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1.在10-20mL管内注入5mLLB/ampicillin(50ug/mL)培养基，接种带有目的质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养12-16h2.取1.5-5mL菌液于合适的离心管中，10000×g室温离心1min，收集菌体沉淀3.小心除去上清，加250uLSolutionⅠ/RNaseA，涡旋或用移液枪上下吹打重悬菌体，这一步对提高质粒产量至关重要4.加250uL的SolutionⅡ，轻轻来回颠倒混匀4-6次，得到澄清的裂解液。在室温孵育2min是必要的，但不要用力摇晃否则降低质粒纯度5.加125uL的预冷BufferN3（提前置于冰上），颠倒混匀几次直至出现白色絮状沉淀，≥12000×g室温离心10分钟（4℃更好）6.小心移上清至干净的1.5mL离心管中，加入0.1倍体积的ETRSolution。颠倒混匀7-10次，在冰上孵育10min，孵育过程中可颠倒几次。注：加入ETRSolution后，溶菌产物会变浑浊，但是冰上孵育后变澄清7.42℃孵育5min，溶菌产物再次变浑浊，12000×g25℃离心3min。ETRSolution会在管底呈现蓝色分层8.转移上清至新的1.5mL离心管中，加入0.5倍体积96%-100%的乙醇(室温)，颠倒混匀6-7次，室温孵育1-2min9.取第8步混合液700uL加入到一个干净的HiBindTMDNAMini柱装配与2mL的收集管内（试剂盒提供），10000×g室温离心1min过柱10.弃滤液，将第8步剩余混合液离心过柱如上11.取500uLBufferHB洗柱，离心过柱如上。注：这步是为了去除残留的蛋白质，并得到高质量的质粒12.弃滤液，加700uLDNAWashBuffer洗柱，离心过柱如上，弃滤液。注：浓缩的DNAWashBuffer使用前需按照标签提示用无水乙醇稀释13.重复第12步，再加入700uLDNAWashBuffer14.弃滤液，将空柱子套回离心管，以最大转速（≥13000×g）离心2min，干燥柱子。注：这一步是为了除去残留的乙醇15.将柱子套在一个新的1.5mL离心管中，取30-50uLEndotoxin-FreeElutionBuffer(或者水)直接打在柱子上，以最大转速（≥13000×g）离心1min洗脱质粒。注：一次可洗脱约70%-85%的质粒，可再洗一次，但会降低质粒浓度。