高效液相色谱法测定蔬菜中8种氨基甲酸酯类农药残留_邵金良

现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vol.27,No.7856高效液相色谱法测定蔬菜中8种氨基甲酸酯类农药残留邵金良，黎其万，刘宏程，佴注，兰珊珊，梅文泉，杜丽娟，樊建麟（云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所，云南昆明650223）摘要：建立了固相萃取-高效液相色谱柱后衍生荧光检测蔬菜中涕灭威亚砜，涕灭威砜，灭多威，三羟基克百威，涕灭威，克百威，甲萘威及异丙威等8种氨基甲酸脂类农药残留的分析方法。本文对测定氨基甲酸酯农药残留的分离条件，提取溶剂，洗脱溶剂，净化材料和基质效应进行了优化试验。结果显示，8种氨基甲酸脂类农药在0.1~1.0mg/L的浓度范围内线性良好，线性相关系数为0.99943~0.99992，检出限为0.008~0.01mg/kg之间。样品经乙腈提取，氨基小柱净化，采用基质加标，在0.1mg/kg添加水平的平均回收率为79.4%~119.0%，相对标准偏差2.5%~11.5%；0.2mg/kg添加水平的平均回收率为81.2%~115.5%，相对标准偏差为2.8%~8.1%。此方法可适用于大白菜，辣椒，茄子，番茄，菠菜，苦瓜，结球甘蓝和豇豆等样品的氨基甲酸酯类农药残留的分析测定。关键词：高效液相色谱法；柱后衍生；氨基甲酸酯类农药；蔬菜文章篇号：1673-9078(2011)7-856-860DeterminationofEightCarbamatePesticidesinVegetablesbyHighPerformanceLiquidChromatographySHAOJin-Liang,LIQi-Wan,LIUHong-cheng,ER-Zhu,LANShan-shanMEIWen-quan,DULi-juan,FANJian-lin(InstituteofAgricultureQualitystandards＆TestingTechnique,YunnanAcademyofAgriculturalScience,Kunming,Yunnan650223,China)Abstract:AnewmethodforthesimultaneousdeterminationofeightcarbamatepesticidesinChinesecabbage,pepper,egg-plant,tomato,Chinesespinach,bittergourd,cabbageandcowpeabyhighperformanceliquidchromatographywasdeveloped.Eightcarbamatepesticideswasextractedfromthesamplesbyacetonitrile,salted,purifiedwithLC-NH2columnanddeterminedbyhighperformanceliquidchromatographyusingpost-columnderivatizationwithfluorescencedetector.Theproposedmethodsshowedagoodlinearitybetweenanalyticalsignalintherangeof0.1~1.0mg/Lwiththelinearcorrelationcoefficientsof0.99943~0.99992andlimitsofdetectionof0.008~0.01mg/kg.Theaveragerecoveriesobtainedfromsamplesspikedwithstandardsatconcentrationlevel0.1mg/kgand0.2mg/kgwereintherangeof79.4%~119.0%and81.2%~115.5%,respectively,withrelativestandarddeviationsof2.5%~11.5%and2.8%~8.1%,respectively.Themethodwasaccurate,reliable,andcanbeusedfordeterminationcarbamatepesticidesinvegetables.Keywords:highperformanceliquidchromatography;post-columnderivatization;carbamatepesticides;vegetables氨基甲酸酯是一种具有良好杀虫效果，在我国使用量较大的广谱性农药[1]。该类农药是以甲酸酯为前体化合物发展而来的农药，具有分解快、残留期短、低毒、高效和选择性强的特点，主要用于粮食、蔬菜和水果等农产品[2]。近年来，随着氨基甲酸酯类农药在蔬菜栽培中的大量使用，主要施用于土壤中，防治收稿日期：2011-03-22基金项目：云南省社会发展科技计划项目（2008CD181）；云南省科技创新强省计划项目（2009AB002）。作者简介：邵金良（1979-），男，硕士，助理研究员，主要从事农产品质量安全评价与分析测试。通讯作者：刘宏程土壤中的多种害虫和线虫，容易导致在蔬菜中的残留，给蔬菜生产也带来新的质量问题。许多国家和地区对这类农药的残留量都制定了严格的限量标准，欧盟规定蔬菜、水果中灭多威的最高残留限量为0.05mg/kg[4]。我国规定涕灭威（包括涕灭威砜和涕灭威亚砜），克百威（包括3-羟基克百威）在蔬菜中的限量值为0.02mg/kg[5]。灭多威在甘蓝类蔬菜的限量值为2.0mg/kg，甲萘威在蔬菜中的限量值为2.0mg/kg[6]。目前，国家标准或行业标准方法体系中有关氨基甲酸酯类农药的检测方法有气相色谱法，如SN/T2572-2010的液相色谱-质谱质谱法（LC-MSMS）；GB/T5009.199-2003的酶抑制快速检测法和NY/T761-2008现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vol.27,No.7857规定液相色谱法等。