FL-SOP-CL-5001-微生物样本采集、运送标准操作规程

《微生物样本采集、保存、运送标准操作程序》第1页共14页 ShanghaiFenglinClinicalLaboratoryCo.,Ltd.上海枫林医药医学检验有限公司SOP FileCode文件编号：FL-SOP-CL-5001 TITLE：Standardoperatingprocedureformicrobiologicalsamplecollection,preservation,transportation文件名称：微生物样本采集、保存、运送程序标准操作规程WRITTENBY/DATE编写者：丁星日期：2013.08.26REVIEWBY/DATE审阅者：黄永富日期：2013.08.26QAREVIEW/DATEQA审阅者：葛晓明日期：2013.08.28APPROVEDBY/DATE批准者：胡胜南日期：2013.08.29REVISIONDATE修订日期：2013.08.19NewFormat/RevisionNumber新版/修号：2/2REPLACENUMBER被替代版号:2/1EFFECTIVEDATE:生效日期：2013.09.021.IntendedUse目的规范样本采集、保存、运送程序，保证实验室检测前样本质量。2.SphereofApplication适用范围微生物实验室受理的样本。3.Responsibility职责3.1.医护人员和检验人员指导病人如何正确留取样本。3.2.护理人员负责临床样本的采集，特殊样本由临床医生采集。3.3.用户端样本保存的责任人由用户自行规定，本实验室临床样本的保存由检验人员负责。3.4.临床样本的运送由本中心实验室物流人员负责。4.Procedure程序4.1.血液骨髓样本4.1.1.采集指征：对可疑血流感染患者未进行抗菌药物治疗前，应及时进行血液培养。可疑血流感染的患者出现以下一项或几项体征时应及时采集血培养：发热（≥38℃）或低温（≤36℃）寒战白细胞增多（计数大于10000×109/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞）粒细胞减少（成熟的多核白细胞小于1000×109/L）《微生物样本采集、保存、运送标准操作程序》第2页共14页血小板减少皮肤粘膜出血昏迷多器官衰竭血压降低呼吸加快降钙素原升高C反应蛋白升高在评估可疑新生儿败血症时，除发热和低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症患儿（特别是2岁或以下的幼儿）一般出现于门诊，常伴有明显发热（≥38.5℃）和白细胞增多（总数≥20000×109/L）。老年菌血症患者，可能不发热或低体温，如伴有身体不适，肌痛或中风可能是感染性心内膜炎的重要信号。骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的，临床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主。但当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者，抽取骨髓培养阳性率会远高于血培养。4.1.2.血培养次数和采血时间采血应该尽量在使用抗菌药之前进行，推荐同时采集2-3套（不同部位）血培养，以助于提高阳性检出率，区别病原菌与污染菌。一套血培养一般为一瓶需氧培养加一瓶厌氧培养。一次静脉采血只能注入一套培养瓶中。尽可能选用可中和或吸附抗菌药物的培养基。临床对可疑菌血症患者应立即采集血培养样本，对间歇性寒战或发热可在寒战时或体温高峰来到之前0.5-1h进行采血。特殊情况除外（如怀疑细菌性心内膜炎），采集血培养后的2至5天内，无需重复采集血培养。4.1.3.特殊的全身性和局部性感染患者采集血培养的建议：急性心内膜炎：对于可能的心内膜炎患者，必须在经验使用抗菌药物前30min之内抽取血培养，起始采集3套血培养，如果在24h内仍报告为阴性，则继续采集2套血培养，全部培养一共5套。亚急性心内膜炎：需要24h之内连续从不同部位抽取3套血培养，间隔30-60min。如24h内为阴性，则继续采集2套血培养，全部培养一共5套。《微生物样本采集、保存、运送标准操作程序》第3页共14页对于亚急性心内膜炎的评估，皮肤消毒尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性的葡萄球菌。