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2014年现代食品生物技术习题——华中农业大学PCR及目的基因名词解释：感受态转化转导转染转化率填空：1.基因工程技术是生物技术的核心技术2.基因工程的实施包括四个必要条件：限制性内切酶、连接酶、载体、受体细胞51.与传统PCR相比，荧光定量PCR技术的优点：①实时在线监控②降低反应的非特异性③增加定量的精确性④结果分析更加快捷方便，无需跑凝胶52.DNA片段重组连接的方法主要有：①粘性末端的连接②平末端的连接③PCR产物的连接53．DNA片段重组中平末端连接效率比较低，为了增加效率常用：①同聚加尾法②衔接物连接③DNA接头连接法（均属于人工加尾形成“粘性末端”）54.目的基因的获取方式有：①化学合成法（全基因合成、基因的半合成）②基因组文库法③cDNA文库法55.细菌为宿主细胞，重组DNA导入的方式有：①化学方式氯化钙转化法②物理方式电转化法③生物方式转导转染56.感受态的大肠杆菌在温度为0℃时吸附DNA，42℃时摄入DNA57.大肠杆菌出现感受态的生理期是对数期69.重组子常常由载体提供的性状进行筛选，主要方式有：①报告基因筛选②抗性基因的插入失活筛选③β-半乳糖苷酶基因失活筛选法及其α-互补原理70.在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为___克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为___克隆。71.基因工程中常用到报告基因和标记基因，二者作用的主要区别：①标记基因筛选转化细胞的能力和效率高②标记基因存在安全性问题简答：1、重组子的鉴定，在DNA、mRNA、蛋白质水平上的方法有哪些？2、重组DNA导入酵母细胞、植物细胞、动物细胞的方式？3、影响转化率的因素有哪些？杂交名词解释：Southern印记杂交SD序列cDNA文库基因组文库外源基因KT-PCR插入失活MCS穿梭质粒载体探针（Probe）反义RNA（AntisenseRNA）目的基因受体细胞填空：42.将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为斑点印记43.核酸保持在细胞或组织切片中经过适当方法处理细胞或者组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交44.在将固定在膜上的DNA片段与探针进行杂交之前，必须将膜上所有能与DNA结合的位点全部封闭，称为预杂交简答题：1、理想质粒载体的必备条件？2、植物基因工程中重组子的导入方式有哪些？3、与DNA相比为什么mRNA容易降解，怎样防止其降解？4、提高平末端连接效率的主要策略有哪些？5、基因工程诞生的理论基础是什么？问答题：1、基因工程技术在食品工业中主要应用在哪些领域？2、细菌的限制与修饰系统有什么意义？限制性内切酶的种类有哪些？3、试述westernblotting杂交技术原理和方法4、大肠杆菌作为基因工程的受体菌具有哪些特点？真核基因在大肠杆菌中表达存在哪些障碍？细胞工程名词解释：细胞工程体细胞杂交原生质体传代培养原代培养细胞系细胞株干细胞填空：1、细胞工程的基本操作有①细胞融合②细胞拆分③大规模细胞培养④繁殖生物学技术⑤染色体和染色体组工程等2、细胞融合的理论基础是细胞膜的流动性3、诱导动物细胞融合的方式有：①生物法-灭活的病毒②化学法-PEG等③物理法-电融合4、微生物细胞融合的主要过程有①原生质体的制备（去细胞壁）②原生质体的融合③细胞壁的再生5、单克隆抗体的制备包括：动物免疫和亲本细胞的筛选、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选、单克隆抗体的制备和冻存、单克隆抗体的纯化6、革兰氏阴性菌制备原生质体通常需要添加的两种物质分别是：溶菌酶和EDTA问答题：1、细胞工程的主要研究方法及在食品工业中的应用2、简述植物细胞工程和动物细胞工程的区别3、简述电融合技术的原理4、什么是原生质体？