分析方法验证第二部分

ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证徐禾丰第二部分:实验设计与操作第-2-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰1.0－讲座目的•掌握验证试验设计•掌握验证试验操作•了解确定接受标准原则第-3-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.0－精密度•概念•容易混淆的精密度中术语•重复性•中间精密度•推荐重复性接受标准•AOAC浓度与精密度关系•重现性第-4-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.1－概念1:精密度ICH-Q2定义:•分析方法的精密度指在规定条件下,对均质样品,多次取样进行一系列检测结果的接近程度(离散程度)第-5-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.2－容易混淆的精密度中术语•仪器重复性•相同人员,仪器,日期,标准液•方法重复性•相同人员,仪器,日期,重新配制标准液•中间精密度•不同日期,不同分析人员,不同仪器第-6-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3－重复性•概念•推荐重复性测定方法第-7-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3.1－概念2:重复性ICH-Q2定义:•重复性是指在同样的操作条件下,较短时间间隔的精密度第-8-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3.2－推荐重复性测定方法•在方法规定的线性范围内重复测定•如3个浓度,每个浓度3次•或100%的测试浓度,测定六次•记录每次测定各组分响应•计算各响应值与平均值之间相对标准偏差第-9-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3.2.1－概念3:系统重复性•相同条件下,同一分析人员对同一样品溶液多次测试结果的接近程度第-10-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3.2.2－系统重复性实验•取同一均匀标准样品溶液•连续重复测定六次•记录每次测定各组分响应•计算各响应值与平均值之间相对标准偏差第-11-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3.2.3－概念4:方法重复性•相同条件下,同一个分析人员对同一个均匀样品,多次取样测定所得结果的接近程度第-12-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.3.2.4－方法重复性实验•取同一批号均匀样品•按照分析方法规定至少称量出六份•按含量测定方法测定每一份样品含量•计算每一次测定的含量与平均含量之间的相对标准偏差第-13-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.4－中间精密度•概念•推荐中间精密度测定方法第-14-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.4.1－概念5:中间精密度ICH-Q2定义•中间精密度指的是试验室内部条件改变,如:不同日,不同分析者,不同仪器等情况下的精密度第-15-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.4.2－推荐中间精密度测定方法•应确定随机事件对分析方法精密度的影响,如不同日期,不同分析人员,不同仪器等等•没有必要一一考察•用均匀设计,或正交设计方法第-16-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.5－推荐重复性接受标准•系统重复性•S/N1000,RSD1%•1000S/N100,RSD2%•100S/N10,RSD4%•S/N10,RSD8%•方法重复性•测定结果的相对标准偏差•仪器分析小于2%•容量分析小于0.3%第-17-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.6－AOAC浓度与精密度关系301ppb10-90.00000012110ppb10-80.00000115100ppb10-70.00001111ppm10-60.00017.310ppm10-50.0015.3100ppm10-40.013.70.1%10-30.12.81%10-212.710%10-1101.3100%1100RSD(%)单位比率浓度(%)第-18-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.7－重现性•概念•什么时候需要作重现性?第-19-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.7.1－概念6:重现性ICH-Q2定义:•重现性指不同试验室之间的精密度第-20-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰2.7.2－什么时候需要作重现性?•是比较实验室间的差异•当一个方法要升级到法规方法时,需要做这个工作第-21-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.0－准确度•概念•原料药准确度测定•制剂产品准确度测定•杂质准确度测定•推荐准确度测定方法•推荐准确度测定接受标准•AOAC浓度与回收率关系第-22-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.1－概念7:准确度ICH-Q2定义•分析方法的准确性指的是真实值或认可的参考值与测量值之间相近程度第-23-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.2－原料药准确度测定•用该方法分析已知纯度的分析物•该方法的分析结果与成熟的分析方法相比较,该成熟方法准确度是已知的•在精密度,线性,专属性建立后,进行推论第-24-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.3－制剂准确度测定•用该方法去测按处方量制成的混合物(加入已知量被测物)•在制剂中加入已知量主药或与另一成熟方法比较•在精密度,线性和专属性建立后得出第-25-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.4－杂质准确度测定•在样品(原料/制剂)中加入已知量的杂质•无法得到杂质/降解物的,与采用其他方法测得的结果比较,可以使用原料的响应值第-26-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.5－推荐准确度测定方法•在六个空白样品中,分别加入已知浓度的样品(浓度范围为含量测定浓度的80%-120%)•计算该方法的百分回收率第-27-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.6－推荐准确度测定接受标准•测定得到的主品的百分回收率与理论回收率100%间的相对标准偏差不得大于方法重复性相对标准偏差的4倍第-28-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰3.7－AOAC浓度与回收率关系40-1201ppb10-90.000000160-11510ppb10-80.00000180-110100ppb10-70