实验八姐妹染色单体交换试验

实验八姐妹染色单体交换试验一、实验原理在分裂的细胞中，每条染色体由两条姐妹染色单体组成，每条染色单体则由一个双链DNA分子构成。当细胞在加有5溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）的培养基中进行培养时，BrdU取代胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（TdR）掺入到新复制的DNA核苷酸链中。细胞在BrdU中生长，第一个周期（DNA经过一次复制）后，每条染色体的两条姐妹染色单体的DNA双链中各有一股链含有BrdU。经过第二周期（经过两次复制）后，两条姐妹染色单体中，一条单体的DNA双链类似第一周期，为单股链含BrdU，另一条单体两股链均含BrdU。两股都含有BrdU的染色单体螺旋化程度较低，与某些染色剂的亲和力低，用Giemsa染色时着色较浅，而仅有单股含BrdU的单体着色仍较深，两条姐妹染色单体显出深浅不同的颜色，当姐妹染色单体间发生同源片段交换时，就可以根据每条染色单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。在正常情况下，第二周期细胞的每条染色体的两条单体一条被深染，另一条为浅染，当发生姐妹染色单体互换时，可在同一条染色单体上看到深浅不同的颜色。如果环境中有对染色体或DNA损伤的物质时，姐妹染色单体可发生部分部分片段互换，有毒物质毒性越高，对DNA或染色体损伤越严重，则互换的频率越高。通过与正常对照组的对比，就可对被测物质的毒性作出安全性评价。chromatidBrduFirstduplicationSecondduplicationThirdduplicationBrduBrduchromasomechromasomechromasome三、实验用品1、器材：水浴锅、紫外灯、温度计、擦镜纸、培养箱、离心机、离心管、培养瓶、显微镜、滴管2、试剂：RPMI1640培养基、2×SSC缓冲液、Giemsa染液、BrdU溶液(500μg/ml)、甲醇、冰醋酸、0.075MKCl、秋水仙素溶液（12.5μg/ml）、PH6.8PBS、3、材料：人外周血四、实验步骤（一）外周血培养及染色体标本片制备按常规方法采血、接种，置37℃恒温培养24h后，各加入BrdU（终浓度为10ug／ml），继续避光培养48小时后，按外周血培养及染色体标本片制备常规方法收获、制片。制好片后，自然老化1～7天。作业完成此次实验报告(包含实验原理、实验药品、实验步骤）