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温故知新问题思考Q1Q2获得白菜-甘蓝利用了什么技术？植物体细胞杂交此技术的过程？？？？？再分化？植物细胞杂交技术利用什么原理？用什么方法可以诱导植物细胞融合？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方式：物理法、化学法植物细胞杂交技术最终获得什么？三、用途：获得杂种植株温故知新思考•不同种动物体细胞能否杂交？•过程如何？•与植物体细胞杂交相比有何不同？•请阅读课本P52，填写下表获得杂种细胞，主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较1.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。1.2动物细胞融合技术的意义和应用突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能最主要用途：制造单克隆抗体问题：1、抗体由什么细胞产生？2、其化学本质是什么？3、与抗原作用的特点？4、主要分布在哪里？2.1单克隆抗体的概念抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念•单:单个细胞克隆:无性繁殖•单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体如何大量生产单克隆抗体？2.2单克隆抗体的制备1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？癌细胞3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？细胞融合一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合培养液中细胞有几种类型？（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？5种B淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞3种骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高2、单克隆抗体制备过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体课堂小结单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？动物细胞融合技术动物细胞培养技术B淋巴细胞骨髓瘤细胞2.2单克隆抗体的制备看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？【堂堂清】1.单克隆抗体的优点是________________________________特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是_________________________________每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是_______________产生单克隆抗体的细胞是__________效应B细胞（浆细胞）杂交瘤细胞4.杂交瘤细胞的特点:_______________________________既能无限增殖，又能分泌特异性抗体5.首次筛选是为了获得_____________第二次筛选时为了获得_______________________________杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞3、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。（1）作为诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）单克隆抗体的应用（2）运载药物生物导弹=单克隆抗体+药物（治疗肿瘤）(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头)单克隆抗体的应用