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邻二氮菲吸光光度法测定微量铁无机及分析化学实验一、实验目的•了解分光光度计的结构和正确的使用方法•学习如何选择吸光光度法分析的实验条件•学习吸收曲线、工作曲线的绘制及最大吸收波长的选择二、实验原理•吸光光度法是根据物质对光选择性吸收而进行分析的方法。•吸光光度法具有较高的灵敏度和一定的准确度，特别适合于微量组分的测量。•I0----某一波长的单色光•S----某一吸光物质溶液•It----透过光•T----透光率（透射比）•A----吸光度I0ItT=0tIIA=lgT1s朗伯-比尔定律•A=Kdc•当液层厚度d以cm，吸光物质浓度c以mol/L为单位时，系数K就以ε表示，称为摩尔吸光系数。朗伯-比尔定律表示为：A=εdc分光光度计的结构光源单色器比色皿光电元件输出装置仪器结构-正视图仪表盘样品室门试样槽拉杆波长指示窗波长手轮转动此手轮可选择所需波长仪器结构-背视图电源开关光强旋钮电源线插座仪表盘数显窗T、A、C指示灯“复位”键反向置数键正向置数键键”TAC“键T、A、C读数显示窗，左侧发光管亮表示负号当显示数溢出或程序执行停止、程执行紊乱时，按此键可使仪器恢复正常按此键可循环选择三种测量模式721W型分光光度计的使用方法1.预热打开仪器电源开关，预热30分钟。注意：预热时，样品室盖应打开。2.比色皿的使用•从蒸馏水中取出比色皿，擦干。注意拿比色皿的时候拿毛玻璃面。•向比色皿内注入少量试液，润洗三次，然后注入3/4至4/5的试液，用滤纸片擦干外壁所挂水珠。•注意光面对光源。3.吸光度测量•在试样槽中放置参比溶液与样品，参比溶液应放在第一个试样槽中。•转动波长手轮，使显示窗显示所需波长。•使参比溶液位于光路中，打开样品室盖，按TAC键使T指示灯亮，仪器自动调节T为0%；关上样品室盖，仪器自动调节T为100%。•拉动拉杆，使样品进入光路，按TAC键使A指示灯亮，待仪器稳定后从显示屏上读取吸光度值。邻二氮菲是测定微量铁的较好试剂。在pH=2-9的溶液中，试剂与Fe2+生成稳定的红色络合物，其lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε=1.1*104，红色络合物的最大吸收峰在510nm波长处。三、实验步骤1.条件实验a.吸收曲线的制作和测量波长的选择用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液，在440~560nm之间，每隔10nm测一次铁标准溶液的吸光度，在最大吸收峰附近，每隔5nm测一次吸光度。b.显色剂用量的选择2.工作曲线的制作在6个50mL容量瓶中，用吸量管分别加入0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL铁标准溶液，分别加入1mL盐酸羟胺，2mLPhen，5mL醋酸钠溶液，摇匀，定容。10min后测量其吸光度。3.含铁水样的测定四、数据处理1.吸收曲线以A为纵坐标，λ为横坐标。对Fe2+-phen(橙红色)溶液会图，得到吸收光谱曲线，本实验一般为510~515nmA400500600λλmax2.标准曲线（工作曲线）•A—吸光物质的吸光度为纵坐标•C—吸光物质的浓度为横坐标标准曲线CA0五、注意事项•进行条件实验和制作标准曲线时，加入试剂的顺序不能任意改变。•应使用吸量管准确移取试剂。六、思考题•本实验中盐酸羟胺和醋酸钠的作用分别是什么？•吸收曲线和标准曲线有何实际意义？•怎样用吸光光度法测定水样中总铁和亚铁的含量？