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临床常用免疫学检查中国医科大学教育部•免疫学诊断：用免疫学方法确定疾病相关因子、监测疾病过程、判断疗效及预后，涉及对疾病相关因子的诊断和辅助诊断，以及检测机体免疫功能状态。•临床常用免疫学检查：血清免疫球蛋白检测，血清补体检测，细胞免疫检测，肝炎病毒标志物检测，感染免疫检测，肿瘤标志物检测，自身抗体检测及其它免疫检测。一.体液免疫功能检测•检测血清免疫球蛋白及其类别（尤其是IgG、IgA和IgM）和水平，可为诊断免疫缺陷性疾病和免疫增殖性疾病提供重要参数。•检测针对疫苗或感染因子的特异性抗体及其水平，可较直接反映机体特异性体液免疫功能状态。1．免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig)具有抗体活性和抗体样结构的球蛋白，由浆细胞产生，存在于血液、体液、外分泌液及部分细胞的表面。分五类：IGG、IGM、IGA、IGD、IGE。〔1〕.IgG、IgM、IgA的检测：IgG是血清中的主要抗体成分，占总Ig的75%是唯一能通过胎盘的Ig，通过自然被动免疫获得。IgM是Ig中分子量最大者，亦是最早出现的抗体为五聚体，在机体早期的免疫防御中起重要作用。IgA分血清型与分泌型，尤以分泌型IgA在局部抗感染、抗过敏起重要免疫屏障。检测方法：免疫扩散法及免疫比浊法参考值：各个年龄阶段有差别临床意义：(1).Ig均增高常见于慢性肝病、淋巴瘤、SLE、RA、MM等(2).单一Ig增高：见于免疫增殖性疾病如MM（IGG），巨球蛋白血症（IGM）(3).Ig降低：反复呼吸道感染者常见IGA单一降低2.IgG亚类测定分四类：IgG1IgG2IgG3IgG4与免疫缺陷病和变态反应性疾病有关3.IgE测定血清含量低但与I型变态反应疾病有关IgEELISA法0.1~0.9mg/L•IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、重链病、肝脏病、结节病、RA和各种过敏性疾病。•IgE降低：见于丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期用免疫抑制剂者和共济失调性毛细血管扩张症等。测定方法：ELISA法参考值：0.1~0.9mg/L意义：•IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、重链病、肝脏病、结节病、RA和各种过敏性疾病。•IgE降低：见于丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期用免疫抑制剂者和共济失调性毛细血管扩张症等。二.血清M蛋白(monoclonalimmunoglobulins)测定测定方法：蛋白电泳法、免疫比浊法和免疫电泳法参考值：阴性意义：检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖性疾病。见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病和半分子病等三.血清补体检测•基本概念补体(complement)：是一组具有酶原活性的糖蛋白，由传统途径的9种成分C1-C9、旁路途径的3种成分及其衍生物组成，参与灭活病原体的免疫反应，也参与破坏自身组织和自身细胞而造成的免疫损伤。1.补体CH50方法：试管法参考值：50000-100000u/l意义：反映补体传统途径活化的活性程度。1、CH50增高见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤；2、CH50降低见于肾小球肾炎、自身免疫病、感染性心内膜炎、病毒性肝炎和慢性肝病。2.补体C3方法：单向免疫扩散法(1.14±0.27g/L)免疫比浊法(0.85-1.70g/L)意义：1、增高见于急性炎症、传染病早期、肿瘤和排异反应；2、减低见于70%以上的急性肾小球肾炎、、85%以上的链球菌感染后肾炎、78%狼疮性肾炎患者。还见于活动性SLE和类风湿性关节炎。2.补体C4方法：单向免疫扩散法(0.553-0.109g/L)意义：1、升高见于急性风湿热、结节性动脉周围炎、皮肌炎、关节炎、和组织损伤等；2、降低见于自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、1型糖尿病、胰腺癌、多发性硬化症、类风湿性关节炎、IgA肾病和遗传性IgA缺乏症。3.补体C1q方法：单向免疫扩散法(0.197-0.04g/L)意义：1、增加见于骨髓炎、类风湿性关节炎、痛风、过敏性紫癜等；2、降低见于SLE和混合性结缔组织病等。