搜索
实验一中药显微鉴定技术实验目的1、掌握中药显微鉴定常用试剂的性质、用途、使用方法和注意事项。2、掌握中药显微鉴定常用制片方法。3、熟悉显微绘图的基本方法与技术。实验内容一、常用试剂的性质、用途、使用方法和注意事项。1、常用封藏剂(1)水合氯醛试液化学透明剂。特点：透入组织迅速，使干燥收缩的细胞逐渐膨胀复原，能溶解大多数细胞内含物，使细胞组织清晰透明，易于观察观察组织；细胞内含物：结晶；细胞；不加热观察菊糖、橙皮苷结晶制片法：冷装法、加热装片法注意：天冷时，易析出水合氯醛结晶，加稀甘油避免。(2)稀甘油物理性透明剂。透入组织较快，形成良好的透光条件。临时封藏剂，用于观察糊粉粒、菌丝、淀粉粒等。(3)甘油醋酸试液观察淀粉粒或测量其大小(4)蒸馏水透入组织较快，不能溶解多数细胞内含物，透明度差，易干燥用于检查淀粉粒的有无或配合其他试剂检查细胞壁和细胞内含物的性质。(5)乙醇50％以上固定乳管，60％～90％固定和观察菊糖；95％以上观察粘液细胞；90％乙醇溶解挥发油，与脂肪油区别；低浓度乙醇软化含粘液质的材料。(1)稀碘液淀粉粒显蓝色或蓝紫色。糊粉粒显棕色或黄棕色；加硝酸汞试液，显砖红色。(2)间苯三酚试液与浓盐酸加间苯三酚试液1～2滴，稍放置，再加浓盐酸l滴。木化细胞壁因木化程度不同，显淡红色、红色或紫红色。(3)苏丹Ⅲ试液加试液，放置15分钟以上或微加热，角化、栓化细胞壁显橘红色至红色；脂肪油、挥发油和树脂显橘红色、红色或紫红色。(4)氯化锌碘试液加试液，纤维素细胞壁显蓝色或蓝紫色。(5)α-萘酚试液加-萘酚试液，再加浓硫酸，菊糖溶解，溶液显紫红色。(6)钌红溶液粘液质显红色。加墨汁，各种组织均为黑色，粘液细胞呈透明状。或用95％乙醇装片后，自玻片一边引入一滴蒸馏水，粘液质膨胀溶解而扩散。(7)稀醋酸草酸钙结晶不溶解。(8)稀盐酸草酸钙结晶和碳酸钙结晶均溶解，而碳酸钙结晶溶解时产生气泡。(9)20％硫酸草酸钙结晶和碳酸钙结晶均溶解，并生成硫酸钙针晶，但碳酸钙结晶溶解时产生气泡。2、常用显微化学试剂二、常用制片方法：3、组织解离制片法氢氧化钾法硝铬酸法氯酸钾法2、组织制片法:徒手切片制片法表面制片法石蜡切片制片法滑走切片制片法1、粉末制片法：冷装片（演示）加热透化装片（演示）4、临时制片的要求★玻片应洁净、无污物及液体样品应适量试剂应充满整个盖玻片下方，不游动应无气泡或仅有小气泡石蜡切片制片程序简介：当选择好材料后,实验的主要过程有以下步骤：固定或软化—冲洗—脱水—透明—浸蜡—包埋—切片—贴片—烘片—脱蜡—二重染色—封片A)材料的固定或软化：最好用新鲜的固定材料(新鲜材料要迅速杀死植物细胞,最大程度保持组织和细胞的自然状态,这就是所说的杀死和固定)。番红-固绿对染法染色程序如下：（1）切片在二甲苯中脱蜡，约10min。（2）等量纯酒精二甲苯5min。（3）经纯酒精，95%、90%、80%、70%、505、305各级酒精各5min。（4）蒸馏水2-5min。（5）1%番红水溶液染色2h左右。（6）用水洗去多余染液。（7）50%、70%、80%、90%、95%各级酒精脱水10min。