抗原抗体反应的原理

第一节免疫学技术的范畴与应用一、免疫学技术的范畴二、免疫学技术的应用特点免疫学技术的范畴1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定免疫学技术的应用特点1、对象——“包罗万象”2、方法——“兼容并蓄”第二节有关免疫学基本概念一、抗原的概念与属性二、免疫细胞的概念与分类三、免疫应答的概念与过程免疫原性——可识别、可反应性（诱导机体产生免疫应答的特性）免疫反应性——选择结合性（和免疫应答产物特异性结合的特性）抗原的概念与属性免疫细胞的概念与分类免疫细胞（Immunecells）泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。免疫活性细胞（Immunecompetentcell，ICC）能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。免疫细胞的类型红细胞血小板肥大细胞中性粒细胞巨噬细胞树突状细胞浆细胞T细胞NK细胞免疫应答的概念与过程免疫应答（immuneresponse）免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。免疫应答的阶段1、抗原识别阶段（antigen-recognizingphase）2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activatingphase）3、抗原清除阶段（antigen-eliminatingphase）第三节抗原抗体反应的基本原理一、抗原抗体反应的原理二、抗原抗体反应的特点三、影响抗原抗体反应的因素抗原抗体反应的原理1、抗原抗体结合的作用力2、抗原抗体结合物析出原因引起抗原抗体结合的作用力1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（VanderWaals力）3、氢键结合力4、疏水作用力抗原抗体结合物析出的原因析出+——++——+电解质+——++——++——++——++——++——+抗原抗体反应的特点1、特异性2、可逆性3、适合比例性特异性抗原A抗原C抗原B特异性反应交叉反应无反应可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAgAb适合比例性抗体含量抗原含量前带后带等价带网格学说（latticetheory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）第四节免疫学检测技术的评价一、评价标准二、特异性与敏感性的关系评价标准Specificity（特异）Sensitivity（敏感）Simplicity（简便）Safety（安全）Saving（节约）特异性与敏感性的关系特异性高、敏感性低敏感性高、特异性低第一节抗原/免疫原制备的基本概念一、抗原制备的目的二、抗原的“纯度”三、抗原制备的主要技术途径抗原制备的目的免疫原：激活T、B细胞半抗原：检测相应抗体抗原的“纯度”免疫原：保留足够的可被T、B细胞识别的抗原决定簇半抗原：尽可能减少影响反应特异性的抗原决定簇抗原制备的主要技术途径天然抗原——分离、纯化半抗原——人工合成、载体联接抗原肽——合成、基因工程制备第二节完全抗原/免疫原的制备方法一、颗粒性抗原的制备二、可溶性抗原的制备颗粒性抗原的制备1、采集、分离抗原2、无害化处理可溶性抗原的制备与纯化1、处理与粉碎2、蛋白质分离3、单一组分提取4、抗原纯度鉴定处理与粉碎组织粉碎：机械、生物细胞破碎：物理、化学、生物蛋白质分离选择性沉淀：盐析有机溶剂沉淀水溶性非离子型聚合物沉淀透析技术：超滤技术：单一组分提取层析技术：凝胶过滤离子交换亲和层析离心技术：差速离心密度梯度离心电泳技术：电泳洗脱等电聚焦凝胶层析（分子筛）离子交换层析+++———————++++++++——+++——++亲和层析抗原纯度鉴定方法：层析性质测定电泳法免疫法指标：电泳纯免疫纯第三节半抗原免疫原制备的方法一、载体的选择二、半抗原与载体的联接载体的选择蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽载体：多聚赖氨酸高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素半抗原与载体的联接1、连接方式：物理法（吸附）化学法2、化学连接方法：直接联接法：间接联接法：半抗原与载体直接联接碳化二亚胺法蛋白质-COO—+R-N+=CN-R`H-N+-R蛋白质-COO-C-NH-R`+半抗原-NH2O蛋白质-C-NH-半抗原+R-NH-CO-NHR`半抗原与载体直接联接戊二醛法蛋白质-NH2+半抗原-NH2+COH-（CH2）3-COH蛋白质-N=CH-（CH2）3–CH=N-半抗原半抗原与载体直接联接氯甲酸异丁酯法半抗原-COOH+Cl-COO-CH2CH（CH3）2OO半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2+蛋白质-NH2半抗原-CO-NH-蛋白质+HO-CH2CH（CH3）2半抗原与载体间接联接琥珀酸酐法OO半抗原-CH2–OH+C-O-CCH3CH3O半抗原-CH2–O-C-(CH2)2-COOH半抗原与载体间接联接O-（羟甲基）羟胺法半抗原-C=O+H2N-O-CH2-COOH半抗原-C=N-O-CH2-COOH半抗原与载体间接联接一氯醋酸钠法半抗原--OH+Cl-CH2-COONa半抗原--CH2-COOH半抗原与载体间接联接重氮化的对氨基苯甲酸法HOOC--NH2+NaNO2HOOC--N=N半抗原--OH+HOOC--N=N半抗原--N=N--COOHOH本章小结1、免疫学技术的应用范畴2、免疫学的基本概念3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素4、抗原制备的方法思考题1、免疫学技术的应用范畴有哪些？2、体外抗原抗体反应有哪些特点？3、可溶性抗原的制备涉及哪些技术？4、如何使半抗原具有免疫原性？举例说明半抗原与载体的联接方法。