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临床检验学临床检验医学clinicallaboratorymedicine血液三大尿液常粪便规体液脱落细胞学血型与血库临床检验医学的定义及研究范围临床检验医学的发展史及现状临床检验基础教学的目的学好临床检验基础的要求临床检验基础的发展史①古代最早是检测尿液开始的。②17世纪的显微镜的发明推动了临床检验的发展。AntonyvanLeeuwenhoek③上世纪50年代，库尔特（Coulter）电阻抗原理的提出，使临床检验从手工步入自动化、电脑化，使得检验变得简便、快速、精密度高更。⑤目前，试剂更加批量化、配套化、专业化和多样化⑥检验液更加重视检验方法的标准化和质量控制，实施全面的质量控制和质量管理。⑦试剂和仪器的更新使得检验更便捷：如床边检测(pointofcaretest，POCT），使检测标本更新鲜、交叉污染率低、更接近病人的生理和病理情况。临床检验基础的现状（二）：实施与保证全面质量管理1.分析前：生理变化、饮食因素、药物因素、标本采集与保存等。2.分析中：检测方法、仪器设备性能与质量、试剂质量等。3.分析后：发报告的把关。复核其信息内容如姓名、性别、年龄、住院号、与疾病符合度等。临床检验的特点：1.操作的自动化2.方法的标准化3.技术的现代化4.试剂的商品化5.计量单位的国际化6.质量管理的全程化7.生物安全的严格化8.检验人员的合格化绪论临床检验医学的定义及研究范围临床检验医学的发展史及现状临床检验基础教学的目的学好临床检验基础的要求临检的基础教学目的:1.疾病诊断和鉴别诊断2.疾病疗效监测和预后观察3.疾病预防4.科学研究教学目标：掌握：皮肤采血方法，Hb成分、种类及测定临床意义。熟悉：血液的组成、理化性质和功能，Hb的结构，参考范围。第一章chapter1血液标本采集和血涂片制备bloodcollectionandbloodsmearpreparation血液组成离心后(写)血液主要理化性质①颜色：动脉血——鲜红色静脉血——暗红色血浆——浅黄色高脂膳食——乳白色溶血——血浆呈不同程度红色②量：成人约占体重的7%～9%，平均血量5L左右。③pH：7.35～7.45④比密：1.05～1.06⑤渗透压：290～310mosm/Kg·H2O第一节血液标本采集bloodcollection血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节一、标本采集的一般要求1.检验申请单：患者、临床信息完整2.标本采集和处理具体要求：标本种类标识、采集时间、急诊和危重患者信息、3.标本信息完整性：标本的防腐、保温等。4.标本拒收：根据标本接收的文件不符合者。二、血液标本类型1.全血(wholeblood)：静脉、动脉、毛细血管2.血浆(Plasma)：全血加入抗凝剂离心后的上清液。3.血清(serum)：血液凝固后离心所得上清液。4.分离或浓缩的血细胞成分：如血小板、白细胞、单个核细胞等。三、血液标本采集方法（一）皮肤采血（二）静脉采血（三）动脉采血（一）皮肤采血法适用于血量＜0.1ml的检验项目如RBC计数、WBC计数、Plt计数、Hb、ESR微量法等的测定等。器材：采血针专用的“采血针”或三棱针，用前应高压灭菌，一人一针。专用采血针三棱针采血部位（1）手指采血：WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指采血部位尖内侧优点：方便、获较多血量结果比较恒定缺点：与静脉血仍存在某些差异。（2）耳垂采血：优点：痛感轻、方便、适用于反复采集缺点：血循环差受气温影响大、检查结果不恒定、RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。（3）其他拇指、拇趾或足跟采血——半岁以下婴幼儿皮肤完整处——严重烧伤者采血操作1、准备：2、采血部位按摩：3、消毒皮肤：4、针刺：5、擦去第一滴血后吸血：6、压住伤口片刻：注意事项（1）采血部位皮肤完整。（2）无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针。（3）采血针刺入皮肤应深浅适中。（4）多项检查时，采血次序为：Plt计数→RBC计数、Hb→WBC计数与分类。（5）取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入堵塞仪器。第二章chapter2血液一般检验bloodgeneralexamination第一节红细胞检查Redbloodcell(erythrocyte)examination红细胞检查内容：RBC是血液中最多的一种血细胞，其检查包括红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。形态：无核，双凹圆盘形不染色：呈草黄色RBC的生成及破坏：（见PPT）早幼红细胞中幼红细胞干细胞原始红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞一、红细胞计数（redbloodcellcount）【原理（principle）】血液用等渗稀释液稀释一定倍数→滴入血细胞计数盘→显微镜下计数一定范围内的RBC数→换算得每升血液中的RBC数。【参考范围（range）】成年女性:（3.5～5.0）×1012/L成年男性:（4.0～5.5）×1012/L新生儿：（6.0～7.0）×1012/L婴儿：（4.0～4.3）×1012/L儿童：（4.0～4.5）×1012/L【临床意义（clinicalmeaning）】一、生理性变化(一)生理性增多1.机体缺氧而使RBC代偿性↑：新生儿、高原生活、强烈的体力劳动2.成年男性比女性高：男性在6～7岁时最低，25～30岁时达高峰。女性21～35岁维持最低水平。3.其他：抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等(二)生理性减少1.生长发育造血原料相对不足：从6个月至2岁婴幼儿2.造血功能减退：部分老年人生理性贫血3.血容量增加：妊娠中晚期二、病理性变化(一)病理性增多1.相对增多：血液浓缩2.绝对性增多：①继发性增多：如心肺疾病②原发性增多：如真性RBC增多症高于6.8×1012/L应采取治疗措施(二)病理性减少1.RBC生成减少：※骨髓功能衰竭：AA※造血物质缺乏或利用障碍：IDA、MA2.RBC破坏过多：※内在缺陷※外在异常3.RBC丢失过多：低于1.5×1012/L应考虑输血二、血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子结构及成分：血红蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。