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卫生和微生物学基础知识培训卫生基础知识卫生的概念GMP实施中的卫生管理卫生的概念卫生是指个人、集体的生活卫生和生产卫生的总称。一般指为增进人体健康，预防疾病和创造合乎生理要求的生产环境、生活条件所采取的个人和社会的措施。卫生又分为：健康卫生清洁卫生卫生的概念健康卫生：世界卫生组织（WHO）对“卫生（Health）”的定义为：身体、精神与社会适应上处于完全良好的状态，实际指“健康”。这是一种包含生理、心理和社会多方面因素的全方位的现代的健康卫生观念。卫生的概念清洁卫生卫生（Hygiene）的另一种解释为：作为保持健康与预防疾病的方法的清洁理论与实践。也就是清洁卫生。卫生的概念卫生和健康是密不可分的。药品GMP所关注的卫生是清洁卫生。药品GMP均要求在环境卫生、工艺卫生和人员卫生等几个方面进行管理。卫生管理卫生管理的必要性卫生管理的要求卫生管理的必要性卫生管理是防止产品污染的一种措施和手段；污染会导致体外诊断产品失效或影响产品的稳定性；只有符合生产工艺要求的卫生环境才能生产出符合质量要求的产品；卫生管理的要求我们的生产工艺要求，我们需要在生产环境卫生、生产人员卫生、生产工艺卫生等方面实施管理；生产工艺卫生包括：物料卫生、设备卫生、生产介质卫生、工艺技术卫生。GMP中的第48-56条专门对卫生管理的要求作出了规定。生产工艺卫生的“5S”管理“5S”是指整理（sort）、整顿（setinorder）、清扫（standardizedcleanup）、清洁（shine）和保持（sustain）。5S管理不仅是生产工艺卫生管理所要求，也是GMP生产管理的必要基础。微生物学基础知识微生物学及微生物的概念微生物的种类和分布微生物的控制——防腐、消毒与灭菌药品生产中的微生物生态学分布以及相应预防方法微生物学及微生物的概念微生物学是研究微生物生命活动的一门生物学分支学科。可分为基础微生物学和应用微生物学。微生物是指一类体积微小、结构简单、大多是单细胞的、必须用光学显微镜观察形态的微小生物的通称。包括：无细胞结构不能独立存活的病毒、亚病毒（类病毒、拟病毒、阮病毒）、具有原核细胞结构的细菌、古生菌，以及具有真核细胞结构的真菌（酵母、霉菌、覃菌等）、单细胞藻类、原生动物等。微生物的种类和分布微生物种类繁多，至少在10万种以上。按其结构、组成等，可分为三大类。微生物的种类性状非细胞类型细胞型原核细胞型真核细胞型种类病毒细菌、支原体，立克次体，螺旋体，放线菌真菌大小（µm）0.02-0.300.2-0.56.0-15.0核酸DNA或RNADNA+RNADNA+RNA核膜——+核仁——+组蛋白——+内质网——+线粒体——+核蛋白—+（70s）+（80s）溶菌体——+活细胞培养需需（立克次体、衣原体）不需微生物的控制微生物控制的相关术语及其概念；常见消毒灭菌法；微生物控制的相关术语及其概念消毒灭菌防腐无菌微生物控制的相关术语及其概念消毒（disinfection）：杀死物体上的病原微生物的方法，起到防止污染或防止感染或传播的作用。并不一定能杀死含芽孢的细菌和非病原微生物。但提高浓度或延长时间也可杀死芽孢。用以消毒的药品称为消毒剂。灭菌（sterilization）：杀死物体上所有微生物的方法。因此，灭菌比消毒要求高，包括杀死病原微生物和非病原微生物、细菌的繁殖体和芽孢。