饮用水中菌落总数的测定

目录中文摘要.........................................................2ABSTRACT.........................................................21.引言...........................................................32.材料与方法....................................................32.1实验材料..................................................32.2培养基的配制及其灭菌......................................42.3主要仪器..................................................42.4染色液的制备..............................................42.5菌落总数的测定............................................42.6革兰氏染色................................................53结果...........................................................53.1平板计数的结果............................................53.2水样中细菌总数的计算......................................63.3革兰氏染色结果............................................64.讨论...........................................................7参考文献.........................................................7致谢.............................................................8连云港师范高等专科学校毕业论文第2页共8页中文摘要摘要：本实验采用平板菌落计数法对连云港师范高等专科学校女生宿舍2A320的管道自来水，圣王桶装水及校内教育超市出售的康师傅、统一、今麦郎瓶装水分别进行了菌落总数的测定，并对其中的细菌进行培养，经过革兰氏染色和镜检，初步观察了细菌的形态和革兰氏阴阳性鉴定。实验结果表明校内管道自来水的菌落总数为66cfu/ml，符合国标GB5749-85，超市销售的康师傅、统一、今麦郎瓶装水中菌落总数分别为0.5cfu/ml、1cfu/ml、1cfu/ml,均符合国家标准GBl0789-89，而桶装水的水质不是很理想，测定的菌落总数为520cfu/ml，远超过了国标GB19298-2003中的规定。通过本次实验，期待更多的在校师生，能够关注饮用水质量，关爱健康，增强安全用水意识。关键词:饮用水；平板菌落计数法；菌落总数的测定；革兰氏染色ABSTRACTAbstract:Totalnumberofcoloniesofusingplate,LianyungangTeachersCollegedormitory2A320waterpipeline,SageBottledWater,AndschooleducationinsupermarketssellMasterKong,unity,bottledwaterJinmailangwereterminatedinthisstudybycolonycountmethod,andwhichthebacteriawerecultured,afterGramstainingandmicroscopy,weobservedtheshapeofbacteriaPreliminarilyandGramIdentificationofyinandyangTheresultsshowthatthetotalnumberofcampuspipelinewaterforthecolonywere66cfu/ml,meetthenationalstandardGB5749-85,MasterKongsupermarketsales,unity,bottledwaterJinmailangtotalnumberofcolonieswere0.5cfu/ml,1cfu/ml,1cfu/ml,meetthenationalstandardGBl0789-89,howeverthewaterqualityofbottledwaterisnotverysatisfactory,thedeterminationofthetotalnumberofcolonieswere515cfu/ml,whichfarexceedingthenationalstandardGB19298-2003intheregulations.Throughthisexperiment,lookingformoreteachersandstudents,tofocusthequalityofdrinkingwater,healthcare,increasedawarenessofsafewater.Keywords:drinkingwater,latcoloniesnotation,Theeterminationoftotalcolonies,Gram'sstaining连云港师范高等专科学校毕业论文第3页共8页饮用水中菌落总数的测定1.引言各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原微生物主要来源于人和动物的传染性排泄物。水是生命之源，和阳光、空气一样，是生命不可或缺、最基本、最必需的自然资源。水参与了生物体内所有的生理生化过程，同时又是体内进行系生化反应的良好场所。