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动物细胞工程四大基本技术：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。动物细胞培养技术是其它动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞培养2原理：细胞增殖1、概念——从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液10代细胞50代细胞传代培养不死细胞单个细胞加培养液胰蛋白酶剪碎细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。遗传物质未改变遗传物质已改变分瓶传代培养原代培养细胞贴满瓶壁胰蛋白酶3、过程：原代培养：几个概念将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养。通常将动物组织消化后的初次培养。传代培养：细胞的接触抑制细胞贴壁（1）、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（2）、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清、血浆等。）（3）、温度和PH36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。（4）、气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）补充合成培养基中缺乏的物质4、动物细胞培养条件5、动物细胞培养技术的应用①生产生物制品：疫苗、干扰素、抗体等。②作为基因工程中的受体细胞。③检测有毒物质及毒性。④科研方面：筛选抗癌药物、治疗和预防疾病等。细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清、血浆蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目•1.下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是•A．培养液通常含有蔗糖、氨基酸、无机盐、生长因子和动物血清等•B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞•C．动物细胞培养一般能够传到40—50代，其遗传物质没有发生改变•D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞A2．判断下列有关细胞工程的叙述(1)培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压(2008·江苏，20A)()(2)去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理(2008·全国Ⅰ，5B)()(3)不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程(2009·全国Ⅰ，4B)()(4)利用植物体细胞杂交技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种(2009·全国Ⅰ，4A)()√√√√(5)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞(2010·浙江，4A)()(6)克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变(2010·浙江，4B)()(7)二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的(2010·浙江，4C)()(8)恶性细胞系的细胞可进行传代培养(2010·浙江，4D)()×××√供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛1.核移植共分成两大阶段：3.通过显微操作法去卵母细胞中的核。二.核移植过程2.取卵细胞作受体细胞的原因是:体积大,易操作；卵黄多，营养物质丰富等。核移植和胚胎移植。依据：动物细胞核具有全能性三、动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导融合方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒灭活:使病毒或细菌失去感染能力，但不破坏它的抗原结构。5、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合融合细胞杂交细胞筛选6、意义：打破不同种生物间的生殖隔离(克服了远缘杂交的不亲和性)。7、应用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤等，特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体.B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合培养液中细胞有几种类型？（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠腹腔体外培养单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高,产量大•注意：•①对小鼠做何处理？注射特定的抗原蛋白，获得产生单一抗体的B淋巴细胞。③制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？②两次筛选目的分别是第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。细胞融合技术、细胞培养技术小结：单克隆抗体制备过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择性培养基杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体的优点和应用•单克隆抗体的优点•强，高，大。•单克隆抗体的应用：①作为诊断试剂：准确识别各种物质的细微差别，并跟的结合，具有、、、的优点。②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗，可制成“”，也有少量用于治疗其他疾病。特异性灵敏度产量抗原一定抗原发生特异性准确高效简易快速癌症生物导弹（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）形成杂交细胞，以生产细胞产物获得杂种植株结果物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法细胞膜的流动性、细胞增殖细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较融合前处理用纤维素酶、果胶酶去壁注射特定抗原，产生免疫反应1、下列是应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤，对单克隆抗体制备的相关叙述不正确的①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞③利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合④将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞⑥从腹水中提取抗体A．实验顺序应当是①②③⑤④⑥B．④过程中产生的多个杂交瘤细胞也称为克隆C．③过程获得的细胞均可无限增殖D．③到⑤的过程中通常要经过两次筛选C2．(11韶二模·双选)对下图的分析，正确的A．若上图表示基因工程的操作流程图，则C表示重组质粒，D是受体细胞ADB．若上图表示单克隆抗体的制备，则A是经过免疫的T淋巴细胞，B是骨髓瘤细胞C．若上图表示动物体细胞核移植过程，用胚胎分割技术可获得多个性别不同的克隆动物DD．若上图表示植物体细胞杂交过程，则从C到D需用的技术是植物组织培养B项：A是经过免疫的B淋巴细胞，B是骨髓瘤细胞；C项：胚胎分割技术属于无性生殖，形成的个体性别相同。3.（双选）请据图判断，下列说法不正确的是BCA．若a，b分别对应为骨髓瘤细胞和效应B细胞，则d能产生单克隆抗体是b的遗传物质选择性表达的结果B．若d形成有性杂交后代，则a和b融合形成d的过程叫体细胞杂交C．若d形成无性杂种植株，则采用了细胞工程中的核移植技术D．若d形成无性杂种植株，由于杂种细胞具双亲叶绿体，则可能培育出比有性杂交品种光合作用性能更好的植株有性杂交是通过爱情作用实现的细胞工程中的体细胞杂交技术4．下列关于利用细胞工程技术制备单克隆抗体的叙述中，不正确的是DA．给小鼠注射抗原，是为了获得能产生相应抗体的B淋巴细胞B．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合培养，是为了获得融合细胞C．杂交瘤细胞进行体外培养，是为了获得单克隆抗体D．杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎解析：杂交瘤细胞可进行体内、体外培养，目的是培养产生单克隆抗体。