高氏一号培养基的制备

高氏一号培养基的制备一、目的要求1、了解高氏一号培养基的特点、作用。2、熟练掌握配制合成培养基的一般方法。二、基本原理高氏一号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。如果加入适量的抗菌药物，则可用来分离各种放线菌。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。高氏一号培养基配方如下：可溶性淀粉20gNaCI0．5gKNO31gK2HPO4．3H2O0．5gMgSO4．7H2O0．5gFeSO4．7H2O0．01g琼脂15～25g水1000mlpH7.4～7.6三、操作器材１、溶液与试剂可溶性淀粉，NaCI，KNO3，K2HPO4．3H2OMgSO4．7H2O，FeSO4．7H2O，琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。2、仪器与其他用具试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，培养基分装器，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等四、操作步骤1、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4．7H2O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。2、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。反之，用1mol/LHCI进行调节。3、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。4、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。5、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa高压蒸汽灭菌。6、搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至500C左右，将试管口端搁在玻璃棒上。斜面的斜度要适当，使斜面的长度约为管长1/3。7、无菌检查将灭菌培养基放入370C的培养箱中培养24～28h，以检查灭菌是否彻底。