SYBRGreen-I-使用介绍

SYBRGreenI使用介绍SYBRGreenI核酸染料简介SYBRGreenI是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单，无须脱色或冲洗；至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25-100倍。SYBRGreenI与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBRGreenI染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适用于多种电泳分析。SYBRGreenI适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。SYBRGreenI与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用；另外，SYBRGreenI与EB相比，诱变能力大大降低。SYBRGreenI核酸染料特点●灵敏高：至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25-100倍。●信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。●操作简单：无须脱色或冲洗。●适用范围广：可适用于多种电泳分析。●使用方便：不影响其它修饰酶作用。●经济：价格比银染便宜。电泳用SYBRGreenI使用方法简介一、SYBRGreenI预染色方法1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。2、工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBRGreenⅠ稀释100倍，即为SYBRGreenⅠ工作液。SYBRGreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。4、样品染色：向分析样品中加入SYBRGreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，热线电话：021－648580538009881995E-mail:[e-mail]网址：Ⅰ与样品中DNA充分结合。SYBRGreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。5、DNAMarker染色：将5μLDNAMarker和5μLDNAMarker稀释液和1μLSYBRGreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBRGreenⅠ与DNA充分结合。6、上样、电泳：按常规操作。二、SYBRGreenI后染方法1、按照常规方法进行电泳。2、用PH7.0-8.5的缓冲液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀释SYBRGreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。三、SYBRGreenI使用注意事项1、在SYBRGreenⅠ预染色方法中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBRGreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。2、在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBRGreenI可以全部从双链核酸上去掉。3、如果想对用SYBRGreenI染过的胶进行Southernblots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。4、在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBRGreenI呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。5、SYBRGreen对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。荧光定量PCR用SYBRGreenI使用方法简介SYBRGreenI与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SYBRGreenI荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SYBRGreenI染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。热线电话：021－648580538009881995E-mail:[e-mail]网址：的试验成功有很多因素，但是SYBRGreenI的使用浓度是非常关键的因素，如果SYBRGreenI的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBRGreenI时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为1×到0.2×之间。镁离子浓度的影响提高镁离子浓度可以降低SYBRGreenI对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBRGreenI进行荧光PCR反应时，镁离子浓度要比无SYBRGreenI的普通PCR反应要高出0.5到3mM。热线电话：021－648580538009881995E-mail:[e-mail]网址：溴化乙锭的新型替代品，无毒无致使癌作用，其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右，与美国MolecularProbe公司的SYBRGreenI染料的灵敏度相当。使用方法与之完全相同，也可以根据荧光定量；更优势的是其在紫外灯下——双链DNA呈绿色荧光，单链DNA呈红色荧光。通过小鼠皮下注射实验，未发现有致癌作用，而溴化乙锭（EB）是一种强致使癌剂。因此选用我们新推出的GoldViewDNA染料，是一种环保、明智的选择。使用方法每100ml琼脂糖（0.8%-2%）融化后，只需加入5ul的GoldViewDNA染料即可，然后冷却至60度灌胶。注意事项该新型DNA染料虽然无致癌作用，但对皮肤和眼睛有少量的刺激性，建议操作时戴好手套。上海闪晶分子生物科技有限公司地址：上海市宜山路705号B座18楼邮编：200233联系：市场部电话：64858053800-988-1995E-mail:[e-mail]网址：热线电话：021－648580538009881995E-mail:[e-mail]网址：