搜索
中国农业大学学报 ２００９，１４（５）：８６９２ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ绵羊微卫星３００犝和犉犲犮犅基因的多态及连锁分析张宝云１，２ 储明星１ 王凭青２ 方丽１ 狄冉１（１．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所／农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室，北京１００１９３；２．重庆大学生物工程学院，重庆４０００３０）摘 要 旨在阐明微卫星座位３００犝与小尾寒羊高繁殖力主效基因犉犲犮犅之间的连锁关系，为绵羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。分析与绵羊高繁殖力主效基因犉犲犮犅紧密连锁的微卫星座位３００犝在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力绵羊品种（特克塞尔和多赛特）中的遗传多态性，同时探讨该微卫星座位与小尾寒羊犉犲犮犅基因的连锁不平衡关系。微卫星座位３００犝在４个绵羊品种的４７２个个体中共检测到１４个等位基因和５２种基因型，最小等位基因为１２４ｂｐ，最大等位基因为１６２ｂｐ；小尾寒羊（狀＝３１６）、湖羊（狀＝６０）、特克塞尔（狀＝４８）、多赛特（狀＝４８）和小尾寒羊的犅犅型（狀＝１５６）、犅＋型（狀＝１２４）、＋＋型（狀＝３６）以及湖羊的犅犅型（狀＝４８）、犅＋型（狀＝１２）群体中优势等位基因分别是１６０、１４８、１６０、１５０、１６０、１６０、１３８以及１４８和１４８ｂｐ，其频率分别为０．２９４、０．９５８、０．７５０、０．２７１、０．３２７、０．２８２、０．２３６以及０．９５９和０．９５８。连锁不平衡分析显示小尾寒羊犉犲犮犅基因犅等位基因与３００犝座位１６０ｂｐ等位基因之间存在一定的连锁不平衡（犇′＝０．３４１），而＋等位基因与３００犝座位１３８ｂｐ等位基因之间存在一定的连锁不平衡（犇′＝０．２７５）。本研究结果表明微卫星座位３００犝只能在一定程度上反映犉犲犮犅座位信息。关键词 绵羊；多羔性；犉犲犮犅基因；３００犝；连锁不平衡中图分类号 Ｓ８２６．２ 文章编号 １００７４３３３（２００９）０５００８６０７ 文献标志码 Ａ收稿日期：２００９０２１３基金项目：国家科技支撑计划（２００８ＢＡＤＢ２Ｂ０１，２００６ＢＡＤ０１Ａ１１，２００６ＢＡＤ１３Ｂ０８）；国家科技基础条件平台建设计划（２００５ＤＫＡ２１１０１）；新疆维吾尔自治区科技支疆项目（２００８９１１０２）；国家８６３计划（２００５ＡＡ２１１０８０）；国家９７３计划（２００６ＣＢ１０２１０５）；中国农业科学院北京畜牧兽医研究所基本科研业务费青年基金项目（２００９ｑｎ２）；中国农业科学院首批优秀科技创新团队专项资助第一作者：张宝云，硕士研究生，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｂａｏｙｕｎ４１８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ通讯作者：储明星，研究员，博士生导师，主要从事分子数量遗传学研究，Ｅｍａｉｌ：ｍｘｃｈｕ＠２６３．ｎｅｔＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃａｎｄｌｉｎｋａｇｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ３００犝ａｎｄ犉犲犮犅ｇｅｎｅｉｎｓｈｅｅｐＺＨＡＮＧＢａｏｙｕｎ１，２，ＣＨＵＭｉｎｇｘｉｎｇ１，ＷＡＮＧＰｉｎｇｑｉｎｇ２，ＦＡＮＧＬｉ１，ＤＩＲａｎ１（１．犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犉犪狉犿犃狀犻犿犪犾犌犲狀犲狋犻犮犚犲狊狅狌狉犮犲狊犪狀犱犝狋犻犾犻狕犪狋犻狅狀狅犳犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲／犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲，犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊，犅犲犻犼犻狀犵１００１９３，犆犺犻狀犪；２．犅犻狅犲狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犆狅犾犾犲犵犲，犆犺狅狀犵狇犻狀犵犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犆犺狅狀犵狇犻狀犵４０００３０，犆犺犻狀犪）Ａｂｓｔｒａｃｔ 犜犺犲狅犫犼犲犮狋犻狏犲狊狅犳狋犺犲狆狉犲狊犲狀狋狊狋狌犱狔狑犲狉犲狋狅犻狀狏犲狊狋犻犵犪狋犲狋犺犲狉犲犾犪狋犻狅狀狊犺犻狆犫犲狋狑犲犲狀狋犺犲犿犻犮狉狅狊犪狋犲犾犾犻狋犲犾狅犮狌狊３００犝犪狀犱狋犺犲犉犲犮犅犵犲狀犲狅犳犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀狊犺犲犲狆，犪狀犱狆狉狅狏犻犱犲犪狊犮犻犲狀狋犻犳犻犮犫犪狊犻狊犳狅狉犿犪狉犽犲狉犪狊狊犻狊狋犲犱狊犲犾犲犮狋犻狅狀犳狅狉犺犻犵犺狆狉狅犾犻犳犻犮犪犮狔犻狀狊犺犲犲狆．犌犲狀犲狋犻犮狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿狊狅犳犿犻犮狉狅狊犪狋犲犾犾犻狋犲犾狅犮狌狊３００犝，狑犺犻犮犺狑犪狊犮犾狅狊犲犾狔犾犻狀犽犲犱狋狅狋犺犲狅狏犻狀犲犳犲犮狌狀犱犻狋狔犵犲狀犲犉犲犮犅，狑犲狉犲犱犲狋犲犮狋犲犱犻狀狆狉狅犾犻犳犻犮（犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀犪狀犱犎狌狊犺犲犲狆）犪狀犱狀狅狀狆狉狅犾犻犳犻犮犫狉犲犲犱狊狅犳狊犺犲犲狆（犜犲狓犲犾犪狀犱犇狅狉狊犲狋）．犜犺犲犾犻狀犽犪犵犲犱犻狊犲狇狌犻犾犻犫狉犻狌犿犫犲狋狑犲犲狀３００犝犾狅犮狌狊犪狀犱犉犲犮犅犵犲狀犲狅犳狋犺犲犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀狊犺犲犲狆狑犪狊犪犾狊狅犪狀犪犾狔狕犲犱．犜犺犲狉犲狑犲狉犲１４犪犾犾犲犾犲狊狏犪狉犻犲犱犳狉狅犿１２４犫狆狋狅１６２犫狆，犪狀犱５２犵犲狀狅狋狔狆犲狊犱犲狋犲犮狋犲犱犪狋３００犝犾狅犮狌狊犻狀４７２犻狀犱犻狏犻犱狌犪犾狊，犻狀犮犾狌犱犻狀犵犳狅狌狉犱犻犳犳犲狉犲狀狋犫狉犲犲犱狊．犜犺犲狆狉犲狆狅狀犱犲狉犪狀狋犪犾犾犲犾犲狊狑犲狉犲１６０，１４８，１６０，１５０，１６０，１６０，１３８，１４８，１４８犫狆，犪狀犱狋犺犲犳狉犲狇狌犲狀犮犻犲狊狑犲狉犲０．２９４，０．９５８，０．７５０，０．２７１，０．３２７，０．２８２，０．２３６，０．９５９，０．