病毒半数致死量、感染量(LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50)测定法

2010年版兽药典三部增、修订品种品名中国兽药典(2010年版三部)半数保护量（PD50）测定法半数保护量（PD50）测定法将样品按适宜的倍数进行倍比稀释，取至少3个剂量组，按产品推荐的使用途径，每个剂量组接种1组动物，同时设1组动物作为对照。接种一定时间后，连同对照动物，每头（只）攻击一定剂量的强毒，观察一定时间。记录各组动物的发病情况，动物发病即判为不保护。计算各剂量组免疫动物保护的百分率。对照动物的发病率应符合规定。按Reed-Muench法计算PD50。表XX.口蹄疫灭活疫苗的试验示例疫苗接种剂量观察结果累计结果发病数保护数保护比例发病数保护数保护率（％）1头份055/5091001/3头份233/524671/9头份411/56114稀释系数（1/3）的对数为－0.48。高于50％保护时（上例中为67％）疫苗接种剂量（1/3头份）的对数值为–0.48。logPD50=－0.48+0.32（－0.48）=－0.63则：PD50=10－0.63头份，即疫苗的一个PD50为0.23头份，表示该疫苗接种0.23头份可以使50％的动物获得保护。每头份疫苗合4.3PD50。病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50）测定法病毒半数致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50）测定法将病毒悬液作10倍系列稀释，取适宜稀释度，定量接种实验动物、胚或细胞。由最高稀释度开始接种，每个稀释度接种4～6只（枚、管、瓶、孔），观察记录实验动物、胚或细胞的死亡数或病变情况，计算各稀释度死亡或出现病变的实验动物（胚、细胞）的百分率。按Reed-Muench法计算半数致死（感染）量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50）。计算公式为：logTCID50=高于50％的病毒稀释度的对数+距离比例稀释系数的对数表XX试验示例（以TCID50为例，接种量为0.1ml）病毒稀释度观察结果累计结果CPE数无CPE数CPE（％）CPE数无CPE数CPE（％）10－46010013010010－55183718810－62433252910－70600110距离比例=高于50%－50%高于50%－低于50%=67%-50%67%-14%=0.3210倍系列稀释的稀释系数的对数为－1。高于50％感染时（上例中为88％）病毒稀释度（10－5）的对数值为－5。logTCID50=－5+0.64（－1）=5.64则：TCID50=10－5.64/0.1ml。表示该病毒悬液作10－5.64稀释后，每孔（瓶）细胞接种0.1ml，可以使50％的细胞产生细胞病变（CPE）。距离比例=高于50%-50%高于50%-低于50%=88%-50%88%-29%=0.64