微生物控制的相关术语及其概念防腐（antisepsis）：防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一化学药品可以在高浓度时为消毒剂，低浓度时为防腐剂。无菌（asepsis）：不含存活微生物的状态，防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，称为无菌技术。我们公司的产品不是无菌产品。常见消毒灭菌法物理消毒灭菌法：热力灭菌法辐射灭菌法过滤除菌法化学药品及化学气体消毒灭菌法：环氧乙烷灭菌法臭氧灭菌法汽化双氧水灭菌法其他气体灭菌法化学药品浸泡、擦拭法物理消毒灭菌法热力灭菌法：干热灭菌法：干热灭菌作用是通过脱水干燥和大分子变性，一般细菌繁殖体在80-100℃经1小时可被杀死；芽孢则需要160-170℃经2小时才可杀死。方法有焚烧、烧灼、干烤等。湿热灭菌法：巴氏消毒法：用较低的温度杀死液体中的病原菌或特定微生物，而保持物品中所需不耐热物质的消毒方法，一般是62℃半小时或71.7℃经15-30秒；湿热灭菌法煮沸法：一般细菌繁殖体，煮沸5分钟即被杀死，细菌芽孢需煮沸1-2小时才被杀死。在水中加入2%碳酸钠，即可提高沸点至105℃，提高杀死芽孢的能力，又可防止金属器皿生锈。流动蒸汽消毒法：又称常压蒸汽消毒法，是利用1个大气压下100℃的水蒸汽进行消毒，细菌繁殖体经15-30分钟可被杀死，但芽孢常不完全被杀灭。间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流动蒸汽间歇加热，以达到灭菌的目的，一般连续三次。高压蒸汽灭菌法：是一种最有效的灭菌方法，灭菌温度取决于蒸汽的压力。高压蒸汽灭菌温度、压力与时间对应表灭菌温度蒸汽压力时间（min）kPakg/cm（磅）115.5℃68.950.7（10）30121.5℃103.421.05（15）20126.5℃137.901.4（20）102幅射灭菌法幅射灭菌是利用电磁幅射产生电磁波杀死微生物的一种方法。主要有以下几种：紫外线：波长为200-300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱一致。紫外线主要作用于DNA，干扰DNA的复制与转录，从而导致细菌的死亡与变异。但紫外线的穿透力弱，多用于表面消毒。紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤所用，使用时注意防护。幅射灭菌法微波灭菌：是利用高频电场使物质内部分子极化迅速升温的灭菌方法，波长1mm-1m左右，频率在300MHz至300GHz之间的电磁波。消毒中常使用的微波有2450MHz和915MHz。电离辐射灭菌法：包括高速电子、X射线和γ射线等，其机制在于产生游离基，破坏DNA。常用于大量一次性医疗塑料制品的消毒，亦可用于食品的消毒，而不破坏其营养成分。过滤除菌法是用物理阻留的方法将液体和空气的细菌除去，以达到无菌的目的。所用的器具是滤器。用于过滤病毒的滤膜孔径为25-100nm；过滤细菌的滤膜孔径为0.22-0.45µm化学气体消毒灭菌法许多化学药物能影响细菌的化学组成、物理结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒和灭菌的作用。化学气体消毒灭菌法环氧乙烷灭菌法：用于塑料制品、医疗器械等的灭菌。臭氧灭菌法：一般用于一定空间的消毒，如管道、洁净室的消毒。汽化双氧水灭菌法：即经汽化的过氧化氢。在冻干机等制药设备的灭菌中使用较多。化学气体消毒灭菌法其它气体灭菌法：甲醛：用于无菌室熏蒸。