抗原抗体反应有以下几个特点

第一节抗原－抗体反应抗原与相应抗体在体内或体外相遇可发生特异性结合，呈现的某种反应现象。抗原抗体反应有以下几个特点:1.抗原与抗体结合是特异性结合表位(抗原)——超变区(抗体)2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合氢键、疏水键、静电引力和范德华力(Vanderwaal‘sforce)、电子云力的合力。抗原和抗体可解离,性质不变。3.抗原抗体反应可分为两个阶段（1）特异性结合阶段此阶段需时短,仅需几秒到几分钟,无可见反应出现（2）可见反应阶段需时较长,数分,数小时或数日出现可见现象,表现为沉淀,凝集,细胞溶解等4.抗原和抗体结合是否呈现明显可见的反应现象,与两者的分子比例密切相关抗原抗体反应的主要影响因素：1.电解质:在中性或碱性条件下,抗原抗体均带负电荷,适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而互相结合,出现明显的沉淀或凝集现象。2.温度:37℃3.酸碱度:pH6-8抗原抗体反应包括：沉淀反应凝集反应溶解反应补体结合反应中和反应已知抗体检测未知抗原；已知抗原检测未知抗体。一、沉淀反应(precipitation)概念：可溶性抗原与相应抗体在电解质存在条件下结合，出现沉淀物的现象。沉淀反应的试验方法：环状法絮状法琼脂中沉淀法环状法——重层法灵敏度：0.5ug抗体/ml原理：絮状法——混合法灵敏度：1.5ug抗体/ml原理：琼脂中沉淀反应法：双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)单向免疫扩散(singleradialimmunodiffusion)对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis)火箭电泳(rocketelectrophoresis)免疫电泳(immunoelectrophoresis)(一)双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)原理：在琼脂板上按一定距离打孔，抗原和抗体分别加入相邻孔中，使其向孔周围扩散，比例适宜相对应的抗原抗体结合，在抗原抗体孔间出现白色的沉淀线(沉淀物)。灵敏度：1～20μg抗体/ml应用：主要用于检测体液中各种蛋白成分，如甲胎蛋白（AFP）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）等。(二)单向免疫扩散(singleradialimmunodiffusion)原理：抗体预先与琼脂混匀制成凝胶板，打孔,将可溶性抗原加至孔中，向周围扩散，与抗体在比例适宜处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原浓度呈正相关。根据沉淀环直径大小从预先绘制成的标准曲线，查出待测标本中抗原含量。优点：定量测定抗原，方法简便，易观察结果。灵敏度：1～20μg／ml。缺点：需时长，1～2天观察结果。应用：常用于血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。(三)对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis)原理：在电场中进行双向免疫扩散。加抗原孔靠近阴极，加抗体孔靠近阳极。通电(缓冲液pH8.6)后，抗原向阳极泳动，抗体向阴极泳动，二者在比例适宜处形成白色沉淀线。特点：出结果快于双向免疫扩散，约需1小时；灵敏度:10μg／ml。(四)火箭电泳(rocketelectrophoresis,又称电免疫扩散)原理：在电场中进行单向免疫扩散。抗原在含抗体的琼脂中泳动，二者于比例适宜处形成沉淀峰。沉淀峰的高度与抗原含量成正比。从参考曲线查出抗原含量。敏感度：1～20μg／ml优点：需时较短。应用：测定抗原含量。(五)免疫电泳(immunoelectrophoresis)原理：将抗原在琼脂平板上进行电泳，然后沿电泳方向挖一与抗原平行槽，加入抗体，进行双向免疫扩散。抗原与抗体在比例适宜处形成沉淀弧。根据沉淀弧的数量、位置和形状，与已知标准抗原比较，即可分析抗原的成分及性质。应用：血清蛋白组分分析；抗原成分分析。二、凝集反应(agglutination)概念：颗粒性抗原或吸附于颗粒上的可溶性抗原(或抗体)于相应抗体(或抗原)，在电解质存在下出现凝集物的现象。凝集反应包括：◆直接凝集反应(directagglutination)◆间接(被动)凝集反应(indirect/passiveagglutination)◆间接凝集抑制试验(indirectagglutinationinhibitiontest)◆协同凝集试验(coagglutinationtest)◆抗球蛋白试验(antiglobulintest，Coomb’stest)(一)直接凝集反应(directagglutination)原理：颗粒性抗原(本身)+抗体凝集包括：玻片法：定性，用于：菌种鉴定人ABO血型鉴定试管法：半定量，用于：伤寒或副伤寒诊断肥达氏反应(Widaltest),布氏菌病诊断瑞特氏反应(Wrighttest)直接凝集反应（玻片法）(二)间接(被动)凝集反应(indirect/passiveagglutination)原理：可溶性抗原(或抗体)，吸附颗粒载体＋抗体(或抗原)凝集间接凝集反应种类及所用载体间接凝集反应载体间接血凝实验红细胞间接乳胶凝集实验聚苯乙烯胶乳颗粒间接炭凝实验活性炭(三)间接凝集抑制试验(indirectagglu-tinationinhibitiontest)原理：抗体＋反应＋抗原致敏载体颗粒可溶性抗原凝集(四)协同凝集试验(coagglutinationtest)原理：IgG结合于SPA(金黄色葡萄球菌)＋凝集抗原(可溶性）应用：检测微量抗原(存在于血液、脑脊液和其他分泌液)。