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生物统计学题目：双缩脲测蛋白含量院系：生命科学与技术系班级：11级生物技术一班学号：11141011021姓名：朱景晗指导老师：苏辉时间：2013年6月10日目录摘要………………………………………………1STRACT……………………………………………2一．实验原理…………………………………3二.实验试剂和器具…………………………3（二）．1试剂………………………………3（二）．2器具………………………………3三．实验步骤…………………………………4（三）．1酪蛋白的粗提……………………4（三）．2酪蛋白的纯化……………………4（三）．3准确称重，计算含量和得率……4四．标准曲线绘制………………………………4五．样液配制…………………………………4六．实验结果…………………………………5七．统计学分析…………………………………5（七）.1作出标准曲线……………………5（七）.2查取结果…………………………5（七）.3结果分析…………………………5（七）.4影响因素…………………………5八.参考文献…………………………………6九.致谢…………………………………………7摘要统计学是把数学的语言引入具体的科学研究领域，将所研究的问题抽象为数学问题的过程，是搜集、分析和解释数据的一门学科。生物统计学是数理统计在生物学研究中的应用，它是用数理统计的原理和方法来分析和解释生物界各种现象和试验调查资料的一门学科，属于应用统计学的一个分支。随着生命科学研究的深入发展和相关学科的融合与渗透，数学方法运用于生命科学的范围将会越来越广泛，越来越深入。数学在生命科学上的应用，总的来说主要包括三个方面：一是应用数学知识来解决生命科学上的实际问题，二是数学方法与生命科学融合交叉产生新的学科，三是从生命科学中提炼出数问题进行研究，进而发展新的数学理论。生物统计学作为生物数学的重要分支，在生命科学研究与探索的过程中发挥了巨大的推动作用。应用统计学方法，分析和解释其数量上的变化，以正确制定试验计划，科学地对实验结论进行分析，从而作出符合科学实际的推断。通过对生物实验与调查数据资料的客观分析，不仅能够将对生命科学问题推向深化和精确化，而且还能对其理论及其假说进行论证和说明。在这一过程中，生物统计为其研究和探索提供了重要的方法和工具。关键词：生物统计实验精确化ABSTRACTStatisticsisthelanguageofmathematicstointroducespecificfieldofscientificresearch,theresearchquestionwillbeabstractmathematicalproblemsintheprocess,istocollect,analyzeandinterpretdatainadiscipline.Biometricsisthemathematicalstatisticsinbiologicalresearchapplications,itistheprincipleofmathematicalstatisticsandmethodstoanalyzeandinterpretbiologicalphenomenaandexperimentalinvestigationofadatasubject,belongingtoabranchofappliedstatistics.Withthefurtherdevelopmentoflifesciencesandrelateddisciplinesfusionandpenetration,mathematicalmethodsappliedtoarangeoflifescienceswillbemoreextensive,morein-depth.Mathontheapplicationinthelifesciencesingeneralmainlyincludesthreeaspects:First,theapplicationofmathematicalknowledgetosolvepracticalproblemsonlifesciences,andsecond,mathematicalmethodsandlifesciencestogeneratenewcross-disciplinaryintegration,threefromlifetoextractthenumberofscientificresearchissues,andtodevelopnewmathematicaltheories.Biometricsasanimportantbranchofmathematicalbiology,lifescienceresearchandexplorationintheprocessplayedahugeroleinpromoting.Applicationofstatisticalmethodstoanalyzeandexplainthevariationinquantitytoproperlytestplan,thescientificanalysisontheexperimentalresults,inordertomakeascientificpracticalinference.Throughbiologicalexperimentsandobjectiveanalysisofsurveydata,notonlytopushthelifesciencesissueswilldeepenandprecise,butalsotodemonstrateitstheoryanditshypothesesandexplanations.Inthisprocess,itsstudyandexplorationofbiometricprovidesimportantmethodsandtools.UndoeditsKeywords:Biometric,experiment,precision一实验原理双缩脲（NH3ONHCONH3）子脲经180℃左右加热，放出1个分子氨后得到的产物在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过1个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。二实验试剂和器具（二）．1.试剂1.硫酸铜、酒石酸钾钠、NaOH、KI、酪蛋白2.双缩脲试剂：取0.75g硫酸铜和3.0g酒石酸钾钠溶于250ml蒸馏水，加入150ml10%NaOH溶液（可另加0.5gKI以防止Cu2+自动还原成一价氧化亚铜沉淀），用水稀释至500ml。此试剂可以长期保存。3.10mg/ml标准蛋白溶液：取1.0gNaOH加入500ml蒸馏水中，配成0.05mol/lNaOH溶液。用0.05mol/lNaOH溶液溶解0.25g酪蛋白，定容至25ml。4.待测样品液：可以用酪蛋白配制，也可用蛋清，牛血清蛋白。（二）．2．器具1、容量瓶2、试管3、移液管4、量筒5、烧杯6、胶头滴管7、洗耳球8、洗瓶9、分光光度计三实验步骤（三）．1.酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。（三）．2.酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。（三）．3.准确称重，计算含量和得率。含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%)四标准曲线的绘制加入物加入量（mL）012345标准液00.20.40.60.81.00.05mol/lNaOH1.00.80.60.40.20双缩脲试剂4.04.04.04.04.04.0五样品配制加入物加入量样液（mL）0.05mol/lNaOH双缩脲试剂0.05mol/lNaOH空白01.04.0稀释5倍牛血清蛋白1.004.0稀释10倍牛血清蛋白1.004.0室温下振荡均匀，显色5min后，用分光光度计于540nm测定各管吸光度。以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。六实验结果123455倍10倍OD值0.1090.1940.2810.3940.4860.3200.125七统计学分析（七）1．作出标准曲线（七）2.查取结果在标准曲线上差得：稀释5倍的为6.1mg，稀释10倍的为2.9mg，即计算得酪蛋白的含量为0.0305g/ml和0.029g/ml，计算平均值得0.0297g/ml（七）3.结果分析由于系统误差和偶然误差会造成数值上的不准确，可能会和理论值不相符。（七）4.影响因素蛋白质是含氮的有机高分子化合物，分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构(肽键)，碱性硫酸铜溶液中，蛋白质与硫酸铜的cu离子等络合物生成紫色络合物。八．参考文献1.沈阳贝朗制药有限公司钱峰张晓菲郝艳茹2.新乡学院生命科学与技术系孙国鹏2012.113.北京大学出版社实用生物统计李松岗4.生物统计附试验设计贵州农学院5.上海师范大学数学系概率统计教研组回归分析及其试验设计上海教育出版社1978九.致谢非常感谢有关文献的作者，让我完成了本篇论文的写作。通过相关文献的查阅以及其内容的解释和了解，使我对生物统计这门课程有了进一步的理解和掌握，也让我对一些统计方法有了很熟悉的认识。生物实验要求具有实用性、先进性和创新性，安排实验时，需要对实验的预期结果及其再生产和科研中的作用做到心中有数，首先要抓住当前生产和科研中急需解决的问题作为试验项目。同时要有预见性，从发展的观点出发，适当照顾到长远和在不久的将来可能出现的问题。因此要对实验有一个清晰的认识和了解，使用正确的研究方法，作出正确是试验安排。一个实验的成功与失败在于试验的设计和试验的操作过程，因此为了减小试验误差，在试验设计和操作过程中要小心谨慎，按正确的要求和方法进行试验。按照正确的步骤重复几次，求得平均值。