关于食品中氨基甲酸酯类农药残留量的分析国内外均有报道，检测方法主要有气相色谱法（GC）[7]、气相色谱-质谱法(GC-MS)[8]、高效液相色谱法（LC）[9]、高效液相色谱-质谱法（LC-MS）[10]等。这些方法各有优缺点，由于氨基甲酸酯类化合物极性强，热稳定性较差，使用GC或GC-MS检测时常需采用特殊的技术或手段以达到准确测定的目的，方法复杂[11]。高效液相色谱法检测氨基甲酸酯类农药残留具有选择性强、灵敏度高、重现性好等优点[12]。本文研究了大白菜、辣椒、茄子、番茄、菠菜、苦瓜、结球甘蓝和豇豆等8种蔬菜样品中残留的涕灭威亚砜（aldicarbsulfoxid）、涕灭威砜（aldicarbsulfone）、灭多威（methomy1）、三羟基克百威（3-hydroxycarbo-furan）、涕灭威（aldicarb）、克百威（carbofuran）、甲萘威（carbaryl）与异丙威（isoprocarb）等8种农药的样品前处理方法和高效液相色谱分离检测条件，旨在建立同时测定蔬菜中8种氨基甲酸酯类农药残留量的检测与确证方法。1材料与方法1.1材料与试验仪器1.1.1仪器高效液相色谱仪-荧光检测器（PerkinElmer200A）；LC-NH2SPEtubes（Supelclean，500mg/3mL）；电子分析天平：AE-100型，梅特勒-托利多仪器有限公司；OrganomationAssociates氮吹仪，美国Jnc.公司；Diax900高速匀浆机（德国Heidolph公司）；HY-5回旋式震荡器，河南省巩义市联合予化仪器有限公司；HH，S11-1数显电热恒温水浴锅，深圳市标雅科技有限公司。1.1.2材料新鲜蔬菜，包括大白菜，辣椒，茄子，番茄，菠菜，苦瓜，结球甘蓝和豇豆，购自昆明市五华区江岸小区蔬菜农贸市场。1.1.3试剂乙腈（AR），二氯甲烷（AR），乙腈（HPLC，德国莫克），甲醇（HPLC，德国莫克），氯化钠（AR）：550℃烘4h，放入干燥器内冷却后密封保存备用；0.05mol/LNaOH溶液：cat.NOCB130,Pickering；OPA稀释溶液：cat.NOCB910,Pickering；邻苯二甲醛（O-Phthaladehyde，OPA）：cat.NO0120,Pickering；巯基乙醇（Thiofluor）：cat.NO3700-2000,Pickering。1.1.4标准溶液标准储备溶液（1）：分别准确吸取质量浓度为100mg/L的涕灭威亚砜（aldicarbsulfoxide），涕灭威砜（aldicarbsulfone），灭多威（methomy1），三羟基克百威（3-hydroxycarbofuran），涕灭威（aldicarb），克百威（carbofuran），甲萘威（carbaryl）和异丙威（isoprocarb）等农药标准溶液各1.0mL到10.0mL容量瓶中，用色谱纯甲醇定容，此溶液浓度为10.0mg/L，溶液避光低温保存；标准工作溶液（2）：准确移取一定量标准储备溶液至10mL容量瓶中，用甲醇定容，分别配制得到0.1、0.2、0.25、0.5、1.0mg/L的标准工作液。1.1.5反应液的配制OPA溶液的配制：称取100.0mg邻苯二甲醛，先用色谱纯甲醇溶解，2.0g巯基乙醇用少量OPA稀释溶液溶解，将稀释好的邻苯二甲醛溶液和巯基乙醇溶液混合，用OPA稀释溶液定容至1000.0mL，超声2.0min后备用（现配现用）。1.2试验方法1.2.1色谱条件色谱柱：WatersSymmetryShield™C18（4.6×250mm，5μm）；柱温：30.0℃；检测波长：Ex=339nm，Em=445nm；流动相：H2O:CH3CN；流速：1.0mL/min；进样量：10.0µL。柱后衍生条件：0.05mol/LNaOH溶液：流速，0.30mL/min；OPA溶液：流速，0.30mL/min，柱后衍生温度80℃。1.2.2样品处理将大白菜、辣椒、茄子、番茄、菠菜、苦瓜、结球甘蓝、豇豆等蔬菜样品用食品粉碎机进行粉碎匀浆处理，准确称取25.0g试样于250mL锥型瓶中,加入50mL乙腈，用Diax900高速匀浆机匀浆80s后用滤纸过滤，滤液收集到装有8~10g氯化钠的具塞量筒中，收集滤液40~50mL，盖上塞子，剧烈震荡80s，在室温下静置约30min，使乙腈相和水相分层。从具塞量筒中吸取l0mL乙腈溶液于150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，烧杯内缓慢通入氮气，将乙腈蒸发近干，用2.0mL甲醇：二氯甲烷（1:99）溶解残渣。盖上铝箔，待净化[13]。取SupelcleanLC-NH2小柱，用5.0mL甲醇：二氯甲烷（1:99）预洗条件化，弃去淋出液，当溶剂液面达到小柱吸附层表面时，立即将上述提取液加入柱中，用甲醇：二氯甲烷（1:99）10mL洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中，将离心管置于氮吹仪上，水浴50℃，氮吹蒸发至近干，用甲醇准确定容至2.0mL，经0.22μm有机相滤膜过滤，待测。1.2.3样品测定在优化色谱条件下，待仪器稳定后，重复进样0.2mg/L的氨基甲酸酯农药标准混合溶液，待相邻两针现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2011,Vol.27,No.7858的响应值变化小于2.0%时，按标准溶液，样品溶液,样品溶液，标准溶液的顺序进样，以标准品的保留时间定性，以样品溶液峰面积和标准溶液峰面积比较定量。1.2.4结果计算样品中被测氨基甲酸酯类农药残留含量以质量分数w计，单位mg/kg表示，按式⑴计算[13]：ρ×××××=mAVVAVkgmgws231/）（⑴式中:ρ-标准溶液中农药的质量浓度，mg/L；A-样品溶液中被测农药的峰面积，µv·s；As-农药标准溶液中被测农药的峰面积，µv·s；V1-提取溶液总体积，mL；V2-吸取用于检测的提取溶液的体