用于流脑、伤寒、布氏菌病等的早期诊断。(五)抗球蛋白试验(antiglobulintest，Coomb’stest)原理：红细胞(Rh+)＋凝集(不可见)＋抗人球蛋抗Rh抗体(IgG)白抗体凝集(可见)灵敏度：3X10-2ug/ml二种方法：A.直接抗球蛋白实验B.间接抗球蛋白实验三.免疫标记技术用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体(或抗原)，与抗原(或抗体)进行反应，通过检测示踪物质，分析被检抗原(或抗体)的存在或含量的方法。灵敏度：高，1X10-4～1X10-5ug抗体/ml应用：微量物质的定性、定量或定位。免疫标记技术的基本类型：（一）免疫荧光技术(immunofluorescencetechnique)（二）免疫酶技术(immunoenzymatictechnique)（三）同位素标记技术(isotopelabellingtechnique)（一）免疫荧光技术(又称荧光抗体技术)原理：用荧光素(如异硫氰酸荧光素、罗丹明B200等)标记抗体(荧光抗体)，用荧光抗体浸染细胞或组织切片，抗原与荧光抗体结合，于荧光显微镜下观察荧光，确定被检抗原的存在。免疫荧光技术包括：直接法间接法间接补体增强法1．直接法优点：特异性强缺点：必须制备针对每一种抗原的荧光抗体。应用：用于抗原鉴定、定位和分布。2．间接法用荧光素标记抗球蛋白抗体(荧光抗抗体)优点：只制备一种荧素光标记的抗体，可检测多种抗原或抗体缺点：易产生非特异性荧光应用：（1）检测抗原：如T细胞亚群检测【抗体(第一抗体，已知)＋抗原】＋荧光抗抗体(第二抗体)荧光显微镜下观察荧光（2）检测抗体：如抗核抗体检测【抗原(已知)＋抗体(未知抗体)】＋荧光抗抗体(第二抗体)荧光显微镜下观察荧光3．间接补体增强法原理：{【抗体(或抗原，已知)＋抗原(或抗体，未知)】＋补体}＋荧光标记抗补体C3的抗体显微镜下观察荧光优点：敏感性高缺点：易产生非特异性荧光应用：检测抗原或抗体（二）免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)是将抗原抗体反应与酶催化底物的作用相结合的一种方法。主要有两种类型：1.免疫酶染色2.酶免疫测定（enzymeimmunoassay,EIA）1.免疫酶染色(又称免疫组化技术,immunohistochemistrytechnique)原理：用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记抗体(酶标抗体)，将酶标抗体与抗原(细胞或组织切片)作用，抗原与酶标记抗体结合，加底物，酶催化底物产生有色物质，观察结果。应用：细胞内、组织内抗原的定性、定量和定位检测。2.酶免疫测定酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)原理：①将抗原(或抗体)结合于固相载体；②与抗体(或抗原)反应；③加酶底物，酶促反应。灵敏度：2X10-520μg／ml应用：广泛，可检测微量抗体和抗原(如微生物成分、激素、细胞因子、粘附分子等）。ELISA法：直接法间接法双抗体夹心法(双位点法)竞争法(三)同位素标记技术(isotope-labellingtechnique)放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)是一种放射性同位素分析与抗原抗体反应相结合方法。优点：灵敏度高,可检测0.001pg／mL特异性强应用：微量抗原和抗体检测。缺点：不稳定，废物处理麻烦等。1.检测抗原抗原竞争法【Ab(有限量)+Ag(待测）】+Ag*(已定量)↓Ag-Ab复合物或Ag*-Ab↓分离Ag*-Ab和游离Ag*↓测定Ag*-Ab和游离Ag*放射性↓从标准曲线上读知含量2.检测抗体放射过敏原吸附试验(radioallergosorbenttest,RAST)原理：与ELISA间接法相同。应用：可用于病人血清中过敏原特异性IgE抗体的定性或定量检测。（四）发光免疫分析(luminescentimmuno-assay,LIA)原理：用发光物质标记抗体(或抗原),再同抗原(或抗体)进行反应，以发光现象作为抗原抗体反应的指示系统。应用：定量检测抗原、抗体。发光分为：化学发光(chemiluminescence)生物发光（bioluminescence）化学发光原理：发光物质激发态分子基态分子释放光子(发光)化学发光剂：鲁米诺（luminol）反应剂：过氧化阴离子反应剂（五）免疫胶体金技术(colloidalgold／immunogoldstaining)原理：胶体金标记蛋白质(如抗体)+组织细胞(待测)观察结果(用电镜、光镜或肉眼)应用：免疫组织化学定位，测定细胞表面标志和细胞内成分。优点：易行、省时、价廉、灵敏度高。胶体金：用还原法将四氯金酸(HAuCl4)制成特定大小的金颗粒，该颗粒由于静电作用呈稳定的胶体状态，称为胶体金。