实验四-酶的特性实验

资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢精品文档说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！实验四酶的特性实验一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。二、实验内容本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。（一）酶的专一性1、实验原理本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。2、材料、仪器与试剂(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。3、实验操作（1）稀释唾液的制备①唾液的获取用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。②不同稀释度唾液的制备（用大试管）本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢精品文档举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）表1唾液淀粉酶稀释度的确定管号1（1：1）2（1：5）3（1：20）4（1：50）5（1：200）0.5%淀粉溶液（滴）44444稀释唾液（ml）1111137℃恒温水浴中保温5分钟班氏试剂（ml）11111沸水浴2～3分钟实验结果（2）淀粉酶的专一性表2淀粉酶专一性实验（二）温度对酶活力的影响1、实验原理酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合管号1234560.5%淀粉溶液（滴）4－4－4－2%蔗糖溶液（滴）－4－4－4最佳稀释度唾液（ml）－－11――煮沸过的最佳稀释度唾液（ml）－－－－11蒸馏水（ml）11－－－－37℃恒温水浴中保温5分钟班氏试剂（ml）111111沸水浴2～3分钟实验结果资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢精品文档物遇碘呈现的颜色来判断。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；（3）试剂：溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液；KI－I2碘溶液；3、实验操作取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：表3温度对酶活力影响实验加样顺序管号1230.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）11煮沸过的稀释唾液（ml）1实验结果摇匀后，将1、3号试管放入37℃恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出（将2号内液体分两半），用KI－I2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37℃水浴中继续保温10分钟后，再用KI－I2液实验，记录实验结果。（三）PH对酶活力的影响1、实验原理酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液（2）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴（3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KI－I2碘溶液；PH试纸3、实验操作表4PH对酶活性的影响实验PH55．86．88.0资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢精品文档缓冲液（ml）33330.5%淀粉溶液（ml）1111向第一个试管加入稀释唾液后，置于37℃的恒温水浴；等待1min后向第二个试管加入稀释唾液，置于37℃的恒温水浴；依次类推！最佳稀释度的唾液（ml）1111检查淀粉水解程度待向第四只试管加入唾液2min后，每隔1分钟从第3管中取出1滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）。即可从第一只试管依次添加碘液，时间间隔也为1min。碘液(滴)1～２1～２1～２1～2现象为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明：各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1分钟。将各试管中物质混匀，，并依次置于37℃恒温水浴中保温。待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KI－I2溶液。添加KI－I2溶液，检验淀粉的水解程度。待混合变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）后，向所有试管依次添加1-2滴KI－I2溶液。添加滴KI－I2溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。（四）唾液淀粉酶的活化及抑制1、实验原理酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。2、材料、仪器与试剂（1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液（2）仪器：试管及试管架；恒温水浴（3）试剂：1%NaCl溶液；1%CuSO4溶液；KI－I2碘溶液；1%Na2SO4溶液3、实验操作（注意本实验的淀粉溶液为无NaCl的淀粉溶液）表4唾液淀粉酶活化及抑制实验资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢精品文档管号12340.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）0.50.50.50.51%NaCl溶液（ml）0.5－－－1%CuSO4溶液（ml）－0.5－－1%Na2SO4溶液（ml）－－0.5－蒸馏水（ml）－－－0.537℃恒温水浴中保温10分钟KI－I2溶液（滴）2～32～32～32～3现象三、注意事项各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。四、思考题1、何谓酶的最适pH和最适温度？2、说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢精品文档