免疫定性试验的室内质量控制

免疫定性试验的室内质量控制浙江省人民医院检验中心陈永健免疫定性试验免疫定性试验：只有两种检测结果（例如：阳性/阴性、存在/不存在、有反应的/无反应的）的方法。半定量免疫试验：结果报告为阴性、+1、+2、+3或滴度（1:8等）的方法（例如抗核抗体（ANA）滴度报告、梅毒快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）检测等）。中华人民共和国卫生行业标准临床定性免疫检验重要常规项目分析质量控制指标（征求意见稿）2012-2-8免疫定性试验（胶体金）免疫层析试验（ICA）免疫渗滤试验（IFA）传染性标志物（HBV、HIV）激素（HCG、LH）心损标志物（cTNI、CKMB）金标免疫层析试验的室内质量控制质控区/对照区是室内质控？质控区质控区HCG金标试纸检测原理质控区呈色，反映了检测过程的无失误，但不能完全说明灵敏度有无变化，即不能用“质控线”来代替对试纸条质量的评价。你在，或者不在，我都在这里。HBsAg批批检？免疫定性试验如凝集试验、金标记免疫层析试验大都属于CLIA’88豁免的技术。FDA等批准家庭使用的技术，只要求检测装置有内对照，检测结果满足说明书规定即可。对于需要经验来判定结果的技术仍需在实验室进行，均有质控的要求，但国际上无具体操作的规定和资料。美国CDC在“CLIA”88豁免的HIV抗体快速检测质量保证指南2007年版中要求：除检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性外对照作为质控。无判定标准，一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控，相反则为失控。金标记免疫层析试验的猜想质控物：阴性和弱阳性外对照质控频度：检测日或分析批为单位质控判断：阴、阳性质控物的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控。免疫定性试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay）夹心法/竞争法/间接法/捕获法判读结果终止反应加底物呈色洗涤温育加样（酶结合物）封闭包被ELISA的室内质量控制〖临床ELISA操作中的注意事项和质量控制〗尽量控制可控因素：加样量、温育温度、洗涤次数/洗涤量、酶标仪等。减少不可控因素引起的误差：酶标板质量、温育时间等。加样量的差异温育时间的不可控同时加入待测样本和酶标抗体公平竞争温育时间的不可控10分05秒加酶结合物后37℃温育25分HBcAb不公平竞争ELISA室内质控品选择（个数）阴、阳对照是内对照，用来保证实验有效和计算临界值，室内质控必须引入外对照（外部质控物）。ELISA定性试验的临床意义在于是给出阴性或阳性，与检出量无关，因此质量控制的重点是保证试验的灵敏度和重复性。质控品选择：阴性质控品/临界值质控/弱阳性质控品/阳性质控品/强阳性质控品（HOOK效应）。室内质控物自行配制ELISA室内质控品选择（浓度）质控品选择：阴性质控品/弱阳性质控品阴性质控品：自配或商品化弱阳性质控品：浓度？S/Co:1.5～4.0或2.0～4.0理论上可选择这样的质控品，其S/CO值的均值-3SD时等于或略高于“判断值”，以保证用这一浓度质控品时，有99.7%的把握无阴性发生的可能。S/Co:1.5～4.0或2.0～4.0S/Co:1.5～4.0或2.0～4.0批间CV与浓度关系：批间CV的大小决定弱阳性质控物浓度的选择。CVS/CO临界值质控0.05.010.015.020.025.030.035.0浓度1浓度2浓度3浓度4S/COCV(%)S/COCV（%）CVS/CO不同浓度HBsAb(S/CO)的批内变异2014年04月HBsAg室内质控原始数据（批间变异）2014-04HBsAg原始数据0.000.501.001.502.002.503.003.5015913172125293337414549次S/CO浓度选择需要实验摸索0.05.010.015.020.025.030.035.0浓度1浓度2浓度3浓度4S/COCV(%)S/COCV（%）2014-04HBsAg原始数据0.000.501.001.502.002.503.003.5015913172125293337414549次S/CO质控表征值OD值、S/N值、S/CO值、COindex值等HBsAg：［阴性］*2.1HBsAb：［阴性］*2.1HBeAg：［阴性］*2.1HBeAb：［阴性］*0.2HBcAb：［阴性］*0.5N值＞0.1无效N值≤0.4无效阴性对照对实验结果的影响HBsAg阴性对照＞0.1阴性对照引起的质控变化N值＞0.4有效OD值相近，但S/CO值差异大HBcAbOD值：单变量S/CO值：双变量/三变量增加阴性对照的个数来保证质量。阴性对照均值（NCx）HIV实验：3个NC,多于半数阴性质控对照符合要求能一个水平多个质控物求均值？ELISA质控的频次和位置CLIA’88，§493.1218(b)定义:测试系统的准确性、精密度保持稳定的一个间隔,不超过24小时。临床免疫学的批为一块板或一批条件不变的标本，以此为质控点点图。位置：从质控的原则出发，要求随机放置。实际情况？质控图（L-J）L-J质控图适用条件2014年04月HBsAg室内质控原始数据VAR000013.002.752.502.252.001.751.501.251.00.75.50.25VAR00001Frequency1086420Std.Dev=.64Mean=1.26N=48.00利用cutoff验证值建立质控图（许斌）质控规则（以cutoff验证值建立）阳性重点是下限，阴性重点是上限，这样的单个超限判为失控。阴性阳性同时上限或同时下限超限判为失控。阳性上限超限而阴性未超或阴性下限超限而阳性未超，视为不失控。双区法定性质控图设计（周有良）质控品：弱阳性‘⊕’，阴性‘Θ’质控图：以Cutoff值为界划分为阴性区域和阳性区域。质控品的阴性结果点在阴性区，阳性结果点在阳性区。阳性区按L-J质控图制图。质控规则（双区法）基本规则：阳性质控品结果在阳性质控区内，阴性质控品结果在阴性质控区内，否则视为失控。辅助规则：1-3S/2-2S/10X视为警吿。出现吿警状态，应查找原因，及时纠正。失控处理若阴阳性对照、阴性质控异常，或出现“花板”的情况则必须整批复查。在阴阳性对照、阴性质控正常且未出现“花板”的情况下，弱阳性质控S/Co超出-3SD时复查位于“灰区”标本，超出+3SD时则复查弱阳性标本。对于失控批的患者标本应根据不同情况采取相应的重测方案：阳性失控，重测所有阴性标本；阴性失控，重测所有阳性标本。L-J质控图：验证值图：分区处理小结ELISA自动化和系统化有助于提高质量阴性和弱阳性室内质控建立实验得出合适质控物浓度建立适合自己的室内质量控制图失控分区处理谢谢！