金黄色葡萄球菌

思念水饺金黄色葡萄球菌食品安全事件摘要：本文综述了思念水饺中检测出的金黄色葡萄球菌的生物学特性，它在食品安全事件中产生的危害，以及它的检测方法和怎样对食品安全事件进行管理和预防。关键词：金黄色葡萄球菌食品安全管理预防2011年10月19日，北京市工商局公布的一批不合格食品名单，其中在国内速冻食品行业有龙头和领军企业之称的郑州思念食品有限公司，其生产的“思念”牌三鲜水饺，被检出含有金黄色葡萄球菌。其实早在2000年日本就发生了一起由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的中毒爆发事件[1]。金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌”的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。金葡菌除了引起感染外，其产生的肠毒素可污染食物而致食物中毒，为人类带来非常严重的公共卫生负担。对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。1．金黄色葡萄球菌的生物学特性。1.1形态与染色典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。革兰染色阳性，衰老或死亡后可转为阴性。1.2培养特性金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1～2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10～15%NaCl肉汤中生长，因此利用它的这个特性进行污染标本分离。1.3抵抗力抗干燥：在干燥环境中存活数月；空气中存在，但不繁殖；耐热：加热70℃1h，80℃30min不被杀死；耐低温：在冷冻食品中不易死亡；[2,3]耐高渗：在含有50%～66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。2．食品中金黄色葡萄球菌的危害评估一旦食物被金黄色葡萄球菌污染，在20℃-2℃的环境中，经过8到10个小时即可产生大量肠毒素。这种毒素比金黄色葡萄球菌更难杀灭，即使煮沸30分钟也不能完全被破坏，人食用了被金黄色葡萄球菌及其毒素污染的食物，会引起急性胃肠炎，有恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。严重者可虚脱或休克。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒一般发病较急，常发生于食后2-6小时，一般病后1-2天可自行恢复。同时，金黄色葡萄球菌可经皮肤伤口，引起局部化脓感染。如果人抵抗力低下，则会因其在身体内大量繁殖，而引起多发性脓肿和炎症。所以思念水饺中检出的金黄色葡萄球菌如果产生足量的肠毒素的话，会对人体造成很大的伤害。食物中毒的传染源，是被金葡菌感染的人和动物。如食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素,引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。在思念水饺事件中，食物中毒的传染源到目前为止都没有确切的答案。3．检测方法金葡菌的检测根据细菌的分离培养、染色观察、血浆凝固酶试验、氧化酶试验、耐药性检测即可作出初步的判断。下面介绍一些分子生物学和快速检测方法3.1分子生物学的检测方法3.1.1传统PCR方法传统PCR方法检测金葡菌的特异基因，如耐热核酸酶基因（nuc）；检测金葡菌的保守基因16sRNA；用多重PCR方法可在较短的时间内检测金葡菌的多种毒素基因，如肠毒素A-E(entA,entB,entC,entD,entE)，表皮剥脱毒素A和B（eta，etb），中毒性休克综合症毒素（tst）[4]。3.1.2荧光PCR荧光PCR技术在普通PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累检测整个PCR反应的过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量。Deurenberg[5]用Real-timePCR检测金葡菌的tst基因，作为分子流行学的一种有效的监测手段。3.2快速检测方法3.2.1StaphychromII实验由显色底物，人凝血酶原和蛋白酶抑制剂组成的StaphychromII实验，是一种快速，可靠，易操作的检测方法，可在两个小时得到结果。Nathalie等[6]人将该方法与凝固酶试管凝集实验和乳胶凝集实验做了比较，对293株从临床分离的菌株进行检测，StaphychromII实验敏感性，特异性，阳性预测值和阴性预测值分别为98.1，100，100,and95.1%；乳胶凝集实验为98.6，98.7,99.6和96.3%,试管凝集实验为97.6%,98.7%,99.5和93.9%。证明该方法具有与乳胶凝集实验相同的敏感性，具有100%的特异性。但该方法较昂贵，不易在基层单位推广。3.2.2金黄色葡萄球菌鉴别培养基现在已有商业化的金葡菌显色培养基，仅需通过单一菌落的典型色彩即可进行初步鉴定，大大提高了对金葡菌的检出率。S.aureusID培养基,法国科玛嘉干粉显色培养基和Baird-Parker+RPF培养基（生物梅里埃公司）都属于同类产品，可通过特殊的菌落颜色，在18-20小时对金葡菌进行初步鉴定。Perry[7]用S.aureusID培养基,法国科玛嘉干粉显色培养基和传统培养基对金葡菌的分离培养进行比较，证明S.aureusID培养基对于金葡菌的分离和鉴定，是一种敏感性和特异性很高的培养基。3.2.3M金黄色葡萄球菌快速测试片法原理:该测试片由两部分组成，第一部分是金黄色葡萄球菌培养基片，此检测片含有改良的Baird-Parker营养物及一冷水可溶的胶体，第二部分是热稳定核酸酶(Tnase)反应片，包含有DNA，甲苯胺蓝(toluidineblue-O)及四唑指示剂(tetrazolium)，此指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌热稳定核酸酶的存在。