因此，血培养必须取自外周静脉血而非留置的静脉导管。取自导管的血培养会伴有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎的结论。建议采用正确的皮肤消毒，从不同外周静脉部位分别采集血培养，不能从留置的导管采血。急性脓毒症：10min内从不同部位采集2-3套血培养。可疑菌血症但血培养持续阴性，应改变血培养方法，如延长培养时间或增加特殊培养基，以获得罕见的或苛氧的微生物（真菌、结核菌等）。不明原因发热，如隐性脓肿、伤寒热和波浪热，从不同体位采集2-3套血样本，24-36h后估计体温升高前（通常下午）在采集2套以上。4.1.4.皮肤消毒程序：严格按以下三步法进行：70%酒精消毒皮肤（以采血点为中心，螺旋式用力由内到外直径5cm以上），作用60秒。用碘伏消毒皮肤（以采血点为中心，螺旋式用力由内到外直径5cm以上），作用1.5-2min；或用碘酊消毒皮肤作用30秒。再用70%酒精脱碘（以采血点为中心，螺旋式用力由内到外直径5cm以上）对碘过敏的病人只能用70%酒精消毒，消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。4.1.5.培养瓶消毒程序用70％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。酒精作用60s。在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。4.1.6.培养瓶接种程序抽取血液后，不要换针头，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混刀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，若用注射器采血，应将标本先接种厌氧瓶，再接种需氧瓶；若用蝶形针采血，则先接种需氧瓶、后接种厌氧瓶。严禁将空气注入厌氧瓶中。4.1.7.骨髓样本：用骨髓穿刺针从髂骨采集。4.1.8.采集容器：需氧和/或厌氧培养瓶。4.1.9.采集量：成人：推荐每个血培养瓶应加的血量为10ml，血液和肉汤比为1：5～10（体积：体积）。儿童：因很难获得大量的血液，一般静脉采血1～5ml用于血培养。《微生物样本采集、保存、运送标准操作程序》第4页共14页血液量太多或太少都不利于细菌的检出，血液的培养量每增加1ml,阳性率增加3～5％。人体血液内包含各种抑制细菌生长的因子或抗生素，注入血液太多可能会抑制细菌的生长。骨髓采血量一般为1～2ml。4.1.10.样本保存、运输：采集样本后保证在1小时内送至实验室，不能及时送检可置室温保存，切勿放冰箱。因为某些苛氧菌可在冰箱温度中死亡，而使培养阳性率下降。冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。实验室收到样本后立即放置于血培养仪中。4.2.脑脊液样本。4.2.1.采集指征：不明原因引起的头痛、脑膜刺激征象、颈部僵直、脑神经病理征象、发热、体温过低、易受刺激等临床症状。此外，其他实验室检查发现：脑脊液白细胞增高、蛋白质增加且葡萄糖减少等。4.2.2.采集时间：怀疑中枢神经系统感染时，应立即采集样本，昀好在抗菌药物使用之前。4.2.3.采集方法：按腰椎穿刺操作规程，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管中，每试管1-2ml，立即将第2管（或第1管）送至实验室（建议床边直接接种血培养瓶，包括需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶，增菌培养）。做脑脊液培养时，建议同时做血培养。4.2.4.采集容器：无菌容器。4.2.5.采集量：脑脊液2-3ml。4.2.6.样本保存、运输：采集样本后常温立即送检（脑脊液样本送检的昀佳时间为15min内；如果送检时间超过1h，则会影响结果），实验室收到样本后应立即接种，切勿放冰箱，否则影响检出率。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。因此，脑脊液无论涂片或培养，必须采集后立即送检。4.3.呼吸道样本（痰、鼻/咽拭子、支气管肺泡灌洗吸出物、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等）4.3.1.