板蓝根化学成分研究

[收稿日期][基金项目]国家自然科学基金面上项目(30873381)[第一作者]孙琴(1976-)，博士、副教授、硕士生导师，从事中药制剂与中药学等学科方向的教学、科研工作。Tel：[phone]，E-mail：[e-mail]板蓝根化学成分研究孙琴1*，赵剑2，张诗静1，姜黎1（1.泸州医学院药学院，四川泸州646000；2.泸州医学院附属中医医院，四川泸州646000）摘要目的：研究板蓝根的化学成分。方法：运用多种层析分离手段，通过1H，13C-NMR等波谱技术及理化数据鉴定化合物的结构。结果：从板蓝根中分离并鉴定了6个化合物，分别为（1）正二十一烷酸、（2）β–谷甾醇、（3）靛玉红、（4）腺嘌呤核苷、（5）大黄素、（6）Fructopyrano-(1→4)-glucopyranose。结论：化合物1和6为首次从板蓝根中分离得到。关键词：板蓝根；化学成分IsolationandidentificationofchemicalconstituentsfromlsatidisRadixSunQin1＊,Zhaojian2,ZhangShi-jing1,JiangLi1（1.PharmacyofLuzhouMedicalCollege,Luzhou646000,China;2.AffiliatedHospitalofChineseMedicine,LuzhouMedicalCollege,Luzhou,646000,China）AbstractObjective:TostudythechemicalconstituentsfromlsatidisRadix.Methods:Thechemicalconstituentsoftheplantwereisolatedandpurifiedbycolumnchromatographyandtheirstructureswereelucidatedbyspectroscopicanalysis.Results:Sixcompoundswereisolatedandidentifiedasn-heneicosanoicacid,β-sitosterol,indirubin,adenosine,emodin,Fructopyrano-(1→4)-glucopyranose.Conclusion:Compounds1and6areisolatedforthefirsttimefromtheplantsoflsatidisRadix.Keywords:lsatidisRadix;chemicalconstituents板蓝根IsatidisRadix为临床常用中药，始载于《神农本草经》，味苦，性寒，有清热解毒、凉血利咽之功能，临床常用于治疗病毒性及细菌感染性疾病，其抗病毒的疗效确切。已有学者[1-4]对板蓝根的醇提物和水提取物的化学成分进行了分离鉴定。然而，其抗菌抗病毒的作用物质基础还并不明确，为进一步研究其抗病毒的作用物质，本论文对板蓝根的化学成分进行了进一步的分离，为下一步药效学的研究奠定基础。1仪器和材料ZF-90型暗箱式紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂），X-4型显微熔点测定仪（上海精密科学仪器有限公司），BrukerAvance400和500型核磁共振仪（德国Bruker公司），AutospecPremier质谱仪（美国Waters公司），薄层层析和柱层析硅胶（青岛海洋化工厂），SephadexLH-20(AmershamBiosciences)，其余试剂均为化学纯或分析纯。板蓝根（IsatidisRadix）购于泸州百草堂中药饮片公司，经泸州医学院生药教研室税丕先教授鉴定为十字花科植物菘蓝IsatisindigoticaFort.的干燥根。2提取与分离10kg板蓝根干燥饮片，分别用10倍量、8倍量的95％乙醇提取2.0、1.5h，合并两次提取液，过滤并浓缩至干，减压干燥至恒重，得浸膏140克。拌样上200-300目硅胶吸附，用二氯甲烷：甲醇梯度洗脱（100:0-1:1）共101组分，每组分1000ml，其中二氯甲烷：甲醇24:1部分得到化合物1（20mg）；二氯甲烷：甲醇20:1和二氯甲烷：甲醇10:1部分得到化合物2（50mg）和3（25mg）；二氯甲烷：甲醇7:1部分再经过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱得到化合物4（16mg）；二氯甲烷：甲醇3:1部分得到化合物5（10mg）；二氯甲烷：甲醇1:1部分经反复重结晶得到化合物6（300mg）。其中化合物1和化合物6为首次从该植物中分离得到。3结构鉴定化合物1，分子式C21H42O2，无色油状，NegativeESI-MS:m/z=325[M-H]-;从该化合物核磁数据可以看出为长链结构，碳谱173.3信号显示有羧基信号，故推测为脂肪酸类化合物，根据分子量325可得到分子式为C21H42O2，1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ:2.29(1H,t,J=7.6Hz),0.87(3H,t,J=7.6Hz);13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:173.3(s),34.0(t),31.9(t),24.8(t),22.7(t),14.1(q)，以上数据与文献[5]报道一致，故鉴定为正二十一烷酸(n-heneicosanoicacid)。化合物2，分子式C29H50O，白色晶体，mp138～140℃。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:5.35(1H,brt,J=2.5Hz),3.53(1H,m),1.00(3H,s),0.91(3H,d,J=6.2Hz),0.68(3H,s);13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:140.7(s),121.7(d),71.8(d),11.8(q),11.9(q)，以上数据与文献[6]报道一致，与β-谷甾醇对照品共薄层Rf值相同，混熔点无下降，故鉴定为β–谷甾醇(β–sitosterol)。