栅分光-722邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验目的学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。掌握721,722型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。实验原理2+NN3Fe2++NNNNNNFe在pH=2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。实验操作步骤1．10ug/mL铁标准使用液和水样的配制用移液管移取100ug/mL的铁标准储备液10.00mL，置于100mL容量瓶中，加入2mL6mol∕LHCl，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。2．标准系列的配制用刻度移液管分别移取上一步骤配制的铁标准使用溶液（10ug/mL）：0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL依次放入6只50mL容量瓶中，分别加入10%盐酸羟胺溶液1.0mL，稍摇动放置2分钟，再加入邻二氮菲溶液2.0mL及NaAc溶液5mL，稀释至刻度，充分摇匀。实验操作步骤3.测量条件实验——吸收曲线的测绘：取上述标准系列中铁标准溶液用量为6.0mL的显色溶液，在分光光度计上，从波长440nm开始，以含铁标准溶液为0.0mL的试液为参比，每隔20nm测定一次吸光度A值。当临近最大吸收波长附近时应每间隔5～10nm测定一次A值。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标制出吸收曲线，从吸收曲线上确定最大吸收波长（max).A4.铁含量的测定标准曲线的绘制：12345610mg/ml铁标准溶液参比2ml4ml6ml8ml10ml以不加铁标准溶液的试液为参比液，上一步骤所选择的最大吸收波长为测定波长，依次测定标准系列中各溶液的吸光度A值。以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。5．试样微量铁的测定准确移取5mL-10mL（以所测吸光度在标准曲线范围内为宜）未知试样溶液，按同样步骤和方法测定吸光度A值。在标准曲线上查出所含铁的浓度，计算水样中铁的含量。1.以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的最适宜波长条件。2.以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。根据试样的吸光度，从标准曲线求出试样中铁的含量（以μg/mL表示。数据记录和处理附：721，722型分光光度计使用方法1.打开电源开关，仪器预热20分钟2.“波长调节器”设置想要的分析波长，如340nm。3.润洗比色皿，依次装入参比溶液和测量溶液4.打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。注意：一般情况下，参比样品放在样品架的第一个槽位中；仪器所附的比色皿，其透视率是经过测试匹配的，未经匹配处理的比色皿将影响样品的测试精度；比色皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕迹。5.参比溶液于光路中，透射比模式下同时调0和100%6.在吸光度模式下，测定测量溶液的吸光度1.邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？2.吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？3.透射比与吸光度两者关系如何？测定条件指哪些？4.邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？5.加各种试剂的顺序能否颠倒？思考题