故水的微生物检验在保证饮水安全和控制传染病上有着重要的意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准GB5749-85规定，菌落总数不得超过100cfu/g(ml)，所用的方法是稀释平板计数法。平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。根据我校的实验条件，本实验拟选用国标规定的平板菌落计数法，对我校女生宿舍2A320的管道自来水，圣王桶装水及校内教育超市出售的康师傅、统一、今麦郎瓶装水进行了菌落总数的测定，为全校师生的饮水安全提供理论和实践依据。2.材料与方法2.1实验材料随着生活水平的提高，人们对水的质量有了高要求，生产商择世所需，引进了先进的净水设备，来满足不同层次的人群需求。小区居民喝自来水，办公室人员喝桶装水，学生则喝瓶装水的居多，针对以上情况，本实验选取的水样是连云港师范高等专科学校女生宿舍2A320的管道自来水、圣王桶装水和校内教育超市出售的康师傅、统一、今麦郎三种常见瓶装水。详情见表1。表1样品编号及存放时间样品名称样品编号实验日期存放时间(天）量取体积（ml）管道自来水ZS2010.11.15/15圣王桶装水ST2010.11.15315康师傅KS2010.11.152515统一TS2010.11.152315今麦郎JS2010.11.152615连云港师范高等专科学校毕业论文第4页共8页2.2培养基的配制及其灭菌由于水中的细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖。因此本实验采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基培养出的细菌总数仅是一种近似值。本培养基的主要成分有：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，自来水[1]。根据配置培养基的体积，事先加水溶解已经量取好的相应质量的牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，然后加入到未沸的600-700ml的自来水中，边加热边用玻璃棒搅拌，待水沸腾后加入琼脂，再加水至1000ml，不断地搅拌直到液体呈半透明状将其取下，分装。分装好的培养基运用高压蒸汽灭菌，121℃，15min即可[2]。2.3主要仪器手提式高压灭菌锅（型号：YX280A）、超净工作台（型号：SW-CJ-1B）、恒温培养箱（型号：PYX-120）、显微镜（型号：OLYMPUSCH20）。2.4染色液的制备革兰氏染色实验需要的染色液有:草酸钙结晶紫、碘液、95%的乙醇、番红[3]。草酸钙结晶紫的制备:先将2.0g结晶紫溶于20ml95%的酒精，0.8g的草酸铵溶于80ml蒸馏水中，然后将两液混合，静置48小时使用。碘液的制备:先将1.0g碘与2.0g碘化钾混合，加水少许，略加摇动，待碘完全溶解后再加蒸馏水定容至300ml。95%的乙醇的制备:将95ml的乙醇溶入100ml的水中。番红的制备:将0.25g沙黄溶解于10ml95%的乙醇中，待完全溶解再加蒸馏水至100ml。2.5菌落总数的测定采用国标中规定的平板菌落计数法，详细步骤见下。2.5.1水样的采取自来水，先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，待用。桶装水，取未打开的桶装水，打开盖子倒入灭菌的锥形瓶中，待用。瓶装水，在超净工作台上打开盖子将水倒入灭过菌的锥形瓶中，待用。2.5.2水样稀释及培养2.5.2.1水样稀释取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取lml水样注入第一管9ml灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。管道自来水、圣王桶装水和三种瓶装水分别按照以上叙述进行稀释。通过预实验，本实验所采用的管道自来水的水样稀释度为100，圣王桶装水的水样稀连云港师范高等专科学校毕业论文第5页共8页释度为10-1，康师傅、统一、今麦郎三种瓶装水的水样稀释度均为100[4]。2.5.2.2制作平板用一支灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中,共做两个平皿。另取一支灭菌吸管吸取1ml灭菌的蒸馏水，注入灭菌培养皿中，共做两个皿，作为空白对照。分别在以上四个培养皿中倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。管道自来水、圣王桶装水和三种瓶装水分别按照以上叙述进行制作平板。每个水样两个平行样，共做十个平板，外加每个水样一个空白对照板。2.5.2.3菌落培养待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中，培养48h。2.6革兰氏染色本实验采用革兰氏染色法对细菌菌落进行染色，革兰氏染色一般包括初染、媒染、脱色、复染、镜检五个步骤，染色制片后选用OLYMPUSCH20显微镜，在油镜下进行镜检。具体操作方法如下[5]。2.6.1涂片固定在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。2.6.2初染草酸铵结晶紫染2分钟，自来水冲洗，去掉浮色。2.6.3媒染用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。2.6.4脱色用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。2.6.5复染用蕃红染液复染2分钟，水洗。2.6.6镜检干燥后用油镜观察，革兰氏阳性菌仍呈蓝紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。以分散开的细菌革兰染色反应为准，过于密集的细菌常由于脱色不完全而呈假阳性。3结果3.1平板菌落计数的结果用直接计数法，记录每个水样每个平板的菌落数，然后计算每个水样同一稀释度的两个平板的平均菌落数