化合物3，分子式C15H10N2O2，红色针状结晶，熔点347～349℃。1H-NMR(400MHZ,DMSO-d6)δ:11.02(1H,s,NH),10.90(1H,s,NH),8.76(1H,d,J=8.0Hz,H-4’),7.64(1H,d,J=7.2Hz,H-4),7.56(1H,t,J=7.2,8.0Hz,H-6’),7.40(1H,d,J=8.4Hz,H-7),7.25(1H,t,J=7.6,7.0Hz,H-6),7.00(2H,t,J=7.2,7.6Hz,H-5,5’),6.89(1H,d,J=7.6Hz,H-7);13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:137.3,129.5,124.9,124.6,121.5,120.0,113.7,109.8，以上数据与文献[7]报道一致，与靛玉红对照品共薄层Rf值相同，混熔点无下降，故鉴定为靛玉红(indirubin)。化合物4，分子式C10H13N5O4，无色粉末，根据给出的核磁碳谱，显示有10个信号，氢谱中8.18和8.30的2个氢可以看出该化合物含有杂原子，分子量为268，应该含有偶数个杂原子，PositiveESI-MS:m/z=269[M+H]+;1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ:8.18(1H,s,H-2),8.30(1H,s,H-8),6.01(1H,d,J=6.0,10.5Hz,H-1’),4.75(1H,t,J=6.0,10.5Hz,H-2’),4.38(1H,dd,J=6.0,10.5Hz,H-3’),4.26(1H,dd,J=6.0,10.5Hz,H-4’),3.89(1H,dd,J=6.0,10.5Hz,H-5a’),3.80(1H,dd,J=6.0,10.5Hz,H-5b’);13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ:153.5(d,C-2),149.4(s,C-4),119.8(s,C-5),156.7(s,C-6),141.6(d,C-8),89.6(d,C-1’),74.8(d,C-2’),71.8(d,C-3’),87.1(d,C-4’),62.6(t,C-5’)，以上数据与文献[8]报道一致，与腺嘌呤核苷对照品共薄层Rf值相同，故鉴定为腺嘌呤核苷(adenosine)。化合物5，分子式C15H10O5，砖红色粉末，该化合物为红色粉末，且核磁碳谱给出15个碳信号，其中有2个共轭的羰基信号189.6和181.1，除去21.6的甲基和2个羰基剩余12个碳信号均在烯区，故推断该化合物为蒽醌类，1H-NMR(400MHZ,DMSO-d6)δ:11.98(1H，s,8-OH),11.90(1H,s,1-OH),11.35(1H,s,6-OH),7.34(1H,s,5-H),7.04(1H,s,4-H),6.50(1H,s,2-H),7.00(1H,s,7-H),2.34(3H,s,CH3);13C-NMR(100MHZ,DMSO-d6)δ:189.6(C-9),181.1(C-10),165.7(C-6),164.5(C-8),161.5(C-1),148.2(C-3),135.0(C-11),132.6(C-14),124.1(C-2),120.5(C-4),113.2(C-13),108.9(C-5),108.9(C-12),107.9(C-7),21.6(CH3)，与文献[9]数据分析比较，化合物结构为1，3，8一三羟基-6-甲基蒽醌(1，3，8-trihydroxy-6-methylanthraquinone)，即大黄素。与大黄素对照品共薄层Rf值相同，故鉴定为大黄素(emodin)。化合物6，C12H22O11，无色粉末，综合核磁碳谱共有12个碳信号，且化学位移在60-105ppm范围，可能为二糖类，NegativeESI-MS:m/z=341[M-H]-;1H-NMR(500MHz,D2O)δ:5.45(1H,d,J=3.8Hz,H-1),3.40-4.30(13H,m);13C-NMR(100MHz,D2O)δ:92.5(d,C-1),74.3(d,C-2),72.9(d,C-3),81.7(d,C-4),76.8(d,C-5),60.4(t,C-6),104.0(s,C-1’),72.7(d,C-2’),71.4(d,C-3’),69.5(d,C-4’),62.7(t,C-5’),61.7(t,C-6’)，以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定为Fructopyrano-(1→4)-glucopyranose。参考文献：[1]左丽，李建北，徐景，等.板蓝根的化学成分研究[J].中国中药杂志，2007，32(8)：688-691.[2]孙东东，李祥，陈建伟，等.板蓝根醇提部位化学成分研究[J].中国药房，2007，18(30)：2324-2326.[3]何立巍，李祥，陈建伟，等.板蓝根水提取液中的化学成分研究[J].药学学报，2006，41(12)：1193-1196.[4]赵宇新，李曼玲.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药板蓝根中的精氨酸的含量[J].中国实验方剂学杂志，2004，10(1)：8.[5]刘建群，吴继梅，寇晓莉，等.扁担杆的化学成分研究[J].中药材，2008，31(10)：1505-1507.[6]邓玉林，徐志慧，杨宾，等.山楂根的化学成分分离和结构鉴定[J].北京理工大学学报，2006，26(5)：464-467.[7]李玲，杨根金，董同义，等.菘蓝化学成分研究[J].中草药，1996，27(7)：389.[8]ZouZJ,YangJs.StudiesonthechemicalconstituentsoftherootsofAnemonealtaica[J].ChinMedMat,2008,31(1):49-51.[9]XuJC,LiuXQ.ChenKL.AnewbiflavonoidfromSelaginellalabordeiHieron.exChrist[J].ChinChemLett,2009,20(8):9