4.BF方法：单向免疫扩散法(0.1-0.4g/L)意义：增高见于某些自身免疫病、肾病综合征、慢性肾炎、恶性肿瘤；2、减低见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。第二节细胞免疫检测主要包括有T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及其亚群；临床常对淋巴细胞的数量，表面标志物及功能进行检测，以了解机体的细胞免疫功能.•T细胞免疫检测1.T细胞表面标志物检测(1).E-玫瑰花形成试验：用于检测T细胞的数量。其临床意义：①降低；见于免疫缺陷性疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、大面积烧伤、多发性神经炎等。②升高：见于甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动性肝炎、SLE活动期和器官移植排斥反应等。（2）T细胞分化抗原测定①CD3:参考值（IFA法）61%-85%意义：降低见于自身免疫性疾病，如SLE、RA等②CD4:参考值（IFA法）28%-58%意义：降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、爱滋病、应用免疫抑制剂者③CD8+:参考值（IFA法）19%-48%意义：减低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病④CD4+/CD8+：参考值（IFA法）1.66±0.33意义：①比值增高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、变态反应等；②比值降低见于爱滋病；③监测器官移植排斥反应时比值增高提示可能发生排斥反应。•注：当CD1-8都增高可能为T细胞型急性淋巴细胞白血病•B细胞免疫检测1.B细胞表面标志物检测：B细胞表面有表面抗原(CD19、CD20、CD21、CD22、CD40等)与表面受体(BCR、CKR、CR、FC等)BCR又称B细胞表面免疫球蛋白（SmIg），是B细胞的特征性表面标志，其类别随B细胞发育阶段不同而变化。(1).B细胞表面免疫球蛋白（SmIg）测定：主要用于检测外周血B细胞的百分率。临床意义：①SmIg减低见于免疫缺陷性疾病；②SmIg升高见于慢性淋巴细胞性白血病、多毛细胞白血病和原发性巨球蛋白血症。原发性巨球蛋白血症患者SmIgM阳性细胞可占78%。(2).B细胞分化抗原测定：临床意义：①升高见于急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和Burkitt淋巴瘤等；②降低见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂后。•淋巴细胞功能检测(1).T细胞转化试验：反映T细胞的免疫功能。临床意义同T细胞花结形成试验。但Down综合征时明显增高。(2).混合淋巴细胞反应：反映机体整体的细胞免疫功能，还可用于HLA的细胞学分型•自然杀伤细胞免疫检测自然杀伤细胞活性测定：可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一。在血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病，爱滋病和某些病毒感染者活性降低；宿主抗移植物反应者活性升高。•中性粒细胞吞噬、杀菌功能检测反映机体抗感染免疫的能力第四节感染免疫检测病原体及其代谢产物进入人体后刺激机体免疫系统，产生相应的免疫产物，免疫产物进入血液。临床多利用凝集试验、补体结合试验、沉淀试验、免疫荧光发（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫法（RIA）等手段检测血清中的免疫产物或病原体的抗原成分，帮助某些感染性疾病的诊断或早期诊断。近年来随着分子生物学的发展，可以利用聚合酶链反应（PCR）或DNA探针分子杂交技术对病原体的核酸进行检测，帮助确定病原学诊断。一.细菌感染免疫检测1.抗链球菌溶血素“O”测定•病人感染A群溶血性链球菌一周后ASO开始升高，4-6周达高峰，可持续几个月或几年，见于活动性风湿热、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤软组织感染。•抗体滴度逐步下降提示疾病缓解。2.肥达氏(Widal)反应：协助伤寒与副伤寒的诊断。