９５８犻狀犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀（狀＝３１６），犎狌（狀＝６０），犜犲狓犲犾（狀＝４８），犇狅狉狊犲狋（狀＝４８），犅犅犵狉狅狌狆（狀＝１５６）狅犳狋犺犲犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀，犅＋犵狉狅狌狆（狀＝１２４）狅犳狋犺犲犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀，＋＋犵狉狅狌狆（狀＝３６）狅犳狋犺犲犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀，犅犅犵狉狅狌狆（狀＝４８）狅犳狋犺犲犎狌，犅＋犵狉狅狌狆（狀＝１２）狅犳狋犺犲犎狌狊犺犲犲狆，狉犲狊狆犲犮狋犻狏犲犾狔．犐狀犛犿犪犾犾犜犪犻犾犎犪狀狊犺犲犲狆，狋犺犲犪狀犪犾狔狊犻狊犻狀犱犻犮犪狋犲犱狋犺犪狋狋犺犲狉犲狑犪狊犪犮犲狉狋犪犻狀犾犻狀犽犪犵犲 第５期张宝云等：绵羊微卫星３００犝和犉犲犮犅基因的多态及连锁分析犱犻狊犲狇狌犻犾犻犫狉犻狌犿犫犲狋狑犲犲狀１６０犫狆犪犾犾犲犾犲狅犳３００犝犾狅犮狌狊犪狀犱犅犪犾犾犲犾犲狅犳犉犲犮犅犵犲狀犲（犇′＝０．３４１），犪狀犱犪犮犲狉狋犪犻狀犾犻狀犽犪犵犲犱犻狊犲狇狌犻犾犻犫狉犻狌犿犫犲狋狑犲犲狀１３８犫狆犪犾犾犲犾犲狅犳３００犝犾狅犮狌狊犪狀犱＋犪犾犾犲犾犲狅犳犉犲犮犅犵犲狀犲（犇′＝０．２７５）．犜犺犲狊犲狉犲狊狌犾狋狊狆狉犲犾犻犿犻狀犪狉犻犾狔狊犺狅狑犲犱狋犺犪狋３００犝犮狅狌犾犱狉犲犳犾犲犮狋狋犺犲犻狀犳狅狉犿犪狋犻狅狀狅犳犉犲犮犅犵犲狀犲犻狀狊犺犲犲狆狋狅犪犮犲狉狋犪犻狀犲狓狋犲狀狋．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ 狊犺犲犲狆；狆狉狅犾犻犳犻犮犪犮狔；犉犲犮犅犵犲狀犲；３００犝；ｌｉｎｋａｇｅｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ 家畜的产仔（羔）数是经济价值十分重要的数量性状。绵羊产羔数受性别和年龄的限制，而且是遗传力很低的数量性状，其遗传力只有０．１左右，因此难以用常规的育种技术来改良产羔数性状。标记辅助选择能够通过影响选择的时间、选择的强度和准确性从而极大地提高这类低遗传力性状的选择功效，而找到与这些数量性状基因座相连锁的分子遗传标记，则是实现标记辅助选择的先决条件。犅狅狅狉狅狅犾犪基因是在绵羊中识别出的高繁殖力的第一个主效基因，被绵羊和山羊遗传命名委员会定名为犉犲犮犅（即Ｆｅｃ为ｆｅｃｕｎｄｉｔｙ，Ｂ为Ｂｏｏｒｏｏｌａ）［１］。犉犲犮犅基因效应对排卵数是加性的，对产羔数是部分显性的［２５］。犉犲犮犅基因与微卫星座位犗犪狉犃犈１０１和犗犪狉犎犎５５紧密连锁，遗传距离分别为１３和２０ｃＭ［６］。２００１年该基因又被定位于该区域微卫星座位４７１犝和３００犝之间小于１ｃＭ的区间内，并在犅狅狅狉狅狅犾犪绵羊的回交群体中检测到３００犝的１２个等位基因［１］。小尾寒羊犉犲犮犅基因与微卫星标记犗犪狉犑犔３６的连锁关系报道显示犉犲犮犅基因Ｂ等位基因与犗犪狉犑犔３６仍然存在重组，但其研究群体仅为７２只犅犅型的小尾寒羊，具有一定局限性［７］。绵羊６号染色体上与犉犲犮犅基因紧密连锁的微卫星座位犗犪狉犃犈１０１、犅犕１３２９、犅犕１４３和犗犪狉犎犎５５与小尾寒羊产羔性状的相关性研究发现犗犪狉犃犈１０１座位１０３和１１３ｂｐ等位基因、犗犪狉犃犈１０１座位１０３／１１３ｂｐ基因型、犅犕１４３座位１０６／１１８ｂｐ基因型、犅犕１３２９座位１７０ｂｐ等位基因与小尾寒羊产羔数呈显著正相关，犗犪狉犃犈１０１座位１０１和１１１ｂｐ等位基因、犅犕１３２９座位１６８和１８６ｂｐ、犅犕１４３座位１１６ｂｐ与其产羔数呈显著负相关［８］。