胚胎移植课件

2020/7/31胚胎移植技术2020/7/32一、胚胎移植概述1.胚胎移植的概念2.胚胎移植技术的发展简史3.胚胎移植在畜牧生产上的意义2020/7/331.胚胎移植的概念胚胎移植（embryotransfer,ET）也称受精卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发育成为新个体，所以又称之为人工授胎或借腹怀胎。•提供胚胎的个体称为------供体（donor）•接受胚胎的个体称为------受体（recipient）2020/7/342.胚胎移植技术的发展简史•2.1初始阶段•1890-1900W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔2只。•2.2初级阶段•1900-1950主要由英美科学家在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右。2020/7/35•2.3发展阶段•1950-1970日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功。胚胎移植成功率达70-80%。2020/7/36•2.4实用化初始阶段1970-1980加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英）。•2.5实用化研究阶段1982-大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广泛开展。克隆羊诞生。2020/7/373.胚胎移植在畜牧生产上的意义1.提高优良母畜繁殖力,加快优良品种改良和动物育种步伐；2.诱导双胎；3.濒危动物的拯救与保护。将胚胎移入同种或近缘种生殖道内，以获得存活动物；4.保存遗传资源、胚胎库；5.胚胎移植是胚胎工程操作的重要步骤。2020/7/38二、胚胎移植的生理学基础与基本原则1.胚胎移植的生理学基础2.胚胎移植的基本原则2020/7/391.胚胎移植的生理学基础•成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达十数个；•每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育；•早期胚胎处于游离状态；•胚胎发育不存在免疫问题；•胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组联系；•胚胎的遗传性不受受体的影响；2020/7/3102.胚胎移植的基本原则①种的一致性：供体和受体属于相同的种②动物生理状态的一致性：黄体期③解剖部位的一致性：子宫角或者输卵管2020/7/311胚胎移植原则图解2020/7/312三、胚胎移植的技术程序1、供受体的选择与饲养管理供体–遗传品质优秀–繁殖性能良好–营养状况好，体格健壮–无疾病2020/7/313三、胚胎移植的技术程序受体–土种动物或者本地品种–体格接近，营养良好–无疾病–繁殖生理特点与供体相似，比如多周期发情移植前2个月进行编号和补饲2020/7/3142.供体超数排卵SuperovulationorMultipleovulation超排应用的主要激素–促性腺激素FSH（中科院动物所宁波加拿大日本）PMSG（eCG）及APMSG（抗PMSG）LHhCG–GnRH（促排3号）–P4–PG（氯前列烯醇Cloprostenol，ICI-80996）三、胚胎移植的技术程序2020/7/315•超排方法：在发情周期的一定时期，用PMSG或FSH促进卵泡发育，于发情开始后12-16h和20-24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射hCG或LH，以便排出多数卵子。2020/7/3162020/7/317各种动物的超排程序牛：供体发情后913d中的任何一天开始（日本进口FSH为9~11天）连续4d（8次）递减注射FSH，在FSH注射结束前1d，上、下午分别注射氯前列烯醇0.6mg和0.4mg绵羊：FSH剂量（150300IU）周期为12天，开始注射，6次3d，递减，在第4天注射FSH时，肌肉注射氯前列烯醇0.2mg。2020/7/318山羊：减量法6次注射3d，100IU×1＋75IU×1＋50IU×3＋25IU=350IU或100＋50×4＋25×1=325IU，首次注射后36h撤栓，并在36h和48h分别注射PG0.1mg。各种动物的超排程序2020/7/319超排效果好的卵巢黄体2020/7/320超排效果不好的卵巢黄体2020/7/3213.受体的同期发情对母畜进行同期发情一般采取两种手段：–一种是延长黄体期：最常用的方法是进行孕激素处理。常用的有孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、炔诺酮、氯地孕酮等。处理方法是皮下埋植、阴道栓、口服和肌肉注射等。–另一种方法是缩短黄体期的方法有①注射促性腺激素②注射促性腺激素释放激素③注射前列腺素等。2020/7/322同期发情的方法1.孕激素阴道栓法孕激素可通过口服、注射、皮下埋植和阴道放置孕激素缓慢释放装置等方法。皮下埋植或阴道放置缓慢释放装置使用方便易行、效果可靠、成本低廉，尤其是阴道栓法。2.前列腺素及其类似物处理法对有功能性黄体的母畜于注射后4896h内发情：一次PG法、二次PG法2020/7/3234、供体配种•人工授精•自然交配配种次数应比平常多12次2020/7/3245、胚胎回收与鉴定•收集胚胎就是在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植，亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采卵。采卵的效果与采集时间、方法和检卵技术均有关系。（1）采卵时间：一般将配种当日定为0天，由配种后第二天开始计算采卵天数。根据采集目的不同，决定在第几天采卵。（2）采卵方法：有手术法和非手术法两种。在大家畜基本上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，一般收集卵子数只能相当于黄体数的40～80％。2020/7/325•第一种由宫管结合部冲向输卵管。本法冲卵率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、小动物均可采用。•第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术后常造成宫角尖端或输卵管粘连。2020/7/326•第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基部。本法用于发情5天以后收集子宫内的卵，其收集数量比A,B法略少，易引起子宫粘连。•冲卵液为杜氏PBS,用量:第一、第二两种方法用5-l0ml，第三种方法用10-20ml。2020/7/327•Sμgie创造了一种带有气球的非手术采卵器，可由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。Folley和Stewart又相继改进，设计出三通路（进气、进液、回液）导管采卵器（附图4），使用更加方便有效，能够从同一供体反复收集卵子。•冲卵液的用量一般为500ml，装入输液瓶内，每次放出30-60m1，反复冲洗子宫角，并回收到集卵杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子宫角。2020/7/3282020/7/3292020/7/330胚胎的检查•将冲卵液回收之后，尽快置于放大10-15倍的实体显微镜下，检查收集到的卵数，并用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放大40-200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常卵（附图5）。形态不正常者（附图6）及发育延迟2天以上的卵，都不可用于移植。2020/7/331显微镜下的胚胎2020/7/3322020/7/3332020/7/334胚胎鉴定及短期保存胚胎质量鉴定在6080倍立体显微镜下。超排处理后，卵巢内的卵泡并非同时排卵，加之超排处理使生殖道内的内分泌环境改变，回收到的胚胎发育程度发生变化。有的卵子可能未受精或受精后退化。这就需要对胚胎进行形态学鉴定，选出形态比较正常的胚胎进行移植。胚胎分级A、B、C、D优质（Excellent）优良胚（Good）普通胚（Fair）不良（Poor）胚胎的短期保存常温保存（2225℃）和低温保存2020/7/335显微镜下的胚胎2020/7/3366.给受体移植胚胎移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。移植前受体准备受体移植前应证实卵巢上有发育良好的功能性黄体。在羊，有条件时可以进行腹腔镜检查，确定黄体数量、质量和在哪一侧；受体在术前要饥饿1224h术部在术前1d剃毛。牛在进行非手术移植前，通过直肠检查确定是否有黄体和黄体的位置及大小。手术法移植输卵管子宫非手术法移植牛现在一般采用经子宫颈移植，以前曾采用绕过子宫颈移植法和Testart移植法，现已基本不采用。羊需要腹腔镜和配套的操作器械2020/7/337动科072班李振