.0000180-1101ppm10-60.000180-11010ppm10-50.00190-107100ppm10-40.0195-1050.1%10-30.197-1031%10-2198-10210%10-11098-102100%1100平均回收率(%)单位比率浓度(%)第-29-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.0－检测限•概念•直观法•信噪比法•标准偏差和斜率法•推荐检测限测定方法第-30-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.1－概念8:检测限ICH-Q2定义•检测限度指的是样品中的被分析物质能够被检测到的最低量,但不一定要准确定量第-31-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.2－直观法•直观评价可以用于非仪器分析方法,也可用于仪器分析方法•检测限的测定是通过对一系列已知浓度被分析物的样品进行分析,并以能准确(或被可靠)地检测被测物的最小量或最低浓度来建立第-32-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.3－信噪比法•用于能显示基线噪音的分析方法•把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较•算出能被可靠地检测出的最低浓度或量•一般以信噪比为3:1或2:1时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限第-33-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.4－标准偏差和斜率法•根据响应值的标准偏差和斜率•检测限度(DL)=3.3σ/s•σ:响应值的标准偏差(通过空白样品测背景响应值或Y轴截距)•s:校正曲线的斜率(通过被测物的校正曲线求得)第-34-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰4.5－推荐检测限测定方法•在最灵敏的仪器状态下•测定至少四个空白样品•洗脱时间需覆盖整个样品中所有组分的流出•计算平均噪声水平•然后按信噪比大于2而小于6配制所有组分的样品溶液•每个样品进样三次•计算该组分的最小检测限第-35-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰5.0－定量限•概念•推荐定量限测定方法第-36-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰5.1－概念9:定量限ICH-Q2定义:•某种分析方法的定量限度是指具有合适准确性和精密度的条件下,能够定量测定分析组分的最低限量。它是样品中含量低的化合物定量分析的参数,特别适用于杂质和(或)降解产物的测定第-37-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰5.2－推荐定量限测定方法•按检测限方法测定仪器的平均噪声•然后按信噪比等于10.0±0.5配制样品溶液•连续进样三次•计算组分的最小定量限第-38-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.0－耐用性•概念•变动因素•色谱分析中耐用性项目第-39-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.1－概念10:耐用性ICH-Q2定义•分析方法的耐用性是指试验参数适当地发生细小改变时,测量能力保持不受影响,可用于说明正常使用时的可靠性第-40-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.2－变动因素•典型液相色谱法变动因素•流动相的组成•pH值•不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱•柱温•流速等第-41-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.2－变动因素•典型气相色谱法变动因素•载气•流速•不同厂牌或批号的色谱柱•固定相•担体•柱温•进样口•检测器温度第-42-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰6.3－色谱分析中耐用性项目流动相组成HPLC不同的柱温度流量样品制备操作所有分析提取时间变量分析方法流量温度不同的柱GC第-43-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.0－线性度•概念•线性范围•推荐线性度测定方法•推荐线性度测定接受标准第-44-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.1－概念11:线性度ICH-Q2定义•分析方法的线性是指在给定的范围内检测结果与样品中被分析物的浓度(含量)成比例关系的能力第-45-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.2－概念12:线性范围ICH-Q2定义•分析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度(量)和较低浓度(量)之间的区间,并已证实区间内,该方法具有合适的准确性,精密度,线性第-46-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.3－推荐线性度测定方法•在含量测定浓度的70%-130%或50%-150%均匀选择至少六个不同的浓度点•每一个尝试至少需测定四次•记录各对应浓度下的相应响应值第-47-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰7.2－推荐线性度测定接受标准•相关系数应当在0.999与1.000之间•经线性回归处理•其截距不应明显地偏离零点第-48-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.0－专属性•概念•推荐专属性测定方法•降解研究内容第-49-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.1－概念13:专属性ICH-Q2定义•专属性是指在一些可能存在的组分,如杂质,降解物,基质等存在时,对被分析物准确可靠测定的能力第-50-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.1－推荐专属性测定方法•按照规定的标准或参考文献的色谱分析方法•分别将原料药,中间体,可得到杂质,原料,中间体,前体及降解产物的样品分别进样•记录各物质的相对保留时间•确保各样品之间的峰可以分开•至少确保其他物质的峰与主峰分开第-51-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.2－概念14:稳定性指示性分析方法FDA定义•稳定性指示性分析方法是一种验证了的定量分析方法,其能够测定原料药或药品在有关性质的变化•一个稳定性指示性分析能在没有降解产物,工艺杂质,辅助材料或其他的杂质干扰下,准确地对活性成分进行测量第-52-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.3－降解研究目的•降解途径•影响因素•确定包装•分析方法专属性第-53-页人用药注册技术要求国际协调会议徐禾丰8.4－降解研究内容•光•酸•碱•氧化•还原•高热•高湿ValidationofAnalyticalProcedure分析方法验证徐禾丰第二部分:实验设计与操作