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微生物的实验室培养第二课时——纯化大肠杆菌12温故而知新一、培养基定义成分种类二、无菌技术方法内容消毒灭菌操作空间、操作者的手培养器皿、接种用具、培养基在酒精灯火焰附近操作避免已灭菌的材料用具与周围物品接触温故而知新温故而知新温故而知新粉状硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖10g（NH）2SO40.4gH2O100mLMgSO49.25gCaCI20.5g①++++-+++②+++-++++③++++++++3巩固检测巩固检测巩固检测1、甲、乙、丙是三种微生物，下表①、②、③是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在③中正常生长繁殖；甲能在①中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在②中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是：A、甲乙丙都是异养微生物B、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物4巩固检测巩固检测巩固检测2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是：①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A、⑤③②①④⑥B、①②③④⑤⑥C、⑥②③④①⑤D、③④②①⑥⑤5新课：新课：三、纯化大肠杆菌实验目的：接种大肠杆菌于培养基上，经过培养使其形成由单个细胞繁殖形成的子细胞群体，即菌落。实验过程：(知识网络）配制培养基接种大肠杆菌恒温培养箱中培养（12—24h）结果分析与评价计算→称量→溶化→灭菌→倒平板调PH→分装→包扎菌种保藏平板划线稀释涂布平板未接种的培养（对照组）接种的培养（实验组）培养基配制成功与否？接种操作成功与否？配制培养基①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。6倒平板过程总结：配制培养基7分析：1、培养基高压蒸汽灭菌后，需冷却到____℃左右时，才能倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？_____________________________________________________________2、操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是：_____________________________________________________________3、将平板倒置的目的是：_________________________________________________________________________________________________________________________4、在倒平板过程中，将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？_____________________________________________________________50感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手，就可以倒平板了防止瓶口微生物污染培养基既可以使培养基表面冷凝的水分更好的挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染不能，因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生。平板划线接种原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。8平板划线接种9灼烧接种环冷却划线（第一区域）蘸取菌液灼烧接种环冷却划线（第二区域）灼烧接种环冷却划线（第三区域）灼烧接种环冷却划线（第四区域）灼烧接种环冷却划线（第五区域）灼烧接种环平板倒置放置培养10平板划线接种第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域平板划线接种11问题2：每次划线前灼烧接种环的目的：问题3：划线结束后灼烧接种环的目的：答案：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基答案：杀死上次划线结束后残留的菌种答案：及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和操作者。问题1：第一步灼烧接种环的目的：稀释涂布平板接种原理：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。12稀释涂布平板接种131、梯度稀释2、涂布平板结果分析与评价1、培养基制备成功的标准142、接种操作成功的标准如果未接种的培养基在恒温箱中保温1~2天后无菌落生长，说明培养基配制是成功的，否则实验失败，需重新配制。如果培养基上生长的菌落颜色、性状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明操作是否和要求的。如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，实验失败，需分析原因，再次实验。菌种的保藏（了解）1、临时保藏：适用于频繁使用的菌种。将菌种接种到固体斜面培养基，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管置于4℃的冰箱中保藏2、甘油冷冻管保藏：适用于需长期保存的菌种。在3mL甘油瓶中，装入1mL甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀，放-20℃的冷冻箱中保藏15本节内容结束下节再见！16纯化大肠杆菌（重点内容）17微生物实验室培养（知识点总结）18；日均线jch36kcf是知道，不知道就是不知道。”少年们很高兴把学堂上夫子的教训搬到这里来用，“有什么不是很知道的！你肚子里有鬼！”“有个屁鬼！”明蕙二舅舅炸了，“你们这帮小子找死是吧？”“哈呀呀！”少年们大乐，“找的就是你们的鬼！”特高兴有个拔剑决斗的机会。值班的衙役们望过来了，瞧见兵刃的话，抡链子，锁人，两边都锁上，关回去，叫他们家里拿钱来赎人，节下，赎金翻倍，还要备酒菜……“误会啊误会啊！”明蕙大舅舅冷汗涔涔，“我们，完全不知道五少爷怎么回事儿。我们，就是因为没了家里姑娘，穿个孝。”“又不是没了你妈，”少年里还有人嘴巴忒毒，“你穿的哪门子孝！”“你！”明蕙二舅舅要炸了。明蕙大舅舅硬把他压下去，对着蓄势待发的衙役陪笑：“误会，误会！”衙役看他这儿没火苗，就转而盯着少年们。只有一方滋事的话，逮捕单方也不是不可以，这些少年家里，有的还是凑得出几个钱的……“误会。”少年们哼哼，并且很快散去了。衙役们也无趣的回到各自岗位上。这一番折腾，苏家人已经爬到山阶的一半了，刘家人看着明蕙大舅舅：这会儿咋办？来都来了，又不能退回去。她大舅舅道：“再跟。”于是又跟上去。两个出嫁没多久的小媳妇，刚从庙里上完香，下阶来，经过刘家人身边，看他们一看，笑着咭咭咕咕，俨然也夹着些：“不要脸……逼死了自家姑娘，来讹钱”之类的话。明蕙大舅舅盯着她们，她们像受惊的小母鸡似的摇摇摆摆下去了，先前那些泼皮少年们没走远，被她们小母鸡一样又圆又撅的屁股吸引住了，追着她们后头撩拨几句风话，激起她们咯咯的蠢笑。有个少年斜起一边嘴角，向刘家人瞄过来一眼，明蕙大舅舅赶紧低下头，心里透凉透凉的，像摊得太薄、凝都凝不起来的粥，怎么这么不得劲儿。问苏家要这点子钱，怎么就这么难呢……山阶仄仄向上，一步一声佛唱，刘家人越走越没意思，有的大局观和团结精神不强的，就悄悄把乞丐似的旧麻衣扯了下来、破白布丧带子也解下来。再走几步，就悄悄溜了，过他们的年去。大雄宝殿在望，两个大香炉喷着馥郁的香烟，兜售香烛的叫卖声一发嘹亮，明蕙大舅舅回头，看身后稀稀拉拉跟的已经不剩几个人，叹了口气，望望寺内。苏家人早被尼姑殷勤备至的接了进去，白胡子的老苍头劝宣道：“施主，这是尼寺，成年男子有所不便，上香请只在外殿，勿再进入。”慈恩寺最早前，是男寺，寺中都是僧人，连一只母的狗都不放入内，也算齐整，可一城不容二寺，临江寺因那振风塔，名声越来越响，慈恩寺就渐渐端敝了，竟至香炉蒙尘、佛像脱漆的地步，有几个好样儿的尼姑，就把这寺盘下来，以女眷为主攻对象，打下江山，把一座半山腰的破败小寺，变成台阶严整、金像威严