绵羊６号染色体上微卫星座位犔犛犆犞０４３、犅犕犛２５０８、犌犆１０１、３００犝、犅狌犾犵犲５和４７１犝在湖羊中的遗传多样性及其与产羔数的关系表明犔犛犆犞０４３座位１０７／１２３ｂｐ基因型和犅犕犛２５０８座位携带１５４ｂｐ等位基因的湖羊产羔数明显高于其他基因型，犅犕犛２５０８座位１７０／１７０ｂｐ基因型产羔数均低于该座位其他基因型（犘＜０．０５），其他座位各基因型间产羔数均无显著差异［９］。然而，国内绵羊品种中微卫星座位３００犝与绵羊多羔主效基因犉犲犮犅之间的连锁关系还未被阐明。小尾寒羊和湖羊都具有常年发情、性早熟和多羔特性，是我国独特的遗传资源。据《中国羊品种志》记载，山东小尾寒羊平均产活羔数为２．６１只，湖羊平均产活羔数为２．２９只［１０］。而多赛特羊平均产活羔数为１．４５只，特克塞尔羊平均产活羔数为１．４１只［１１］。本研究旨在分析微卫星座位３００犝与犉犲犮犅基因的连锁关系，为绵羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。１ 材料与方法１．１ 实验材料３１６只小尾寒羊母羊血样采自山东省嘉祥县种羊场、北京市门头沟区种羊场、北京市昌平区北京盛世富民清真食品有限责任公司、北京市顺义区北京奥鑫牧业有限公司、北京市顺义区北京高特牧业有限公司；６０只湖羊母羊血样采自浙江省余杭湖羊场；４８只多赛特和４８只特克塞尔母羊血样均采自北京高特牧业有限公司。颈静脉采血，所采血样均为１０ｍＬ／只，用柠檬酸葡萄糖抗凝，－２０℃冻存。用酚氯仿抽提法提取基因组ＤＮＡ，溶于ＴＥｂｕｆｆｅｒ（ＴｒｉｓＨＣｌ１０ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０），ＥＤＴＡ１ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０），４℃保存。１．２ 主要试剂限制性内切酶犃狏犪Ⅱ购自纽英伦生物技术（北京）有限公司（ＮＥＢ生产），犜犪狇ＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰｓ、ｐＧＭＴ载体、ＤＮＡ片段回收纯化试剂盒等均购自北京天根生物技术有限公司。１．３ 犉犲犮犅基因的检测与分型采用ＰＣＲＲＦＬＰ方法检测犉犲犮犅基因型，具体方法和步骤参见Ｃｈｕ等［１２］。１．４ 微卫星分析微卫星３００犝的引物序列引自Ｍｕｌｓａｎｔ等［１］。Ｆｏｒｗａｒｄ：５′ＧＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＧＴＡＧＧＴＴＴＧＴＧ３′；Ｒｅｖｅｒｓｅ：５′ＧＧＡＡＧＴＧＣＡＧＡＧＡＧＴＣＣＣＡＴＡＣ３′。引物由上海英骏生物技术有限公司合成。ＰＣＲ扩增体系为１２．５μＬ，其中１０ｐｍｏｌ／μＬ上下７８中国农业大学学报２００９年第１４卷 游引物各１．０μＬ；５０ｎｇ／μＬＤＮＡ模板３．０μＬ；２×犜犪狇ＰＣＲＭａｓｔｅｒｍｉｘ６．２５μＬ，Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ专用超纯水１．２５μＬ。ＰＣＲ扩增条件：９５℃５ｍｉｎ；９５℃３０ｓ，５９℃３０ｓ，７２℃１５ｓ，共３４个循环；最后７２℃７ｍｉｎ；４℃保存。产物用１．５％（狑）琼脂糖凝胶电泳检测。取ＰＣＲ产物５μＬ经１２％（φ）（３９∶１）聚丙烯酰胺凝胶电泳，以ｐＢＲ３２２／ＭｓｐⅠＤＮＡＭａｒｋｅｒ为参照，电泳结束银染显色。用凝胶成像系统ＡｌｐｈａＩｍａｇｅｒＴＭ２２００ａｎｄ１２２０ＤｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｓｔｅｍｓ（ＡｌｐｈａＩｎｎｏｔｅｃｈＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