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第五节血液制品主讲人：张琳组成员：陈玉欣贾娟殷亚兰李影什么是血液？•简称血。人或高等动物体内循环系统中的液体组织，暗赤或鲜红色，有腥气，对维持生命起重要作用。血浆血细胞白细胞红细胞血小板（45%）（55%）水：91-92%固体成分：8-9%各种蛋白质、无机盐、脂类、内分泌激素、维生素等血液血液的功能•红细胞：携带O2和CO2。•白细胞：防御功能（杀灭病原体，排斥外来异物）。•血小板：血液凝固功能（止血作用）。•血浆：运送营养物质和代谢物，参加调节体温和维持酸碱平衡。•人体内的血液量大约是体重的7～8％，如体重60公斤，则血液量约4200～4800毫升。各种原因引起的血管破裂都可导致出血，如果失血量较少，不超过总血量的10％，则通过身体的自我调节，可以很快恢复；如果失血量较大，达总血量的20％时，则出现脉搏加快，血压下降等症状；如果在短时间内丧失的血液达全身血液的30%或更多，就可能危及生命。•血液制品：由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离，提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天然或重组的）、红细胞浓缩物等，用于诊断、治疗或被动免疫预防。•血液制品属于生物制品范围，主要指以健康人血液为原料，采用生物学血液制品工艺或分离纯化技术制备的生物活性制剂。血液制品的定义•原料：血浆水：92%-93%；蛋白质：7%-8%，血液制品就是从这部分蛋白质分离提纯制成的。•现有种类：人血白蛋白，人胎盘血白蛋白，静脉注射用的免疫球蛋白等13种制品。•就我国目前的血液制品而言，还是以血浆中提纯的血浆蛋白制剂为主。血液制品的优点•血液制品是在临床输血的基础上发展起来的，它通过将血浆中的有效组分分离出来并用于治疗，较好地解决了全血不易运输和大量长期贮存中的问题。血液制品的生产工艺（1）人血白蛋白•人血白蛋白是血浆中含量最高的蛋白，占血浆蛋白的60%左右。目前国际上主要采用低温乙醇法分离血浆蛋白。此法最初由Cohn教授于1946年开发成功，当时称Cohn6法。此后许多学者提出了多种改良方法，最有价值的是Nitschman等提出的经改良的低温乙醇分离血浆的方法，简称N-K法。血浆上清液Ⅰ上清液Ⅱ+Ⅲ沉淀Ⅰ沉淀Ⅱ+Ⅲ（用于分离免疫球蛋白）乙醇：8%，PH：7.23℃，N：5.0%乙醇：19%，PH：5.8–5℃，N：4.5%上清液Ⅳ沉淀Ⅳ血蛋白制品上清液（废弃）乙醇：40%，PH：5.8–7℃，N：2.5%乙醇：40%，PH：4.8–8℃，N：2.0%N–K法分离人血白蛋白的工艺（N表示蛋白质浓度）•沉淀得到的白蛋白粗品中含有乙醇，精制时必须除去。去乙醇的方法有多种，如透析、冻干及超滤等。超滤可以一次完成脱醇、脱盐和浓缩工作，因此，血液制品企业目前普遍采用超滤技术来完成人血白蛋白的乙醇去除工作，一般采用8000或10000的超滤膜。（2）免疫球蛋白免疫球蛋白的制备过程与人血白蛋白很相似，也是用乙醇作为沉淀剂进行分离纯化。制备免疫球蛋白是从血浆制备人血白蛋白的一个分支。比较常见的低温乙醇法制备免疫球蛋白的工艺有Cohn6和N-K法。下面主要介绍一下N-K法分离免疫球蛋白的工艺流程：N-K法的沉淀II+III沉淀III免疫球蛋白上清液III（废弃）上清液II（废弃）乙醇：12%，PH：4.80°C，I：0.05，N：0.8%乙醇：25%，PH：7.2-7°C，I：0.03，N：0.5%N-K法分离免疫球蛋白的工艺流程I表示离子强度，N表示蛋白质浓度血液制品的安全性•制备血液制品的原料是人的血浆，因而通过血液传播的病原体，特别是某些病毒，如乙肝病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、艾滋病病毒（HIV）等对血液制剂的污染，是影响血液制剂安全性的主要原因。•因目前检测手段及病毒灭活有限，只能采用综合防范系统最大限度的减少这种危险性。该系统必须从三个环节严格控制：一、原料血浆的控制。二、生产过程的病毒灭活/去除处理；三、对最终产品的质量控制和对临床使用的反馈。（一）原料血浆的控制•主要从严格执行相关的原料血浆管理政策法规以及对已采集的血液进行严格的化验等措施来实施。（二）病毒灭活/去除处理•对血液制品进行灭活和去除病毒处理，是保证输血安全的重要环节。•目前，被公认有效的、广泛用于工业化生产的灭活病毒的方法有巴斯德消毒法、有机溶剂/表面活性剂法（S/D法）和干热灭活法等。•去除病毒的方法有低温乙醇血浆蛋白组分分离法、各种层析法和膜过滤法。（三）是对最终产品的质量控制和对临床使用的信息反馈。•大量经S/D法灭活的血液制品通过长期临床应用，已证明其安全可靠，因此被广泛采用。•为了最大限度地灭活和去除原料血浆中可能污染的致病病毒，WHO和国内外专家建议和要求在血液制品生产过程中，必须至少采用一种灭活和去除病毒技术，以保证血液制品的安全。血液制品的发展趋势•近十年来，层析技术在血液制品的纯化、分离方面也得到广泛的应用，但昂贵的操作成本使其在大规模生产中的应用受到很大的限制。•从理论上来说，现在人类可利用基因工程技术从非人源途径无限量获得各种血浆蛋白。该技术的优点是可以不用人血资源，并从根本上防止经血液传播的疾病对人类的感染。•将目的外源基因直接注入动物受精卵或早期胚胎内，然后植入假孕的母体动物，所生子代动物既能表达外源基因，又可遗传给下一代，成为转基因动物。转基因蚊子•另外，也利用基因重组技术将编码抗原决定簇或功能蛋白的外源基因插入植物病毒基因组中，用以感染植物，使其在植物体内复制和装配，成为转基因植物，从而高效表达所需抗原或蛋白。•在病毒检测方面，近年来欧美和日本已开始推广和执行核酸扩增技术（NAT）对原料血浆的病毒检测。快速发展的生物芯片技术，也使血浆中病毒的快速检测成为可能，虽然尚有很多问题需解决。最理想的病毒灭火方法•最理想的病毒灭火处理方法，应该是既不破坏蛋白质的分子结构和生物活性，又能彻底灭火所有的各类病毒。但迄今为止，用于血液制品的病毒灭火技术都各有不足之处，研究新的病毒灭活处理方法，仍是各国研究者的重要课题。