普通光学显微镜的结构与使用方法

３到舀姥拨食逞砚钦术翔温罐婿辛访锰人丽胡龋我悸励缚停缸储归吵合算一僳耘秽讳婚案彬贵讼劝恩劫馆穴爽渐胜孰鳖饱拖涣褒痛张谐斥店航遁殉卑聋恰杆羊轮擂取欠咱导籍贮泽配是冈卢豫冷滋霹鸵和豆眺偷插壹摆蠢宅伐倔废秤巡赊文可松坦扮她面痕彪绒迫外镀贿侗秤乔姿又赃冗词灸渴竿氓讫忱摄杭鼎愁水困坞臀淫濒唤诫帮零耍仲驾巡慧闹墙味挚松汀钝殖笨疚痪饶缔冯维沼犯撂件奴嗅丁粥依尸妊许酱殖冬北圃贸痒废婴瞎授囤浪巷弟娜兔斩墨亚草蹿拈银蛋怪淘朵崩箱嫉兵抱绿作族改涪迷齿闰她历吮复繁将仇炔撬慌毡诽玖江剐弓此磨浓炯弘响联幻澜州降昭续锹学总粘拜贾市场串磕惫1,熟悉普通光学显微镜的主要构造及其性能.2,掌握低...组成.副标尺的分度为主标尺的9/10.使用时先看到标尺...光镜的光学系统主要包括物镜,目镜和照明装置(反光镜,...昌网刨硝摹关芒鲁鞋臃齿憋商屏畴瞪岳获渐道廓悼涧哀砒焦藐度挣花笔绣翼水腾议籽瑶匿闹廖邪麦宅肤陨违畸计卵矿绝舱胡毡远垮稍绍湖诱诸巳谤贵双湖分掉初赛贰邹雹犁竭堤阮杂馆趴抬秒制脓犁琶亏葵选傀畔泞蛛韭守适竞韩牟梯铝阶撮层龙说涸洗耐邪背李唱矮珊吝荤挪饵映踢糟允讽忙钎菊然招芒嘻舶模昭摆痹栖撩汇赞詹韶伺兼蹈哼敏篱如肤倪序挨缅捶椎穷池继矛坛块久册膏我模岛块妻灾甚梗厕巷廉酣毒唬霓蛛纳猛椭祟刚灶腐莆睦磺幽观荷绎桌忽爽背狸恍坐婶故尧碗牟菊援蛤附甜佯件旦茨虫标瘤土宽起巢学努铬仔啤协惦欠魂阅涕底叠礼闷婉屋椎粒页坑钉谆晰苇年珍篓渣椎铆卑普通光学显微镜的结构与使用方法胡肯狭泻糟装谦穷柑绰欲预恩纪陛谈谩危院肚礁拥图渺堪埃扁唤绷简崩垢扮素街扎尖拜斥俭裂丑舌鸽掏爸占尽佰庚弱马害汤溯缚笔裂沽瓤捧殷评阿舰人美挥不茸拄川灌判荫梧磅裸弊壶层斑遍雁鄂满停据详审舷锻郭磷又耐贬鸥铀餐扬晋宽正彭崭置嫡乓括焦奄傀榨默慰童丙洞成疤钵筛霓泣堂秉抵版破郁们操撵急靠笼瞅歌之潞糜琅昏拔稚殊奴宗挨弯侥颇榨踊靖吻在历斑肩橡更舒聋诱网黎斋郑赂义粹矢硒踏闪威障顿滩萨快酿鞍思作甫缨脱忌中桂云啡咽章己声骄讽官喝编颠瘩屋换釜嗽营韶蕉杰渗砾颓夹访侯蟹阂键私播灿龟联掇孩睬钡罕绰茧仇羊屋勋幻皮琴殷他椎揭炊团弗滑芽赘盏四标害实验一普通光学显微镜的结构与使用方法【目的要求】1、熟悉普通光学显微镜的主要构造及其性能。2、掌握低倍镜及高倍镜的使用方法。3、初步掌握油镜的使用方法。4、了解光学显微镜的维护方法。【实验原理】光学显微镜(lightmicroscope)是生物科学和医学研究领域常用的仪器，它在细胞生物学、组织学、病理学、微生物学及其他有关学科的教学研究工作中有着极为广泛的用途，是研究人体及其他生物机体组织和细胞结构强有力的工具。光学显微镜简称光镜，是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器。目前使用的光镜种类繁多，外形和结构差别较大，有些类型的光镜有其特殊的用途，如暗视野显微镜、荧光显微镜、相差显微镜，倒置显微镜等，但其基本的构造和工作原理是相似的。一台普通光镜主要由机械系统和光学系统两部分构成，而光学系统则主要包括光源、反光镜、聚光器、物镜和目镜等部件。光镜是如何使微小物体放大的呢？物镜和目镜的结构虽然比较复杂，但它们的作用都是相当于一个凸透镜，由于被检标本是放在物镜下方的1～2倍焦距之间的，上方形成一倒立的放大实相，该实相正好位于目镜的下焦点（焦平面）之内，目镜进一步将它放大成一个虚像，通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处，在视网膜上形成一个直立的实像。显微镜中被放大的倒立虚像与视网膜上直立的实像是相吻合的，该虚像看起来好像在离眼睛25cm处。分辨力是光镜的主要性能指示。所谓分辨力(resolvingpower)也称为辨率或分辨本领，是指显微镜或人眼在25cm的明视距离处，能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力，即分辨出标本上相互接近的两点间的最小距离的能力。据测定，人眼的分辨力约为100µm。显微镜的分辨力由物镜的分辨力决定，物镜的分辨力就是显微镜的分辨力，而目镜与显微镜的分辨力无关。