0.347g铁相当于100gHb;每克Hb可携带1.34ml氧。4.其它：①还原Hb：Fe2+②氧合Hb：与O2结合的Hb③Hb衍生物：HbCO、SHb④高铁Hb：Fe3+2014年6月17日59P24(二)Hb的测定：ICSH(Internationalcouncilforstandardizationhaematology)推荐氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）1.原理:Hb是色素蛋白，在血液中以多种形式存在，利用高铁氰化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi可与CNˉ结合成氰化高铁血红蛋白，在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定其吸光度，换算成每升血液中血红蛋白的含量。方法学评价（1）氰化高铁血红蛋白测定法优点：①操作简单、显色稳定，便于推广。②转化液较稳定，易保存。③除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。④HiCN参考品可长期保存，便于质控。缺点：①KCN剧毒，易污染环境。②不能测SHb，HbCO转化慢。③浊度高引起Hb浓度假性增高：高球蛋白血症，脂血，试剂混浊，WBC和Plt高。（2）十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS－Hb）测定法SDS能破坏WBC，摩尔消光系数未定。（3）碱羟血红蛋白测定法：HbF不能转化，最大吸收峰在575nm。（4）叠氮高铁Hb测定法：具有与HiCN法相似的优点，但仍存在试剂污染。（5）溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法：不破坏WBC，精密度、准确性略低。2014年6月17日65P254.参考值新生儿：170～200g/L女：110～150g/L男：120～160g/L70岁以上老年人：男：94～122g/L女：87～112g/L质量控制（1）血清浊度：（2）器材及试剂质量：（3）技术与操作：（4）废弃物的处理：临床意义与RBC计数相似（1）鉴别贫血类型：IDA：RBC↓Hb↓↓MA：RBC↓↓Hb↓（2）影响检验结果的因素：血液总容量改变全身血浆容量改变教学目标：掌握：血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义；网织红细胞的形态、计数方法及测定的临床意义。熟悉：血涂片制备与染色、红细胞的形态学改变。了解：Hb测定的方法学评价。血红蛋白测定Hemoglobinmeasurement(一)Hb分子结构及成分：血红蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。第三节血涂片制备与染色preparationandstainingofbloodsmears血涂片的制备（一）载玻片和推片：载玻片推片载玻片：清洁、干燥、中性、无油腻。推片：边缘光滑。（二）血涂片制作：良好血涂片：①血膜至少长25mm。②边缘整齐，两侧、两端留有空隙。③头体尾分明：细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。④血膜末端无粒状、画线或裂隙。(三)制备血涂片的影响因素推制适当的血膜角度大，速度快→太厚，太短推片边缘不光整→刷尖用力不均→厚薄不匀血量过多、血液粘度高→无尾载玻片有油腻血涂片染色染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。1..瑞氏染色法是血液染色最经典和最常用的染色法。2.吉姆萨染色法3.瑞氏吉姆萨复合染色法4.细胞活体染色法5.巴氏染色法6.苏木素-伊红染色法（一）瑞氏染色法（WrightStain）1.瑞氏染料成分：⑴美蓝（又称亚甲蓝，methyleneblue，M+）通常为氯盐，氯化美蓝(MCl)，阳离子，一种碱性染料。⑵伊红（eosinEˉ）：通常为钠盐(NaE)，阴离子，一种酸性染料。⑶Wright染料MCl+NaEME+NaCl⑷甲醇（溶剂、固定剂）：①MEM++Eˉ②具有强大的脱水力。可将细胞固定为一定形态；使蛋白沉淀为颗粒状、网状等结构；增强染色效果；染色原理：物理的吸附作用和化学的亲和作用正常情况染色结果：外观：淡紫红色镜下：①RBC呈粉红色，略有碟状感。②WBC浆中颗粒清楚，并显示各种细胞特有的色彩。③细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。RBC嗜碱性颗粒中性颗粒嗜酸性颗粒3.PH对细胞染色的影响：PH↓→正电荷增多→易与伊红结合→染色偏红PH↑→负电荷增多→易与美蓝结合→偏蓝染色的质量保证染液质量染色时间与染液浓度染色过程染液的冲洗脱色与复染4.方法学评价：瑞氏染色法：优点：对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果，缺点：对细胞核的染色不如吉姆萨染色吉姆萨染色：原理：同瑞氏染色。优点：本法对细胞核染色较好，结构更清晰。缺点：胞质和中性颗粒染色较差。瑞-吉复合染色：取长补短。第二章chapter2血液一般检查bloodgeneralexamination第一节红细胞检查Redblloodcellll(erythrocyte)examiinatiion红细胞形态检查Redblloodcellllmorphollogyexamiinatiion正常红细胞形态正常色素性normochromatic异常红细胞形态红细胞大小异常红细胞形态异常红细胞血红蛋白含量异常红细胞结构及排列异常1.RBC大小异常小RBC大RBC巨红细胞RBC大小不均d6umd10umd15um直径相差一倍以上2.RBC形态异常：球形RBC椭圆形RBC靶形RBC口形RBC镰形RBC棘形RBC裂片RBC缗钱状RBC泪滴形RBC3.红细胞内血红蛋白含量改变正常色素性normochromatic低色素性高色素性嗜多色性hypochromaticHyperchromaticpolychromaticRBC中出现异常结构：嗜碱点彩RBC染色质小体basophilicstipplingcellHowell-Jolly’sbody有核RBC疟原虫卡波环cabotringnucleatederythrocyteplas