简述其制备方法5、简述利用细胞融合技术生产单克隆抗体的主要步骤6、请比较生殖性克隆和治疗性克隆的区别7、简述一种动物活细胞计数法蛋白质工程填空：1、维持蛋白质一级结构的作用力是：氢键和二硫键，而维持蛋白质高级结构的作用力是非共价键，主要有氢键、疏水作用力、盐键、范德华力2、蛋白质的二级结构是指肽链本身折叠或盘曲所形成的局部空间构象，主要有：β-折叠、β-转角、α-螺旋、无规卷曲3、以多孔性凝胶材料为支持物，当蛋白质容易流经此支持物时，分子大小不同的蛋白质所受到的阻滞作用不同而先后流出，从而达到分离纯化的目的，此方法称为凝胶过滤层析4、在一定的PH条件下带有电荷，不同的蛋白质所带有的电荷种类和数量不同，因此他们与带电的凝胶颗粒之间的电荷相互作用不同。当蛋白质混合物流经带电凝胶时，电荷吸引作用小的蛋白质先通过，而电荷吸引作用大的蛋白质后流过凝胶，从而把不同的蛋白质分开的方法称为粒子交换层析5、由于不同的蛋白质所含的氨基酸的种类和数目不同，分子表面的极性氨基酸和非极性氨基酸的数目、分布区域不同，因此它与分子的比表面积大的吸附剂之间的相互作用力大小不同，根据此原理对蛋白质进行分离纯化，此方法称为吸附层析6、蛋白质生化分离技术主要有亲和层析、凝胶过滤层析、吸附层析、粒子交换层析7、固液分离技术主要有离心、过滤、沉淀8、细胞破碎技术有超声波、机械破碎、酶9、蛋白质在食品产业中的应用主要有提高酶的稳定性、活性、适应性10.易错PCR是创造随机突变的有效方法，为了提高随机突变的概率，通常采用的措施有降低一种dNTP的浓度、加入dITP代替被减少的dNTP、调整反应液中的锰离子的浓度。问答题：1、简述蛋白质工程和基因工程的区别2、一个蛋白质分子由300个氨基酸编码，欲将第102个氨基酸（由TAC编码）突变成GCT，简述用PCR的方法完成突变的步骤3、一个混合物中含有下列物质：细胞色素C（M=122500），牛胰岛素（M=5733），溶菌酶（M=13930），酵母己糖激酶（M=96000），谷氨酸脱氢酶（M=1000000），人血红蛋白（M=64500），马γ-球蛋白（M=149900），酵母脂肪酸合成酶（M=2300000），用这些混合物在分级范围为5000-4000000的分子筛柱中进行分离时，请预测其洗脱的先后顺序4、怎样用PCR的方法将一个由300个氨基酸编码的蛋白质的200-250个氨基酸之间的序列删除5、简述蛋白质工程研究的基本途径6、一个蛋白质由300个氨基酸组成，请简述用搭桥PCR的方法在该蛋白质的150个氨基酸出插入GAATCT这个6个碱基的基本步骤7、简述DNA改组技术（DNAShuffling）的基本原理PS：=。=学姐刚刚考完，凭印象把试题写出来了，基本上都是老师平时讲的内容。选择题是老师上课讲的那些，都过一遍就没问题了。听说一共四套卷子，四年轮一次，学弟学妹们加油，学姐只能帮你们到这了。名词解释：多克隆位点、蛋白质工程、感受态、细胞全能性、基因芯片简答：1、基因工程诞生的理论基础是什么？2、Southern杂交的基本过程3、大肠杆菌作为基因工程的受体菌具有哪些特点？真核基因在大肠杆菌中表达存在哪些障碍？4、细胞工程的主要研究方法及在食品工业中的应用5、简述利用细胞融合技术生产单克隆抗体的主要步骤6、简述DNA改组技术（DNAShuffling）的基本原理7、载体的一般功能2014．5.20