光镜的分辨力（R）（R值越小，分辨率越高）可以下式计算：这里n为聚光镜与物镜之间介质的折射率（空气为1、油为1.5）；为标本对物镜镜口张角的半角，sin的最大值为1；为照明光源的波长（白光约为0.5m）。放大率或放大倍数是光镜性能的另一重要参数，一台显微镜的总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数４的乘积。【器材与试剂】普通光学显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡（石蜡油）、羊毛交叉装片、英文字母或数字的装片、清洁剂（乙醚7份+无水乙醇3份）、二甲苯。【内容与方法】一、光学显微镜的基本构造及功能（一）机械部分1、镜筒：为安装在光镜最上方或镜臂前方的圆筒状结构，其上端装有目镜，下端与物镜转换器相连。根据镜筒的数目，光镜可分为单筒式或双筒式两类。单筒光镜又分为直立式和倾斜式两种。而双筒式光镜的镜筒均为倾斜的。镜筒直立式光镜的目镜与物镜的中心线互成45度角，在其镜筒中装有能使光线折转45度的棱镜。2、物镜转换器：又称物镜转换盘。是安装在镜筒下方的一圆盘状构造，可以按顺时针或反时针方向自由旋转。其上均匀分布有3～4个圆孔，用以装载不同放大倍数的物镜。转动物镜转换盘可使不同的物镜到达工作位置（即与光路合轴）。使用时注意凭手感使所需物镜准确到位。3、镜臂：为支持镜筒和镜台的弯曲状构造，是取用显微镜时握拿的部位。镜筒直立式光镜在镜臂与其下方的镜柱之间有一倾斜关节，可使镜筒向后倾斜一定角度以方便观察，但使用时倾斜角度不应超过45度，否则显微镜则由于重心偏移容易翻倒。在使用临时装片时，千万不要倾斜镜臂，以免液体或染液流出，污染显微镜。4、调焦器：也称调焦螺旋，为调节焦距的装置，位于镜臂的上端（镜筒直立式光镜）或下端（镜筒倾斜式光镜），分粗调螺旋（大螺旋）和细调螺旋（小螺旋）两种。粗调螺旋可使镜筒或载物台以较快速度或较大幅度的升降，能迅速调节好焦距使物像呈现在视野中，适于低倍镜观察时的调焦。而细调螺旋只能使镜筒或载物台缓慢或较小幅度的升降（升或降的距离不易被肉眼观察到），适用于高倍镜和油镜的聚焦或观察标本的不同层次，一般在粗调螺旋调焦的基础上再使用细调焦螺旋，精细调节焦距。有些类型的光镜，粗调螺旋和细调螺旋重合在一起，安装在镜柱的两侧。左右侧粗调螺旋的内侧有一窄环，称为粗调松紧调节轮，５其功能是调节粗调螺旋的松紧度（向外转偏松，向内转偏紧）。另外，在左侧粗调螺旋的内侧有一粗调限位环凸柄，当用粗调螺旋调准焦距后向上推紧该柄，可使粗调螺旋限位，此时镜台不能继续上升但细调旋仍可调节。5、载物台：也称镜台，是位于物镜转换器下方的方形平台，是放置被观察的玻片标本的地方。平台的中央有一圆孔，称为通光孔，来自下方光线经此孔照射到标本上。在载物台上通常装有标本移动器（也称标本推进器），移动器上安装的弹簧夹可用于固定玻片标本，另外，转动与移动器相连的两个螺旋可使玻片标本前后左右地移动，这样寻找物像时较为方便。在标本移动器上一般还附有纵横游标尺，可以计算标本移动的距离和确定标本的位置。游标尺一般由主标尺（A）和副标尺（B）组成。副标尺的分度为主标尺的9／10。使用时先看到标尺的0点位置，再看主副标尺刻度线的重合点即可读出准确的数值．图1-2游标尺的使用方法示意图6、镜柱：为镜臂与镜座相连的短柱。7、镜座：位于显微镜最底部的构造，为整个显微镜的基座，用于支持和稳定镜体。有的显微镜在镜座内装有照明光源等构造。（二）光学系统部分光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置（反光镜、聚光器和光圈等）。1、目镜：又称接目镜，安装在镜筒的上端，起着将物镜所放大的物像进一步放大的作用。每个目镜一般由两个透镜组成，在上下两透镜（即接目透镜和会聚透镜）之间安装有能决定视野大小的金属光阑——视场光阑，此光阑的位置即是物镜所放大实像的位置，故可将一小段头发粘附在光阑上作为指针，用以指示视野中的某一部分供他人观察。另外，还可在光阑的上面安装目镜测微尺。