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医用基因工程”（专业课）复习思考题一．填空题1.细菌的移动基因存在着三种类型的转位因子包括、、。2.基因工程的四大里程碑为、、、。3.基因工程的三大技术发明为、、。4.Klenow酶在情况下，呈现DNA聚合酶活性，在情况下呈现外切酶活性。5.基因工程常用的载体有、、、。6.质粒分离纯化后，经琼脂糖电泳后常有三条带，它们分别为、、。7理想的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如、、、。8外源基因在原核细胞中表达，常用的启动子有、、、、。9.构建原核表达质粒载体应含有基因表达的调控元件为、、、。10.基因重组的真核表达质粒转染细胞后用于筛选阳性克隆的选择标志基因通常为、、、。11.λ噬菌体包装外源性基因的能力控制在野生型λ噬菌体DNA长度的%到%之间。12.λ噬菌体的CI蛋白基因插入外源性基因的克隆为噬菌斑，未插入外源性基因的克隆为噬菌斑。13.在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显色，为克隆，未插入基因的克隆显色，为性克隆。14.强终止子的基因转录终止作用不依赖因子，弱终止子的基因转录终止作用要依赖因子。15.酵母真核表达载体的常见类型有、、。16.基因序列经碱基替代，缺失或插入后，可使遗传信息产生三种不同的后果，分别为、、。17.基因改造可创造自然界不存在的新基因，采用的方法有、、。18.基因表达的四大表达系统分别为、、、。19.基因工程疫苗的种类包括、、。20.基因工程人源化的小分子抗体的种类有、、、、、。21.基因治疗所利用的治疗方案为、、、。22.真核细胞的基因表达顺式作用元件包括、、、、。23.点突变的基因系列在碱基替换中，若为一个嘌呤换成另一个嘌呤或一个嘧啶换成另一个嘧啶者称，若一个嘌呤换成一个嘧啶或一个嘧啶换成一个嘌呤者称。24.基因和载体均为平末端时，两者的连接方法有，，。25.基因重组体中，鉴定目的基因的存在与否可采用法，法，法，法等。二．是非判断题1.DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。（）2.甲基化酶能使DNA序列发生甲基化，早基化DNA的更为稳定，被甲基化的酶切点，不易被酶切割。（）3.DNA聚合酶只能发生由引物延伸的DNA聚合酶活性。（）4.质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（）5.S1酶具有补平DNA链粘性末端的特性。（）6．COS位点，COS质粒，COS细胞它们均含有用于自身环化的12个碱基的互补粘性末端。（）7.COS位点，COS质粒都含有用于载体自身环化的12个碱基的互补粘性末端。（）8.入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。（）9.入噬菌体的CI基因插入外源基因的阳性克隆为透明斑，未手稿外源基因的阴性克隆为混浊斑。（）10.cDNA文库是包含有细胞中所有mRNA，因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。（）11.病毒（噬菌体）及其重组体DNA导入宿主细胞的过程称转化。（）12.以噬菌体或病毒为载体携带外源基因导入宿主细胞称转染。（）13.原核细胞的RNA聚合酶只能识别原核细胞的启动子以催化RNA的合成。（）14.点突变时，碱基序列改变，氨基酸编码序列不改变称无义突变。（）15.原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。三．不定项选择题（3分/题，共15分）1.下列哪些基因属于移动基因？A.ISB.TnC.LTRD.LT2.下列生物体的细胞基因组哪些会有断裂基因A.动物B.人C.细菌D.噬菌体3.原核细胞基因表达的特点为A.单顺反子B.多顺反子C.转录和转译连续进行D.转录和转译分开分步进行4.真核细胞基因表达的特点为A.单顺反子B.多顺反子C.转录和转译连续进行D.转录和转译分开分步进行5.基因工程常用的质粒载体为A.F质粒B.R质粒C.Col质粒D.部分R质粒和Col质粒6.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为A.同工酶B.同尾酶C.同裂酶D.同位酶7.影响限制性内切酶活性的因素有A.DNA纯度B.DNA中GC含量C.DNA分子结构D.DNA甲基化程度8.DNA连接酶的功能是A.恢复3’-OH与5’-P之间的磷酸二酯键B.恢复缺口C.恢复裂口D.可使平末端与粘性末端连接9.识别序列相同，但对甲基化切点的敏感性不同的一类酶为A.同工酶B.同尾酶C.同裂酶D.同位酶10.Klenow酶在有dNTP时具有的功能为A.PCR扩增的酶B.粘末端补平C.平末端加尾D.连接衔接物11.逆转录酶的功能有A.使mRNA→cDNAB.