蒽酮法测定可溶性糖

蒽酮法测定可溶性糖摘要：用蒽酮法测定苹果熟果中糖类的含量,波长620nm,检测线性范围0.01～0.5mg/ml,相关系数为0.9993,RSD=5.64%回收率为98.56%。此方法操作简便准确、显色灵敏、重现性好、不受还原性物质的干扰。能测定总糖,还能测定可溶性糖,因此适合野生植物中糖类含量测定。关键词：苹果果肉;蒽酮法;可溶性糖;含量测定糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm，故在此波长下进行比色。一、材料实验材料:苹果试剂:1.葡萄糖标准溶液（100μg/mL）：准确称取10mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至10mL，使用时再稀释10倍（100μg/mL）。2．蒽酮试剂：称取0.1g蒽酮，溶于80%浓硫酸（将98%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）100mL中，冷却至室温。仪器设备:分光光度计，分析天平，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管,剪刀，玻棒，水浴锅，，漏斗，滤纸。二、方法与结果1.样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5～1.0g（或干样粉末5～100mg），放入大试管中，加入15mL蒸馏水，在沸水浴中煮沸20min，取出冷却，过滤入100mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。2.标准曲线制作取6支大试管，从0～5分别编号，按表24-1加入各试剂。蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量试剂管号012345100μg/mL葡萄糖溶液（mL）00.20.40.60.81.0蒸馏水（mL）1.00.80.60.40.20蒽酮试剂（mL）5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量（μg）020406080100将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg）为横坐标绘制标准曲线。3．样品测定取待测样品提取液1.0mL加蒽酮试剂5mL，同以上操作显色测定光密度。重复3次。三、结果计算溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100四、结果分析1.葡萄糖的标准曲线见下图．通过葡萄糖标准曲线得到的回归方程为：A=0.0039*C-0.0005，R2=0.9891，线性关系良好，并且可以由此推出公式：C=(A+0.0005)／0.0039．2.样品质量及其吸光度值3.可溶性总糖的含量及其分析4.小结本实验的原理是苹果样品在强酸作用下脱水生成糖醛或其衍生物后,与特异性显色剂蒽酮迅速而完全地缩合成稳定的有色物质,其生成量与可溶性糖含量之间存在着定量关系,根据试验方法学考察和样品测定,在620nm处有最大吸收峰,且线性关系良好。参考文献:1．国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版[M].北京:化学工业出版社,2005:199.2．封士兰,胡芳弟,刘欣,等.HPLC研究甘肃产白条党参指纹图谱[J].中成药,2005,27(7):745-748.3．宋丹,程雪梅,李隆云,等.HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量[J].中国中药杂志,2008,33(17):2133-2135.4．王忠.植物生理学[M].北京:中国农业出版社,2000:121-166.5．徐惠风,金研铭,张春祥,等.向日葵叶片可溶性糖含量的研究[J].吉林农业大学学报,2000,22(1):23-25.6．陈立松,刘星辉.水分胁迫对荔枝叶片糖代谢的影响及其与抗旱性的关系[J].热带作物学报,1999,20(2):31-35.