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Granulin,anovelSTAT3-interactingprotein,enhancesSTAT3transcriptionalfunctionandcorrelateswithpoorerprognosisinbreastcancerReporter：Triple-negativebreastcancers•三阴性乳腺癌特指雌激素受体、孕激素受体及人表皮生长因子受体2均阴性的乳腺癌患者。三阴乳腺癌的预后与肿瘤大小和淋巴结状况关系不大，复发相对迅速，1-3年是复发高峰，脑转移发生率高。•目前还没有特有的针对三阴性乳腺癌的治疗指南。因此其治疗一般按乳腺癌常规标准治疗进行。STAT3信号传导与转录激活因子（SignalTransducerandActivatorofTranscription，STAT）蛋白家族是一组可以被不同的细胞因子受体激活的相关蛋白，在细胞因子-受体相互作用的过程中充当载体，保持信号在细胞内传递的内在特异性。在这些STAT蛋白当中，STAT3由于其与肿瘤的关系较为密切，越来越受到人们的重视。STAT3被受体相关的Janus激酶（JAK）磷酸化，形成同二聚体或异二聚体，并转移到细胞核，在那里它们作为转录激活子。在许多细胞过程如细胞生长和凋亡中起关键作用。STAT3缺陷的小鼠胚胎在胚胎发育开始之后不能发育超过胚胎第7天。似乎在这些发展的早期阶段，需要STAT3激活来进行胚胎干细胞（ESC）的自我更新。FIG.115.5%FIG.258%GRNknockdownreducedthemRNAexpressionofthesegenes,similartotheeffectsofSTAT3knockdown染色质免疫共沉淀技术（chromatinimmunoprecipitationassay,CHIP）•染色质免疫共沉淀技术的原理是在保持组蛋白和DNA联合的同时，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，染色质被切成很小的片断，并沉淀下来。是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。这项技术主要用来分析目标基因有没有活性、或者分析一种已知蛋白（转录因子）的靶基因有哪些。•ChIP-Seq的原理是：首先通过染色质免疫共沉淀技术（ChIP）特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，并对其进行纯化与文库构建；然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。研究人员通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上，从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段信息。58%SuggestthatGRNmaymodulatetheexpressionofSTAT3targetgenesinmultipleways.ForsomeSTAT3targetgenes,GRNenhancesSTAT3DNAbinding.Forothergenes,GRNdoesnotsignificantlyaffectSTAT3DNAbindingbutmayplayaroleinrecruitingcriticaltranscriptionalcofactorsinstead.FIG.3SK-BR-3cell，HER2过表达的乳腺癌细胞，STAT3可以通过特定的细胞因子激活。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。36%FIG.4LIF刺激ThesefindingsareconsistentwiththeobservedreductionsinSTAT3DNAbindingandgeneexpression.ThesefindingsindicatethatGRNenhancescytokine-inducedSTAT3activationandnuclearaccumulation.FIG.5ThesefindingssuggestthattheeffectofgranulindepletionismediatedbydecreasedSTAT3transcriptionalactivity.SuggestingthatinhibitingGRNpreferentiallyaffectscellswithactivatedSTAT370%SuggestingthatsomebutnotallphenotypesassociatedwithGRNknockdowncanberescuedbyconstitutivelyactiveSTAT3.FIG.642.9%13.5%Thesefindingsindicatethatinprimarybreastcancers,GRNexpressionspecificallycorrelateswithenhancedSTAT3transcriptionalactivityinthepresenceoftyrosine-phosphorylatedSTAT32.2倍Indicatethatinprimarybreastcancers,GRNexpressionspecificallycorrelateswithenhancedSTAT3transcriptionalactivityinthepresenceoftyrosine-phosphorylatedSTAT3DiscussionSTAT3interactswithGRNinbreastcancercellsGRNenhancesconstitutiveSTAT3transcriptionalactivityGRNisnecessaryformaximalcytokine-inducedSTAT3transcriptionalactivityGRNincreasesthekineticsofSTAT3phosphorylationandnucleartranslocationGRNenhancesthetumorigenicphenotypeofTNBCcellsGRNexpressioncorrelateswithSTAT3geneexpressionsignaturesandreducedpatientsurvivalinhumanbreastcancersThankYouLuciferase报告基因系统•Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。•皮尔森相关系数（Pearsoncorrelationcoefficient）也称皮尔森积矩相关系数(Pearsonproduct-momentcorrelationcoefficient)，是一种线性相关系数。皮尔森相关系数是用来反映两个变量线性相关程度的统计量。相关系数用r表示，其中n为样本量，分别为两个变量的观测值和均值。r描述的是两个变量间线性相关强弱的程度。r的绝对值越大表明相关性越强。