对人的眼、鼻、喉等刺激性强，使用时应注意安全。丙二醇、乳酸、过氧乙酸等也可类似甲醛一样进行熏蒸消毒。常用化学消毒剂灭菌重金属化合物：硫柳汞，常用浓度0.01-0.02%，用于生物制品防腐。氧化剂：有氯气、漂白粉、次氯酸钠、碘酊、双氧水、高锰酸钾、过氧乙酸等。特点是依靠氧化能力，导致微生物的酶活性丧失达到灭菌的目的。醇类：常用的有乙醇，对细菌繁殖体有较强的杀灭作用，对病毒也有一定的效果。75%浓度时杀菌能力最强。异丙醇，杀菌最适浓度为70%，较乙醇强，但有强烈的刺激性气味。常用化学消毒剂灭菌醛类：戊二醛，是广谱、高效、快速的消毒剂。对HBV和HIV也有作用。常用1.5%的碱性水溶液。酚类：苯酚及常用的甲酚皂（来苏尔），1%-2%水溶液用于手和皮肤消毒，3%-5%溶液用于器械、用具消毒，5%-10%溶液用于排泄物消毒。常用化学消毒剂灭菌表面活性剂：又称去污剂。能吸附于细胞表面，改变胞壁的通透性，使菌体内物质溶出，呈现杀菌作用。如新洁尔灭等。酸类：有乳酸、硼酸、醋酸、三梨酸等药品及体外诊断试剂生产中的微生物生态学分布及相应的预防方法空气中的微生物工艺用水中的微生物厂房建筑与设备表面的微生物人体的微生物物料的微生物空气中的微生物空气中的微生物来自灰尘微粒和来自人的皮肤与衣服，以及由谈话、咳嗽、打喷嚏等造成的飞沫。药品和体外诊断试剂生产中，减少空气中微生物数量的方法常用有以下三种：空气洁净技术采用的过滤方法：此方法一般可除去大于0.1µm的微粒及微生物，可用于整个房间如洁净室、洁净区，也可用于局部操作区，如层流罩、超静工作台、生物安全柜等。空气中的微生物化学消毒法：定期对工作场所进行熏蒸消毒，如甲醛熏蒸或使用臭氧发生器；紫外线照射方法：采用紫外线杀灭空气中的细菌。工艺用水中的微生物工艺用水在我们的生产中不但作为产品的一种成分而且也用于洗涤。我们产品的微生物污染的关键环节在于工艺用水，所以工艺用水在防止污染方面至关重要。因此，我们生产所用的水必须是经过处理的纯化水，我们国家的药典对纯化水中的微生物也规定了限度标准。工艺用水中的微生物常用对水的消毒方法与对空气的消毒方法基本一致：膜过滤法：一般采用0.22µm孔径的滤膜进行过滤除菌。紫外线照射法：一般与微孔膜结合使用。化学消毒方法：主要用于对水系统的储水罐和管道的定期消毒，有双氧水、臭氧、次氯酸钠等，也可以用蒸汽。厂房建筑与设备表面的微生物厂房设施、以及设备表面、容器内外表面都有微生物寄存。所以要求生产车间的厂房围护结构表面不透水、光滑平整、无裂缝，接口严密，无脱离物，并能耐受清洗和消毒。要求设备、管道应易于拆卸、机构简单、便于清洁和消毒。要求所用容器，都应进行清洁和消毒。人体的微生物人体体表皮肤与外界相通的腔道如口腔、鼻咽腔、眼结膜、泌尿生殖道均存在不同种类的微生物。我们生产车间要求人员进出洁净区按更衣、洗手、消毒程序进入，操作时佩戴口罩、手套，这些措施都是为了防止人体所带的微生物对产品造成污染。物料的微生物物料指生产所用的原料、辅料和包装材料；原辅料可能含有大量的微生物，可能将大量的微生物带入到产品中。物料中的微生物的控制：物料在进入洁净区时要进行外包装脱包，不能脱包的要进行清洁、消毒处理。一般用75%乙醇擦拭外表面。物料微生物的控制配制含生物活性物质及丰富蛋白质的基液及其盛装的容器具、量具、吸管都必须进行高压灭菌。配制过程中要在百级层流罩内，尽量按无菌操作规定来操作。所有配制好的液体，未及时分装时，必须密封瓶口，以防止微生物的进入。如果条件允许，过滤除菌是最好的解决办法。