（8）1%的固绿（用95%酒精配制）染色10-40s。（9）95%酒精洗一下。（10）纯酒精脱水5min。（11）等量纯酒精二甲苯混合液中5min。（12）二甲苯5min。（13）中性树胶封藏。番红-固绿对染法特点：为植物制片上普遍使用的一种二重染色法，其染色程序简单并能清晰地显示出细胞的结构。番红为碱性染料，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性染料，能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色。绘图用具铅笔图：绘图纸绘图铅笔：HB（粗）、H（中粗）、3H（细）墨线图：硫酸纸、绘图笔、碳素墨水其他：绘图橡皮、直尺、小刀、纸夹三、常用的显微绘图技术（简介）●简图绘制法1.制作清晰的标本片2.仔细观察3.勾画轮廓图4.修正铅笔图5.图注及图名6.注意事项1．勾画轮廓图利用描绘器观察绘图，或显微照相后依次放大的照片绘图。先用3H铅笔绘出草图。直径较小的组织可全部绘出；直径大的组织由外向内分成数段，选取最有鉴别意义的组织特征描绘。描绘时，各段及各部位细胞的放大倍数应一致，各种细胞及内含物等应依次准确绘出，切忌随意填充。●详图绘制法2、详图中各类细胞的表示法：单线条法：适于薄壁细胞双线条法：适于略增厚壁的细胞三线条法：适于成群的厚壁细胞及导管；单个散在时，采用双线条法。3、各型铅笔的使用：HB型：粗线条。绘厚壁细胞、导管的外缘线；H型：中线条。绘薄壁细胞、结晶体、淀粉粒等；3H型：细线条。绘厚壁细胞、导管的内缘线、层纹、纹孔等4．修正铅笔图将勾画的轮廓图用不同型号(硬度)的铅笔和3项中规定的画法修整成铅笔图。5．图注和图名按简图法写上图注、图名和放大倍数。6．注意事项：组织详图是细胞的平面图,但细胞内含物以及厚壁细胞应注意绘出立体感。1、制作合适的粉末装片2、选择有鉴别意义的特征，如实描绘。3、图版的排列设计、大小和放大倍数（以后介绍）4、修正铅笔图5、图注和图名6、注意事项：突出重点、大小适中。●粉末图绘制步骤四、实验练习：1.山药粉末淀粉粒＋甘油醋酸装片形状、脐点、层纹2.甘草粉末纤维＋水合氯醛试液▲形状、颜色●封藏剂使用练习●显微化学试剂使用练习1.山药粉末淀粉粒＋甘油醋酸装片形状、脐点、层纹＋稀碘液蓝黑色2.小茴香粉末糊粉粒＋稀甘油装片胚乳细胞中小颗粒＋碘试液棕色或棕黄色3.党参粉末菊糖＋稀甘油或水合氯醛试液形状、颜色＋-萘酚＋浓硫酸溶解，浓紫色●显微化学试剂使用练习4.大黄粉末草酸钙簇晶＋水合氯醛试液形状、颜色＋20％硫酸溶解、生成硫酸钙针晶5.穿心莲粉末碳酸钙结晶＋水合氯醛试液形状、颜色＋20％硫酸溶解、↑、生成硫酸钙针晶6.甘草粉末纤维、导管木化细胞壁间苯三酚＋浓盐酸红色7.知母粉末黏液细胞含针晶束＋95％乙醇形状、颜色＋水溶解，针晶束散出●切片练习牛膝切片纤维素细胞壁＋氯化锌碘试液蓝色或蓝紫色栓化细胞壁＋苏丹Ⅲ试液淡红色作业1、写出常用试剂的特点、使用范围和注意事项。2、记录实验观察结果和现象。3、总结显微绘图的步骤与注意点。