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菌种开启GNA或GNA+B符合纯如不纯如不纯革兰氏染色划线于基础培养基检验纯度革兰阴性杆菌革兰阳性杆菌革兰阳性球菌阴性阳性GNA+B有芽孢无芽孢BacillusListeria阴性阳性StrepStaph氧化酶触酶血浆凝固酶动力25℃+37℃-不合格，无须往下检验不合格，无须往下检验M3附录A菌种检验流程图附录B鉴定条使用说明书B.1GN-ID鉴定条使用说明书B.1.1接种和培养（1）挑取培养18～24h的纯培养物至3～5ml无菌生理盐水中，混合均匀；（2）小心打开鉴定条的粘性封口膜（不要丢弃），用无菌滴管加3～4滴（约100微升）菌悬液至每个小管，然后在管上有黑色圈标志的管1、2、3、9（GNA）和管20、24（GNB）中滴加3～4滴矿物油；注：如果培养物为氧化酶阳性，则管（黑色虚线）20不加矿物油。（3）用粘性封口膜封住管口，检查管7、11、12（GNA）和14（GNB）上面的封口膜上是否有透气小孔，然后放至35～37℃的培养箱中孵育；（4）对于肠杆菌科的培养物，在18～24小时后读结果，而氧化酶阳性培养物则在48小时后读结果。B.1.2结果判读和添加配套试剂B.1.2.1结果判读打开粘性封口膜，参考结果对照图和反应结果对照表读GNA和GNB的反应结果，并将结果记录于报告单上。B.1.2.2添加配套试剂（管的上部为绿色标志）：加2滴Kovac试剂于管8（GNA）中，60秒后记录结果，红色为阳性；加1滴VPⅠ和一滴VPⅡ于管10（GNA）中，15-30分钟后记录结果，深红色表明为阳性结果；加1滴TDA于管12（GNA）中，60秒后记录结果，桃红色标明阳性。记录ONPG的结果之后，在管7中加1滴NitrateA和1滴NitrateB试剂，60秒后记录反应结果，红色表示阳性，黄色或无色表示阴性(若为黄色或无色，可加少量锌粉，如果仍保持无色或黄色，则表示硝酸盐已被彻底还原为氮气，判断为阳性，若变红色，则说明硝酸盐仍保留在管内，被锌粉还原，判断为阴性)；如：加入NITA+NITB红色——阳性无色或黄色——阴性加入锌粉：无色或黄色——阳性红色——阴性B.1.3结果记录和读取在GN-IDA+B的结果记录单上，将每三个反应分为一组，每组中反应底物下面均标有1、2、4数值，将每组中阳性反应对应的数值加起来，将得到一个四位数（GNA）、或者八位数（氧化酶阴性GNA+B）或者九位数（氧化酶阳性GNA+B），将这个数值输入microgen电脑鉴定软件系统，系统将显示数据库中5个最接近结果的菌种，以及每个结果的可能性几率以及相似性，从而得到鉴定结果。注：对于革兰氏阴性氧化酶阳性培养物：①如果反应结果较弱，，则记为阴性；②氧化酶反应、硝酸盐还原以及动力的测定结果得到的数值之和应包括在判读的九位数中。GN-ID反应结果对照表：管号反应描述阳性阴性1Lysine赖氨酸在赖氨酸脱羧酶的作用下，赖氨酸产生尸胺，使pH上升，溴麝香草酚蓝变绿/蓝色绿色/蓝色黄色2Ornithine鸟氨酸在鸟氨酸脱羧酶的作用下，鸟氨酸产生腐胺，使pH上升，溴麝香草酚蓝变蓝色蓝色黄色/绿色3H2S还原硫代硫酸钠产生H2S与铁盐生成黑色沉淀黑色/棕色黄色4Glucose葡萄糖发酵，碳水化合物产酸使溴麝香草酚蓝变色黄色绿色/蓝色5Mannitol甘露醇6Xylose木糖7ONPG半乳糖苷酶水解ONPG产生黄色的邻硝基酚黄色无色8Indol吲哚色氨酸产生吲哚与Kovac试剂生成粉红色化合物Kovac试剂2滴60秒后粉色/红色无色9Urease尿素酶尿素水解产胺，使pH上升，酚红由黄变为深红色深粉红色黄色至浅粉色10VP由葡萄糖产生丙酮，在KOH环境中与α-奈酚和肌酸生成红色化合物VPⅠ和VPⅡ各一滴，15-30min后深粉红色/红色无色至浅粉色11Citrate柠檬酸盐唯一碳源柠檬酸盐的利用使pH上升，溴麝香草酚蓝由绿变蓝蓝色/蓝绿黄色/浅绿色12TDA色氨酸脱氨酶使色氨酸生成吲哚丙酮，酸在三价铁离子存在时出现桃红色TDA试剂1滴60秒后樱桃红黄色或棕色13Gelatin明胶液化明胶使黑色颗粒分散于整个管中黑色无色14Malonate丙二酸盐当丙二酸盐作为唯一碳源时将抑制琥珀酸转化为富马酸，因此菌株不能利用丙二酸盐时，琥珀酸将积累使菌株不能生长，阳性菌株可利用丙二酸同时将硫酸铵作为氮源生成NaOH使pH上升，指示剂变蓝色蓝色黄色15Inositol肌醇发酵碳水化合物产酸使溴麝香草酚蓝变色黄色蓝色16Sorbitol山梨醇17Rhamnose鼠李糖18Sucrose蔗糖19Lactose乳糖20Arabinose阿拉伯糖21Adonitol阿东醇22Raffinose棉子糖23Salicin水杨素24Arginine精氨酸在精氨酸双水解酶作用下，精氨酸生成鸟氨酸、氨和CO2，使pH上升，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为蓝色，24小时：48小时：绿/蓝蓝黄黄/绿