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2020/6/301白细胞分类计数（differentioncountofleukocyte）实验二谢海啸2020/6/302一、白细胞分类计数白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。2020/6/303•瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。瑞氏染色原理：2020/6/304•血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色，呈嗜酸性。•细胞核的核蛋白为酸性物质，故与碱性染料美兰结合，染成深蓝色或深紫红色，呈嗜碱性。•中性颗粒与美兰和伊红同时结合而染为淡紫红色，呈嗜中性。染色原理：2020/6/305[器材]•光学显微镜•推片，载玻片[试剂]•Wright染液Wright1.0g甲醇600ml•磷酸盐缓冲液（PH6.4～6.8）•香柏油[标本来源]•EDTA-K2抗凝全血2020/6/306[操作]1)推片：血膜厚薄适中，边缘整齐，外观呈舌形，头、体、尾分明。2）干燥3）标记1.制备血涂片2020/6/3072．染色1）准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。2）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液数滴，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置1min。3）加缓冲液：滴加缓冲液等量或多些，与上述染液充分混匀。4）染色：染色10min.5）冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。6）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。2020/6/308血涂片制作2020/6/309良好血涂片外观－羽（子弹头）状尾部－周边有空白－无划痕羽状尾部2020/6/3010不良血涂片2020/6/30112．瑞氏染色操作2020/6/30123．白细胞分类：先用低倍镜选择厚薄适宜，染色良好，细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。低倍镜下所见结果记录方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正2020/6/3013体尾交界处理想区域细胞重叠细胞太稀理想区域2020/6/3014各类成熟白细胞的形态学：中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径10～13µm，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。2020/6/3015嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。2020/6/3016嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。2020/6/3017淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于6～15µm之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径6～9µm，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。2020/6/3018单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为12～20µm，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。2020/6/3019正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne50%～70%Ly20%～40%Mo3%～8%Eo0.5%～5%Ba0%～1%[参考值]2020/6/30201.血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分明，无溶血、无空洞。2.很多因素影响涂片时血膜的厚度。血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。3.按一定顺序，有秩序地连续进行，避免选择视野。4.分类计数时应同时报告RBC和WBC的形态是否有异常。退化细胞不计数。[注意事项]2020/6/3021RBC异常2020/6/3022中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）单核细胞血小板2020/6/3023实验报告（注意学号）1原理2方法3各类细胞百分比报告4讨论