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实验十三食品中亚硝酸盐的测定（盐酸奈乙二胺法）16090211李亚东一、实验原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化以后，再与盐酸奈乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大的吸收波长为538nm，因此可以通过测定样品液反应后的吸光度并与标准比较定量。二、实验试剂1、氯化铵缓冲液:在1L玻璃烧杯中，加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，混匀，准确加入50mL氨水，必要时用稀盐酸和稀氨水调试至PH9.6-9.7。2、硫酸锌溶液（0.42mol/L）:称取120g硫酸锌（ZnSO47H2O）用水溶解并稀释至1000mL。3、氢氧化钠溶液（20mol/L）:称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1000mL。4、对氨基苯磺酸溶液:称取1g对氨基苯磺酸，溶于70mL水和30mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。5、N–1-萘基乙二胺溶液:称取0.1gN-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶液，并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。6、显色剂:临用前将N-1-萘基乙二胺溶液和氨基苯磺酸溶液等体积混合。7、亚硝酸钠标准溶液:准确称取0.2500g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500ug的亚硝酸钠，作储备液。8、亚硝酸钠标准使用液:临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.0mL置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug亚硝酸钠。三、实验仪器分光光度计四、实验步骤1、称取10g左右的火腿于研钵中，用量筒量取70mL的水，加入一部分于研钵中，将其研成肉糜状。2、将肉糜状的火腿转移至烧杯中，用剩下的水冲洗研钵，一同倒入烧杯中。加入12mL氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌均匀。3、测量液体的pH值，若其大于8，则将烧杯中所有物质转移至250mL容量瓶中；若小于8，则再加氢氧化钠直至大于8为止。4、加入10mL硫酸锌溶液，混匀，容量瓶中出现为乳白色的乳浊液。5、放入60℃的水浴锅中加热10min。6、取出，用流水冷却，加水定容。然后静置30min。7、出去容量瓶中的上层脂肪，然后用漏斗过滤，弃去初始的20mL滤液。但是要全部过滤完得出滤液的总体积。8、制作标准曲线：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0，2.5，5，10，15，20，25ug亚硝酸盐）分别置于25mL容量瓶中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液，加2.5mL60%乙酸后，立即加入5.0mL显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯（灵敏度低可换2cm比色杯），以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线，求出回归方程。9、测定样品吸光值分别吸取10mL过滤好的样液于两个容量瓶中，其他试剂按标准系列法操作。测出样品的两个吸光值五、计算公式：式中:X:样品中亚硝酸盐的含量,mg/kg;m1:样品质量，g；m2:测定用样液中亚硝酸盐的质量，ug；V1:样品处理液总体积V2:测定用样液体积结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。允许差:相对相差≤10%六、实验结果及分析标准曲线结果亚硝酸盐（ug）02.5510152025吸光值00.0390.0710.1760.2440.3140.391根据数据制作标准曲线如下:两个样品的吸光值为0.204和0.202。计算得出的亚硝酸盐含量分别为13.53ug和13.4ug。m1(g)m2(ug)V1(mL)V2(mL)X(mg/kg)样品A10.013113.53218.51029.52样品B10.013113.40218.51029.24X=(XA+XB)/2=29.38mg/kg分析：火腿肠中亚硝酸盐的正常含量在30mg/kg之内，所测定的样品中亚硝酸盐的含量在此范围之内，因此测定用的火腿肠符合质量要求。误差分析：1、转移时有小部分火腿渣在研钵内2、去除脂肪时带走一部分溶液。