可使DNA/RNA杂交链中的RNA降解C.使cDNA→双链D.可以用cDNA单链为模板进行PCR扩增12.S1酶的功能有A.修平粘性末端B.切除DNA中的单链发夹结构C.降解单链DNA和RNAD.可使3’和5’端DNA链同时降解13.碱性磷酸酶的功能有A.使DNA和RNA链的末端磷酸化B.切除DNA和RNA链的5’末端C.仅使DNA链末端磷酸化D.仅使DNA链5’端脱磷酸14.dam甲基化酶能使TCAG序列中的哪个碱基发生甲基化？A.胞嘧啶B.胸腺嘧啶C.腺嘌呤D.鸟嘌呤15.dcm甲基化酶能使TCAG序列中的哪个碱基发生甲基化？A.胞嘧啶B.胸腺嘧啶C.腺嘌呤D.鸟嘌呤16.pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件A.AmPr和TetrB.ori复制子C.LacZ标记D.多克隆位点17.PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件A.AmPrB.ori复制子C.LacZ标记D.多克隆位点18.质粒提取后经电泳应属下列何种条带？A.1条带B.2条带C.3条带D.4条带19.质粒经酶切后电泳应属下列何种条带？A.1条带B.2条带C.3条带D.4条带20.COS质粒克隆载体应具有下列哪些元件A.ori复制子B.AmPrC.COS位点D.多克隆位点21.λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为A.小于λ噬菌体DNA的50%B.小于噬菌体DNA的75%C.大于λ噬菌体DNA的105%D.为λ噬菌体DNA的75%～105%22．目的基因的获得下列哪些方法为可行？A化学合成法B建cDNA文库C建基因组文库D基因改造23重组体中的目的基因存在与否可用下列哪些方法？A双酶切电泳法BPCR产物电泳法C核酸探针杂交法D免疫结合法24当目的基因插入pBR322质粒的Tetr区段，应如何筛选阳性克隆?ATet平板生长Amp平板也长BTet平板和Amp平板均不长CAmp平板生长Tet平板不生长DTet平板生长Amp平板不长25当目的基因插入pBR322质粒的Ampr区段，应如何筛选阳性克隆?ATet平板生长Amp平板也长BTet平板和Amp平板均不长CAmp平板生长Tet平板不长DTet平板生长Amp平板不长26下列哪些启动子可由乳糖或IPTG诱导表达ALac启动子BTrp启动子CTac启动子DLpp启动子27构造原核表达质粒应具有下列何种元件A启动子B终止子CSD序列D遗传标记28构建真核表达质粒应具有下列何种元件A启动子B终止子CSD序列D遗传标记29原核细胞筛选阳性克隆的遗传标记（报告基因）AAmprBTetrCneorDLacZETK30真核细胞筛选阳性克隆的遗传标记（报告基因）AAmprBTetrCneorDTKELacZ四．名词解释：移动基因断裂基因重叠基因假基因同尾酶质粒柯斯（COS）质粒COS位点COS细胞基因组文库cDNA文库转化转染转导启动子起始密码子终止子粘性末端终止密码子锌指结构载体PCR.SplitgeneGenomicDNAIntronExontransformation转录翻译顺式作用元件反式作用因子transcritonfactor瞬时表达稳定表达亮氨酸拉链tk基因基因突变无义突变错义突变同义突变限制性核酸内切酶基因拼接基因缺失重组病毒载体重组质粒型载体基因工程多肽疫苗基因置换基因修正基因修饰基因失活转基因动物动物克隆基因敲除ES细胞五。问答题1、什么叫基因？何谓基因的新概念？其主要功能是什么？2、真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？3、试述DNA分子的结构及其意义。4、试述cDNA文库的构建过程及其意义。5、试述基因组文库的构建过程及其意义。6、什么是限制性核酸内切酶？7、试述双脱氧末端终止DNA测序法的原理及过程。8、试绘图并说明大引物PCR定点诱变法的过程。9、何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明？10、基因工程常用的载体有哪些？其共同特性如何？11、作为理想质粒载体的基本条件有哪些？12、什么叫插入失活，举例说明之？13、如何从所克隆到基因重组体中鉴定目的基因的存在和正确性？14、质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？15、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？16、真核表达调控的顺式作用元件和反式作用因子有哪些？其作用特点是什么？20、目的基因表达系统有哪几种？其特点如何？22、基因工程疫苗研究开发常用的途径是什么？24、基因治疗展望和应用如何？25、有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。27、何谓动物克隆技术？有何应用价值？