BD CBA简易操作手册-V4

BDBDCBA.................................................................................................................................................................1-1.BDCBA（Th1/Th2/Th17）.................2-201........................................................................................................................................................2-52............................................................................................................................................5-73............................................................................................................................................7-94..................................................................................................................9-125.......................................................................................................................................12-156.......................................................................................................................................16-20................................................................................................................................21-27.Q&A（）......................................................................................28-32.CytometricBeadArray(CBA)，，。。，，。，，。，，。BD，，，。，BD，CBA。，。BDCBA，。，。，(、)。，“”，。。BD，。、、。BDCBA：：BDCBAFlexSets，。：BDCBAKit，。1.BDCBATh1/Th2/Th171.：1.11.1.1BDCBATh1/Th2/Th17，2（IL-2）、4（IL-4）、6（IL-6）、10（IL-10）、（TNF）、γ（IFN-γ）17A（IL-17A）。，、EDTA（pg/ml）。80。1.1.2CBA：BDCBA，，。CBA，PE，。、，（++）。，。1.1.3BDCBATh1/Th2/Th17。IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γIL-17A。，，（FL3FL4）。231.、PE，。PE。，FCAPArrayTM。1.1.4ELISA：BDCBAELISA、。：，ELISA1/7。：。：CBAELISA，7ELISA。1.21.2.1，BDCBATh1/Th2/Th17ELISA，，。BDCBA，，。23A1IL-21，0.8mlA2IL-41，0.8mlA3IL-61，0.8mlA4IL-101，0.8mlA5TNF1，0.8mlA6IFN-γ1，0.8mlA7IL-17A1，0.8mlBTh1/Th2/Th17PE1，4mlCTh1/Th2/Th172，0.2mlD1，1.5mlE1PE1，0.5mlE2FITC1，0.5mlF1，130mlG1，30mlH1，10mlELISABDCBA。ELISABDCBA，。。1.31.3.1BDCBATh1/Th2/Th17（80）：1.3.2A1-A7）：80（A1-A7）。，（A1）（A7）。D30PMT，10。50ul/test。1.3.3Th1/Th2/Th17PEBPEIL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γIL-17A，50ul/test，80。45Th1/Th2/Th17C2。2ml，。PEE1PE，10，50ul/test。。FITCE2:FITC，10，50ul/test。。1.3.4F130mL1×PBS，，。G30mL1×，Th1/Th2/Th17。H10mL1×，。USDA1.42-8oC，。A1-A7、B、D、E1、E2、F、GH，，，。2.：4515（）303032.12.1.1：1Th1/Th2/Th172Th1/Th2/Th173，4（bdbiosciences.com/cbasetup）：。5Th1/Th2/Th176（bdbiosciences.com/cbasetup）72.22.2.1BDCBATh1/Th2/Th17CBA:488nm532nm633nm635nm，576nm、660nm680nm2.1.2，：FlowcytometerReporterchannelBeadchannelsBDFACSArrayTMYellowRedBDFACSCantoTMplatformBDTMLSRplatformBDFACSAriaTMplatformPEAPCBDFACSCaliburTM(singlelaser)BDFACSCalibur(duallaser)FL2FL3FL4Note:Visitbdbioscience.com/cbasetupforsetupprotocols.67。CBA。12×75mmBDFalcon(：352008)15ml（：352097)CBA:FCAP(PC，：641488Mac，：645447)BDCalibriteTM3（：340486）BDCalibriteTMAPC（：340487），BDFACSCalibur。3.：Th1/Th2/Th17Th1/Th2/Th173.1Th1/Th2/Th173.1.1Th1/Th2/Th17，。3.1.2：67：1.Th1/Th2/Th17，15mL，。2.2mL。A.15。B.，。3.912×75mm，1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256。4.300µl。5.a.300µl1:2，。b.1:2300µl1:4，，，1:256。c.，。3.1.37P243.2Th1/Th2/Th173.2.1:77（A1-A7），7。3.2.21.（），8、9、1，18。2.3-5。3.7，10µl。18，180µl，7，“”。4.。3.2.3，。。891.200g5。2.。3.2，。4.30。3.33.3.120-5000pg/ml，，，。。3.3.21.（：1:2、1:101:100）2.1:43.3.3。，bdbioscience.com/cbasetup，。，3。4.：1）；2）4.1。BDFACScanBDFACSCalibur。894.1.11）BDFACSCompBD2）BDCellQuestBDCellQuestPro3）4）FITCPE5）：，BDCBA，BDCBABDFACStationTMCDbdbiosciences.com/cbatemplates；，BDCBA，bdbiosciences.com/cbatemplates。4.1.2BDFACScanBDFACSCalibur，BDFACSCompBD，BD“lyse/no-wash”。BDFACSCalibur，。5（FSC、SSC、FL1、FL2FL3；FSC、SSC、FL1、FL2FL4），。4.1.3BDFACSCompBD“BDFACSComp”“BDCalibriteBeads”。BDFACSArrayBDFACSbdbiosciences.com/cbasetup。4.2，。10114.2.1，（A、BC）；BDFACSCalibur，A。APMT，BC。4.2.21）A、BC50ul；2）B50ulFITC；3）C50ulPE；4）30；5）A450ul，BC400ul。4.2.31）BDCellQuestBDCellQuestPro，4.1.1；2）；3）FSCSSCLog；4）BDFACSCompSSC。5）FSC，650。6），0.0%。，0Th1/Th2/Th17。4.2.4，：1）A，“setup”。，“Pause”“restart”。2）R1。10113）：FL3（FL4）PMT，FL35000。R3FL3（FL4）R3，R2。FL1，，FL1：2.0--2.5。4）FL2，，FL1：2.0--2.5。5）：（）。TH1/TH2/TH17。。4.2.5，：1）B，FL2–%FL1。2）R5，FL1R5。FL2-%FL1，R5R4。3）C，FL1–%FL2FL3–%FL2。4）R7，FL2R7。FL1-%FL2，R7R6。5）R9，FL2R9。FL3-%FL2，R9R8。6）（）。4.2.6Th1/Th2/Th17。5.：1.Th1/Th2/Th172．12135.1Th1/Th2/Th175.1.15.1.21．，50ul。2．50ul，：（pg/ml）10（）（）2201:2563401:1284801:6451561:326312.51:1676251:8812501:4925001:21050003．50ul。4．50ulTh1/Th2/Th17PE。5．3。6．1mL，200g5。7．。8．300ul，。5.1.3CBA。，。FCAPArray，：1．（0pg/mL），。2．，。3．（）。12131．2．（3-5）1．2．3．（AcquisitionandStorage）10244．R12100，300。5．，6．，ParametersSavedFSC-H、SSC-H、FL1-H、FL2-H、FL4-H，（），OK。7．1（）3-5，setup，FSCSSCR18．，，FCAPArray。9．HIGH。10．，3-5，。5.25.2.1：FCAPArrayTh1/Th2/Th17。：6.1,BDCBATh1/Th2/Th17CBA20pg/ml5000pg/ml。，4。。BDCBATh1/Th2/Th17CBA30。（pg/ml）IL-22.6IL-44.9IL-62.4IL-104.5TNF3.8IFN-γ3.7IL-17A18.96.2。。。1：4。EDTA。1617CytokineMatrixAverage%RecoveryMange%IL-2McdiaScrumPlasma83868472-9583-9178-92IL-4McdiaScrumPlasma81918775-8787-9485-88IL-6McdiaScrumPlasma869093