[8]3.2.4金黄色葡萄球菌乳胶凝集试验作为免疫学方法之一，乳胶凝集试验在金黄色葡萄球菌的检测分析中，既可用作初筛，同时也是确认方法之一。这一类的产品也很多，包括生物梅里埃公司的SlidexStaph-kit等。[9]面对这么多种的检测方法，我们可以选择国标中规定的检验方法，也可根据企业的自身要求选择合适的检验手法。4.食品中金黄色葡萄球菌含量标准按照我国现有食品安全标准，冷鲜肉制品是允许有适量金黄色葡萄球菌成分的，而对冷冻食品则要求“不得含有”。但是如果按照卫生部2011年9月6日发布的“食品安全国家标准速冻面米制品”的征求意见稿中在“生制品的微生物限量”规定的，在每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量只要在1000个-10000个之间，都为合格产品的标准的话，在思念水饺中检测出的金黄色葡萄球菌的含量就并没有超标。5.食品中金黄色葡萄球菌的安全管理美国疾控中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。[10]在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大占到45%,我国每年发生的此类事件也很多。[11]所以对于食品中金黄色葡萄球菌的控制管理非常的重要。从整个思念水饺事件当中我们可以看出，要想控制金黄色葡萄球菌的含量，就必须严格控制好从生产到销售的各个环节。不断完善食品安全法律体系。建立健全食品追溯体系、食品安全评估和预警体系、食品召回体系等。除此之外，消费者也要提高食品安全意识。6.如何预防感染6.1防止金黄色葡萄球菌污染食品[12]防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染(如疥疮、手指化脓等)、上呼吸道感染(如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等)的人员要暂时停止其工作或调换岗位。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。6.2防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。6.3杀死金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌对热和干燥的抵抗力较一般无芽胞细菌强，加热80℃30分钟才被杀死。在干燥的脓汁、痰液中可存活2～3月。5%石炭酸中10～15分钟死亡。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。参考文献[1]李毅.金黄色葡萄球菌及其肠毒素研究进展.中国卫生检验杂志,2004,14(4):392-395[2]陈敏,王颖,顾其芳.巧克力中金黄色葡萄球菌存活及产毒情况观察[J].中国卫生检验杂志,2000,10(5):532-533.[3]徐景野,等.棒冰中金黄色葡萄球菌存活观察.中国卫生检验杂志,1998,8(5):293.[4]MehrotraM,WangG,JohnsonWM.MultiplexPCRfordetectionofgenesforStaphylococcusaureusenterotoxins,exfoliativetoxins,toxicshocksyndrometoxin1,andmethicillinresistance.JClinMicrobiol.2000Mar;38(3):1032-5.[5]DeurenbergRH,NieuwenhuisRF.TheprevalenceoftheStaphylococcusaureuststgeneamongcommunity-andhospital-acquiredstrainsandisolatesfromWegener'sGranulomatosispatients.FEMSMicrobiolLett.2005Apr1;245(1):185-9.[6]FonsaleN,BesM,VerdierI.SpecificidentificationofStaphylococcusaureusbyStaphychromII,arapidchromogenicstaphylocoagulasetest.JClinMicrobiol.2004May;42(5):1962-4.[7]PerryJD,RennisonC,ButterworthLA.EvaluationofS.aureusID,anewchromogenicagarmediumfordetectionofStaphylococcusaureus.JClinMicrobiol.2003Dec;41(12):5695-8.[8]袁桂兴，温剑.金黄色葡萄球菌的快速检测方法.生物技术通讯，2007(6):75-78.[9]BarskiP，PiechowiczL，GalińskiJ，etal.Rapidassayfordetectionofmethicillin-resistantStaphylococcusaureususingmultiplexPCR.MolCellProbes，1996，10(6):471-475.[10]Vernozy-RozandC，Mazuy-CruchaudetC，BavaiC，etal.Comparisonofthreeimmunologicalmethodsfordetectingstaphylococcalenterotoxinsfromfood.LettApplMicrobiol，2004，39(6):490-494.[11]GB4789.10-2010食品安全国家标准:食品微生物学检验—金黄色葡萄球菌检验.[12]如何预防金黄色葡萄球菌感染.新浪健康.2011-11-25[引用日期2012-11-28].