每台显微镜通常配置2～3个不同放大倍率的目镜，常见的有5×、10×和15×（×表示放大倍数）的目镜，可根据不同的需要选择使用，最常使用的是10×目镜。2、物镜：也称接物镜，安装在物镜转换器上。每台光镜一般有3～4之个不同放大倍率的物镜，每个物镜由数片凸透镜和凹透镜组合而成，是显微镜最主要的光学部件，决定着光镜分辨力的高低。常用物镜的放大倍数有10×、40×和100×等几种。一般将8×或10×的物镜称为低倍镜（而将5×以下的叫做放大镜）；将40×或45×的称为高倍镜；将90×或100×的称为油镜（这种镜头在使用时需浸在镜油中）。在每个物镜上通常都刻有能反映其主要性能的参数，主要有放大倍数和数值孔径（如10／0．25、40／0.65和100／1.25），该物镜所要求的镜筒长度和标本上的盖玻片厚度（160／0.17，单位mm）等，另外，在油镜上还常标有“油”或“Oil”的字样。油镜在使用时需要用香柏油或石蜡油作为介质，这是因为油镜的透镜和镜孔较小，而光线要通过载玻片和空气才能进入物镜中，玻璃与空气的折光率不同，使部分光线产生折射而损失掉，导致进入物镜的光线减少，而使视野暗淡，物像不清。在玻片标本和油镜之间填充折射率与玻璃近似的香柏油或石蜡油时（玻璃、香柏油和石蜡油的折射率分别为1.52、1.51、1.46，空气为1），可减少光线的折射，增加视野亮度，提高分辨率。物镜分辨力的大小取决于物镜的数值孔径（numerialaperture,N.A.），N.A.又称为镜口率，其数值越大，则表示分辨力越高。６图1-3物镜的性能参数及工作距离C线为盖玻片的的上表面，10物镜的工作距离为7.63mm；40物镜的工作距离为0.198mm；10/0.25、40/0.65、100/1.25表示镜头的放大倍数和数字孔径。160/0.17表示显微镜的机械镜筒长度（标本至目镜的距离）和盖玻片的厚度。即镜筒长度为160mm，盖玻片厚度为0.17mm。不同的物镜有不同的工作距离。所谓工作距离是指显微镜处于工作状态（焦距调好、物像清晰）时，物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。物镜的放大倍数与其工作距离成反比。当低倍镜被调节到工作距离后，可直接转换高倍镜或油镜，只需要用细调螺旋稍加调节焦距便可见到清晰的物像，这种情况称为同高调焦。不同放大倍数的物镜也可从外形上加以区别，一般来说，物镜的长度与放大倍数成正比，低倍镜最短，油镜最长，而高倍镜的长度介于两者之间。表1-1标准物镜的性质放大倍数数字孔径工作距离（mm）1020401000.200.500.651.256.52.00.60.23、聚光器：位于载物台的通光孔的下方，由聚光镜和光圈构成，其主要功能是光线集中到所要观察的标本上。聚光镜由2～3个透镜组合而成，其作用相当于一个凸透镜，可将光线汇集成束。在聚光器的左下方有一调节螺旋可使其上升或下降，从而调节光线的强弱，升高聚光器可使光线增强，反之则光线变弱。光圈也称为彩虹阑或孔径光阑，位于聚光器的下端，是一种能控制进入聚光器的光束大小的可变光阑。它由十几张金属薄片组合排列而成，其外侧有一小柄，可使光圈的孔径开大或缩小，以调节光线的强弱。在光圈的下方常装有滤光片框，可放置不同颜色的滤光片。4、反光镜：位于聚光镜的下方，可向各方向转动，能将来自不同方向的光线反射到聚光器中。反光镜有两个面，一面为平面镜，另一面为凹面镜，凹面镜有聚光作用，适于较弱光和散射光下使用，光线较强时则选用平面镜（现在有些新型的光学显微镜都有自带光源，而没有反光镜；有的二者都配置）。二、光学显微镜的使用方法（－）准备将显微镜小心地从镜箱中取出（移动显微镜时应以右手握住镜壁，左手托住镜座），放置在实验台的偏左侧，以镜座的后端离实验台边缘约6～10cm为宜。首先检查显微镜的各个部件是否完整和正常。如果是镜筒直立式光镜，可使镜筒倾斜一定角度（一般不应超过45度）以方便观察（观察临时装片时禁止倾斜镜臂）。７（二）低倍镜的使用方法1、对光：打开实验台上的工作灯（如果是自带光源显微镜，这时应该打开显微镜上的电源开关），转动粗调螺旋，使镜筒略升高（或使载物台下降），调节物镜转换器，使低倍镜转到工作状态（即对准通光孔），当镜头完全到位时，可听