采集指征：出现咳嗽、咯血、呼吸困难、发热等呼吸系统感染症状。怀疑呼吸机相关肺炎，应采集支气管肺泡灌洗液或支气管刷取液做定量培养。发热、咽部发红、疼痛、咳嗽、喉部有脓样分泌物等临床症状。直接检查：手术中或组织病理检查发现脓疡者。怀疑脑膜炎奈瑟菌带菌者，应采集鼻咽拭子。4.3.2.采集时间：清晨为昀好，在使用抗菌药物之前。4.3.3.采集方法：《微生物样本采集、保存、运送标准操作程序》第5页共14页4.3.3.1.自然咳痰法：采痰样本前，应冷水漱口刷牙，除去大部分口腔内杂菌，自然用力从气管深部咳出痰液，放入痰杯内。4.3.3.2.诱导咳痰：刷完牙龈和舌头后让患者用水漱口，借助喷雾器使患者吸入约25ml3%-5%的无菌盐水诱导咳痰。4.3.3.3.下呼吸道肺泡灌洗、支气管刷洗、气管抽吸：将抽吸物或灌洗液直接放入痰杯内，刷出物放入1ml无菌盐水的痰杯内。4.3.3.4.气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集样本，适用于厌氧培养。4.3.3.5.鼻：用无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔1-2cm，对鼻粘膜旋转3圈擦取样本，插入运送培养基。4.3.3.6.鼻咽：用无菌拭子经鼻插入鼻咽后部，慢慢旋转拭子5s以吸收分泌物，插入运送培养基。4.3.3.7.咽部：采集前患者应用清水反复漱口，由采集者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次，插入运送培养基，拭子要避免接触口腔和舌粘膜。4.3.4.采集容器：运送培养基、无菌痰杯或其他无菌容器。4.3.5.采集量：痰液≥1ml，支气管肺泡灌洗液，应采集10-100ml。4.3.6.样本保存、运输：采集样本后常温2h内送至实验室。做真菌培养的样本如不能及时送检，可放4℃保存，以免杂菌生长。4.4.穿刺液样本（胆汁、胸水、腹水、关节腔积液、心包液、鞘膜液等）4.4.1.培养采集指征：胆汁：急性胆囊炎，急性重症胆管炎、伴有腹痛、黄疸，墨菲症阳性、伴有恶心、呕吐和发热，尿少色黄、伴有中毒或休克等症状。胸水：结核性胸膜炎、细菌性肺炎引起的胸膜炎伴有胸痛、发热，胸腔积液外观浑浊、乳糜性、血性或脓性。腹水：原发性或继发性腹膜炎伴有腹痛、呕吐、腹肌紧张、肠鸣音减弱或消失。心包积液：结核性、风湿性、化脓性、细菌性心包炎。关节腔积液：化脓性关节炎、关节肿胀、关节周围肌肉发生保护性痉挛。4.4.2.采集时间：怀疑感染存在，应尽早采集样本，一般在患者使用抗菌药物之前或停用药物之后1-2日采集。4.4.3.采集方法：《微生物样本采集、保存、运送标准操作程序》第6页共14页4.4.3.1.胆汁：胆汁的采集方法有十二指肠引流法（以B管—来自胆囊，做细菌培养意义较大）、胆囊穿刺法及手术采取三种方法。有临床医生采取，约2cm左右放入无菌密封容器立即送检。4.4.3.2.其他穿刺液：按穿刺消毒规范，消毒皮肤后，由临床医生穿刺采集样本（2ml左右），装入无菌密闭容器立即送检。4.4.4.采集容器：无菌容器。4.4.5.采集量：1-5ml（慢性非卧床腹膜透析有关的腹膜炎时，采集至少50ml的量可以提高检出率）。4.4.6.样本保存、运输：采集样本后常温2h内送至实验室。4.5.尿液样本4.5.1.采集指征：有典型的尿道刺激症状肉眼脓尿或血尿尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性（几个+号）不明原因发热，无其他局部症状留置导尿管时间超过48h的患者出现发热膀胱排空功能受损泌尿系统疾病手术前4.5.2.采集方法：样本采集应力争在未使用抗菌药物前，注意避免消毒剂污染样本。4.5.2.1.清洁中段尿：昀好留取早晨清洁中段尿样本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后到医院，由专业人员指导下采集中段尿样本。尿液样本消毒采集程序：女性中段尿采集方法：用肥皂水完全清洗尿道区域，用湿纱布垫漂洗。分开阴唇，开始排尿。排出前段尿后，不停止尿流，采集中段尿。男性中段尿采集方法：用肥皂水清洗阴茎头，用湿纱布垫漂洗。回缩包皮，开始排尿。排出前段尿后，不停止尿流，采集中段尿。4.5.2.2.耻骨上膀胱穿刺：此法用于厌氧菌培养。耻骨上皮肤经碘酒消毒后，用75%酒精擦拭，《微生物样本采集、保存、运送标准操