细胞计数

细胞计数1细胞计数•原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。2细胞计数•细胞计数是检验工作者最基本、也是最常用的技术之一。2细胞计数方法2细胞计数方法•显微镜细胞计数法•将样本做适当稀释（或浓缩），有时还需特殊染色，充入细胞计数池，在显微镜下计数计数板中一定体积内细胞数，经换算得每升标本的细胞数。•缺点：计数误差大，费时、费力2细胞计数方法•仪器计数•Countstar细胞计数仪2细胞计数方法•Scepter—手持式细胞计数器3血细胞计数板•也叫血球计数板•用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具。3血细胞计数板•血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。3血细胞计数板盖片24×20×0.6mm计数室计数室计数室计数室区域边长（mm）面积（mm2）深度（mm）体积（mm3）计数池390.10.9大方格110.10.1计WBC中方格0.250.06250.10.00625计RBC中方格0.20.040.10.004计RBC小方格0.050.00250.10.000254细胞计数•1.将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。•2.制备细胞悬液，混匀。将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。•3.计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：•细胞数/mL=四大格细胞总数/4×1045注意事项(1)计数的标本必须新鲜,及时计数。(2)稀释液要过滤,试管、枪头、计数板等要清洁，避免杂质等污染。(3)灌板前要充分混匀，适当用力快速震荡30s，但要避免产生过多的气泡，要一次充满。。(4)加盖片方式：WHO推荐采用“推式”，较“盖式”更准确。(5)注意区别灰尘、杂质。(6)镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。6质量控制•显微镜技术的误差可分为技术误差和固有误差两种6.1技术误差由于操作不正规或使用器材不精确造成的误差。这类误差通过主观努力可以避免或显著减小，属系统误差。常见技术误差：①使用器材不符合要求：②稀释倍数不准；③稀释后没有混匀。④充液不当；如未混匀、冲液过多、产生气泡、盖片移动、操作台不平等。⑤细胞结团。⑥误认6.2固有误差（1）计数域误差：即使一个技术熟练的人，使用同一器材，同一份稀释细胞悬液，多次重复计数，结果仍有一定的误差。这是由于充池后细胞在计数室内分布不可能完全相同所造成的误差，叫固有误差或计数域误差，此属偶然误差。这种误差可因计数更多的细胞而减少，但不能完全消除。如：在同一计数池中，计数100个细胞将可能出现4%的误差，若计数1000个细胞时，误差将减少至2.9%。在计数室内计数面积越大，计数的细胞越多，计数域误差越小。（2）容器（包括吸管和加样枪）误差和计数室误差是由容器和计数室精度引起的误差6.2固有误差Thankyou!