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NGS-----FromSampletoLibraryPreprationQijunSong基因公司试剂市场部songqijun@genecompany.com高通量测序平台简介SOLiD全称为supportedoligoligationdetetion，它的独特在于以四色荧光标记寡核苷酸的连续连接合成为基础，取代了传统的聚合酶连接反应，可对单拷贝DNA片段进行大规模扩增和高通量并行测序。ABI-SOLiD2005年底，454公司推出了革命性的基于基于焦磷酸测序法的超高通量基因组测序系统，其特点是边合成边测序（sequencing-by-synthesis）。之后454公司被Roche以1.55亿美元收购。一年后推出新一代GSFLX。Roche-GSFLXGenomeAnalyzer最早由Solexa公司研发，利用其专利核心技术”DNA簇”和”可逆性末端终结(reversibleterminator)”，实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Solexa于2007年被Illumina以6亿美金收购。Illumina-GenomeAnalyzerNGS整体流程样本提取和检测（DNA、RNA等）样本准备——文库构建及检测（DNA大片段/小片段、RNA转录组、SmallRNA、外显子组、MeDIP、Chip文库等）上机测序（Hiseq2000、Solid、IonTorrent、454等）生物信息学分析（去接头、比对、外显子组组装、基因组组装、个性化分析等）二代测序（NGS）样本准备——文库构建及检测LibrarypreparationDNA/RNApurificationQuantificationofLibraryDNA/RNAisolationQualitycontrolTotalsolutioninNGS文库构建&质量控制FragmenttheGenomicDNAPerformEndRepairLigateAdapterstoDNAFragmentsSize-SelectDNAEnrichtheAdapterbyPCRSize-SelectLibrary200-800bpgDNA基因组片段化末端修复加A，加接头SizeselectPCRNGS文库构建之样品制备核酸提取菌类全能型试剂盒--------革兰氏阴/阳性菌、酵母及真菌通用型核酸提取试剂盒裂解保障--------试剂盒中含NucleoSpin®BeadTubes操作简单--------试剂盒中有液体蛋白酶K，无需额外购买NucleoSpin®MicrobialDNA不动杆菌曲霉菌属枯草芽孢杆菌梭状芽孢杆菌谷氨酸棒状杆菌大肠杆菌散子囊属肺炎杆菌细杆菌属毕赤酵母绿脓杆菌霉菌酿酒酵母葡萄球菌链球菌栓菌弧菌DNA提取效果一览：无降解，无RNA污染1、大肠杆菌2、弧菌（海洋性菌种）3、枯草杆菌4、谷氨酸棒状杆菌5、酿酒酵母NGS文库构建之核酸片段化-------Covaris打断管NEB的快速DNA文库构建试剂盒NEB的超快速文库构建产品，将传统的文库构建操作流程中的“末端修复”和加“A”尾两步合二为一即在一步操作完成，全程只需两步纯化，大大节省了文库构建的时间，降低了起始样本量。NGS文库构建之NEBNext接头，降低二聚体的形成NEBNext接头包含新颖的发夹结构，提高接头的连接效率。环状结构上包含一个U碱基，可通过USER酶处理而去除，从而打开环形用于PCR扩增。同样提供包含检索序列的indexPrimers。提高连接效率减少接头二聚体比例提高文库产量甲基化的NEBNext接头适用于重亚硫酸盐测序NEBNext接头，适用于DNA，ChIPDNA和RNA末端修复并加入A尾的DNA片段通过连接反应将NEBNext接头加入到片段末端UESR酶处理，打开环形结构用于文库片段纯化、接头二聚体去除、片段大小选择(150-800bp)简单的操作流程，提供预混的磁珠悬浮液高灵敏，样本起始量低至17.5pg，样本体积50-200uL磁珠法纯化NGS文库片段，NucleoMag®NGSClean-upandSizeSelect含有100-1000bp大小片段的100µLDNA(10ng/µL)样本中加入不同比例的磁珠(磁珠/样本比例)，比较片段回收率。使用不同比例的磁珠(比例=磁珠/DNA)，回收率结果也不同。NucleoMagNGSClean-upandSizeSelect,#744970.5基因组DNA的片段化↓末端修复↓末端加‘A’↓加上特定接头↓连上接头的DNA片段进行PCR扩增↓文库检测质控NGS样本文库流程之质控Caliper芯片样本获取样本前处理核酸提取样本制备样本定量/质控NGS数据分析后期验证Covaris高性能样本处理系统MN的核酸提取试剂盒MMI单细胞获取工作站纯DNA的A260/A280比值为1.8~2.0二代测序（NGS）组织破碎仪样本质控核酸片段化PCR扩增片段回收NGS文库定量及质控加接头测序建库样本制备数据分析MN的磁珠法NGS文库纯化及片段回收试剂盒744970无相关产品或者服务NEB的建库试剂盒&模块试剂机械法OrNEB的片段化酶单细胞转录组学分析方案基因公司试剂耗材产品总览免疫学细胞生物学分子生物学Immunology•CST•PE•Santa•Licor•Abcam•R&DMolecularbiology•Affy•MN•KRB•EPI•Bioline•NEB•EZM•TSM•USB•Biowest•PRM•SMOCellbiology•Lonza•Falcon•BCS•Biocoat•Gentest实验室小仪器汇总近期促销NEB的Q3促销：Q5、内切酶、T4连接酶（65折）、cloningpanel（7折）和蛋白marker（5折）等Biocision冻存盒促销Bioline定量PCR试剂促销（SYBRGREEN)CST的买一抗送二抗促销小仪器促销等更多精彩即将开始，敬请期待。。。生物通商城，下单送积分NGS试剂相关彩页各位老师，如果对NGS新技术或者生命科学领域出现的新产品感兴趣，可留下您的邮箱，我司会定期向各位老师推送Emailing。