参考值：O凝集价1：80伤寒H凝集价1：160副伤寒A、B、C凝集价1：80意义：⑴O升高，H正常⑵O正常，H升高⑶O升高，H升高⑷O升高，A、B、C均升高3.结核杆菌抗体：辅助结核病的诊断。4.结核杆菌DNA检测：可以确定结核病的诊断，但应防止假阳性。5.C反应蛋白测定急性时相反应蛋白，具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用临床意义：1).组织损伤2).各种细菌性感染3).风湿热4).恶性肿瘤，器官移植后排斥反应，妊娠等二.病毒感染免疫检测1.汉坦病毒抗体IgM：协助肾综合征出血热早期诊断。2.乙脑病毒抗体IgM：协助乙脑的早期诊断。3.轮状病毒抗体IgM、IgG；轮状病毒RNA:阳性提示现症感染。4.柯萨奇病毒抗体IgM、IgGIgM阳性示现症感染。当IgM抗体阴性IgG阳性提示既往感染5.EB病毒抗原、抗体测定：抗-VCAIgM阳性常见于传染性单核细胞增多症；抗-VCAIgA阳性主要见于鼻咽癌三.TORCH感染免疫检测1.弓形虫抗体IgM和IgGIgM阳性提示现症感染，IgG阳性提示既往感染。2.巨细胞病毒抗体IgM、IgG：IgM阳性示现症感染或病毒活动期。IgG既往或潜伏感染。巨细胞病毒DNA:阳性提示现症感染。3.风疹病毒抗体测定4.HSV抗体测定四.寄生虫感染免疫检测1.血吸虫感染：1).环卵沉淀实验2).血吸虫抗体IgM和IgE：阳性提示现症感染，早期诊断指标。IgG阳性提示既往感染。2.囊虫抗体测定：囊虫特异性IgG阳性提示囊虫病•在血清学试验中，若能以某种病原体的特异性抗原检测到针对某种病原体的特异性IgM抗体，或以特异性抗体特别是单克隆抗体检测到病原体的抗原成分，或以多聚酶链反应（PCR）或DNA探针分子杂交技术检测到病原体的核酸，则具有早期诊断意义，甚至确诊意义。但要注意假阳性或假阴性的问题，特别是在分析PCR结果时更应注意，因为PCR具有高度特异性和高度敏感性，稍有不慎即被污染造成假阳性。第五节.肿瘤标志物检查肿瘤标志物(TM)：指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质，主要用于肿瘤普查、辅助诊断、观察疗效和判断预后。•常用肿瘤标志物检测及临床意义：分三类•1．蛋白质类肿瘤标志物：包括甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）、癌抗原15-3（CA15-3）、组织多肽抗原（TPA）、前列腺特异抗原（PSA）鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）等。甲胎蛋白主要用于原发性肝癌的辅助诊断，此外生殖腺胚胎癌、胃癌和胰腺癌血中AFP也可增高。CEA明显增高见于胰腺癌、结肠癌、肺癌和乳腺癌。妇科肿瘤特别是卵巢癌CA125水平明显升高。CA15-3主要用于乳腺癌的辅助诊断和疗效观察。PSA可用于前列腺癌的辅助诊断、疗效观察以及转移和复发判断。SCC在上皮细胞源性恶性肿瘤中升高。•2．糖脂类肿瘤标志物：包括癌抗原-50（CA-50）、癌抗原72-4（CA72-4）、癌抗原242（CA242）、糖链抗原19-9（CA19-9）等。CA-50增高见于大部分恶性肿瘤，动态观察其水平变化对癌肿疗效、预后判断、复发检测颇有价值。CA72-4是卵巢肿瘤和胃肠道肿瘤的标志物。CA242是胰腺癌和结肠癌的标志物。CA19-9在胰腺癌、胆道肿瘤和胃肠道癌中水平明显升高。•3．酶类肿瘤标志物：包括前列腺酸性磷酸酶（PAP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、异常凝血酶原（APT）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）等。PAP对前列腺癌的疗效观察、有无复发、转移及预后判断有重要意义。NSE是神经母细胞瘤和小细胞肺癌的标志物。APT和AFU在肝细胞肝癌中水平明显升高。第六节自身免疫检测抗核抗体：•ANA阳性：血清滴度1：40为阳性。最多见于未治疗的SLE，活动期SLE几乎100%阳性。也可见于其他自身免疫性疾病。抗核抗体共有4种荧光核型：均质型，见于SLE、SS、PSS、MCTD；边缘型，见于SLE、SS；颗粒型，见于SLE、RA；核仁型，见于PSS、Crest征。•抗脱氧核糖核酸测定：分为抗双链DNA抗体（ds-DNA）、抗单链DNA抗体（ss-DNA）、抗Z-DNA抗体。抗双链DNA抗体的检测有重要的临床意义，它见于活动期的SLE，阳性率70%-90%。组织和细胞抗体的检测：•抗线粒体抗体（AMA）：正常人群阳性率低于10%。许多肝脏疾病可检出AMA，原发性胆汁